1 1er Congreso Argentino de Biorreología (CAB2012) V Jornada Dr. Rodolfo J. Rasia de Física Aplicada a la Biomedicina

2 EXPRESIONES DE DC44 EN TEJIDOS PERIAPICALES CONTAMINADOS. Siragusa,Martha 1; Dietrich, Gustavo A 1; Pisterna, GabrielaV,1; D´Arrigo, Mabel 2 1-Cátedra de Endodoncia, Facultad de Odontolgía(UNR). 2Area Química AnalìticaClínica.Fbioyf (UNR). E-mail; [email protected]

3 La periodontitis apical, es un proceso inflamatorio de los tejidos periapicales, originados por causa bacteriana. Estos procesos son consecuencia de la muerte pulpar ocasionada por caries. La invasión hacia la zona periapical, reducen las posibilidades antigénicas de erradicar los antígenos, formándose retejidos de granulación abscesos o quistes,

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5 En esta reacción inflamatoria crónica, se ha tipificado la magnitud del daño que involucra a los tejidos de soporte incluyendo al hueso alveolar, con zonas de reabsorciones. Ese tejido granulomatoso compuesto por numerosas células de defensa que incluyen a macrófagos, linfocitos, células plasmáticas y leucocitos polimorfonucleares. La migración de las células inflamatorias, expresadas por la presencia de citoquinas y factores de crecimientos, aumentan la respuesta inflamatoria y juegan un rol importante en el desarrollo de la lesión periapical. La circulación de los linfocitos y su localización en la zona dañada, es el resultado de la interacción en las paredes vasculares entre las células endoteliales y las moléculas de adhesión. Recientemente una nueva interacción entre los linfocitos, el CD44 y su principal ligando del Acido hialurónico, ha sido descripta. Se piensa que esta interacción es responsable de la extravasación linfocitaria hacia la zona de respuesta. El CD44 es un ligando hialuronato carbohidrato que haría rodar a los linfocitos hacia las células endoteliales. Esta adhesión patológica es utilizada para activar la extravasación de las células T desde el torrente sanguíneo hacia el sitio de la inflamación. El Hialuronato es (AH) es un glucosaminoglucano encontrado en la matrix extracelular y se involucra en numerosos procesos biológicos. El AH expresa sus funciones en la señalización sobre la superficie de las células y su receptor CD44.

6 A pesar de que este mecanismo todavía no está bien analizado, el mecanismo de señalización AH –CD44. El AH ha modulado los mecanismos de adhesión celular, la movilidad, la proliferación y diferenciación celular que pueden ocurrir en etapas de salud, formación tumoral y metástasis, inflamación y en remodelación tisular. Estudio previos han demostrado niveles de CD44 en tejido pulpar sano e inflamado, comparándolo tejido sano con procesos inflamatorios cerrados y abiertos

7 OBJETIVOS: El objetivo de este trabajo fue medir los niveles de CD44 en tejidos periapicales inflamados, comparados con tejidos pulpares sano y enfermos El objetivo de este trabajo fue medir los niveles de CD44 en tejidos periapicales inflamados, comparados con tejidos pulpares sano y enfermos

8 Materiales y Métodos. Muestras de tejidos granulomatosos periapicales fueron recolectados del Servicio de Cirugía de la Facultad de odontología de Rosario, previo consentimiento firmado. La edad de los pacientes osciló entre 18 y 45 años, no se tubo en cuenta el sexo. Se seleccionaron piezas dentarias con ápices completamente desarrollados. Se excluyeron del estudio aquellos pacientes con enfermedades sistémicas que pudiesen interferir en el proceso de reparación. En las muestras, el tejido granulomatoso fueron removidos con un bisturí Nº 16.Todas las muestras fueron almacenadas en solución fisiológica colocadas en un tubo Eppendorf y frisadas a -32ªC hasta el momento de su uso y fueron empleadas para investigar los niveles de solubilidad del receptor hialuronato CD44 Muestras de tejidos granulomatosos periapicales fueron recolectados del Servicio de Cirugía de la Facultad de odontología de Rosario, previo consentimiento firmado. La edad de los pacientes osciló entre 18 y 45 años, no se tubo en cuenta el sexo. Se seleccionaron piezas dentarias con ápices completamente desarrollados. Se excluyeron del estudio aquellos pacientes con enfermedades sistémicas que pudiesen interferir en el proceso de reparación. En las muestras, el tejido granulomatoso fueron removidos con un bisturí Nº 16.Todas las muestras fueron almacenadas en solución fisiológica colocadas en un tubo Eppendorf y frisadas a -32ªC hasta el momento de su uso y fueron empleadas para investigar los niveles de solubilidad del receptor hialuronato CD44

9 En las reacciones de aglutinación, la estimación de especificidad y de título anticuerpo se realizó en base a la competencia entre antígeno particulados y solubles por los sitio de combinación. Se combina primero el ligando con el receptor soluble, inhibiendo luego la adhesión ( aglutinación) indirecta de células indicadoras. Se usaron como reactivos Bromelina (Sigma.B22.52; Sigma, St Louis, MO), buffer fosfato salino (PBS), hyaluronato (Sigma-Aldrich H 1876; ácido hialurónico como sales de sodio provenientes del cordón umbilical, y anti-D (laboratorios Wiener). El tejido periapical fue lisado. En una primera etapa el material liado en dilusiones geométrica de ;1;1;1:2;1;4; 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, y 1:512) y fueron incubados durante 12hs a 4ªC. Posteriormente se midió la actividad del hialuronato no neutralizado a través de su acción adherente sobre el sistema revelador

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11 Indicadores celulares. Para prevenir interferencias en la lectura, se trabajó con eritrocitos del mismo grupo sanguíneo (ABO)- compatible con el mismo factor rh de cada paciente. Las muestras usadas fueron bromelizadas con un volumen y medio de bromelina a una concentración de 5mg/ml a un volumen de glóbulos rojos incubados durante 15 minutos a 37ªC.Luego los glóbulos rojos fueron lavados 3 veces en PBS y se suspendieron al 2% del mismo medio e incubados en un refrigerador durante 24hs, Score 10 +++ 1 a 3 aglutinados grandes Score 8 ++ 3 a 10 aglutinados Score 5 + más de 10 aglutinados Score 2 ± trazas Score 0 - sin agutinación. El análisis estadístico se realozó con el test Kruskall-Wallis

12 Table Nº1 IdentificationGeometric dilutionSensitivity parameter N°ProcessBlood GroupP248163264128256   as 115 ApicalO+-±±++-±±±0,0024921 112ApicalO++++±±+++±±0,0118203 116ApicalO++++++++ +±±±0,0165859 111ApicalA+++ ±+±±---0,0133125 120ApicalO++++ ±±+±±±-0,0161718 BApicalA+-++±-±----0.004625 CApicalO+-+++++±±±±0,0063046 AApicalO++++±±±----0,011375 121ApicalO++++++±±±-±±-0,0149218 151ApicalO+-+++ ++++±0,00975 152ApicalO++++++ ++±±±±0,0170546 MApicalA++++ +++++ ++ 0,0196562 160ApicalA++++++ +++±±±0,0171484 161ApicalO++++ ++ +++++ 0,0190937 162ApicalA-+++ ++++±±0,0195078 163ApicalO++++ +++ +±±±0,0183359 FApicalA+++ ++++±±±0,0144609 DApicalA++++++++++++++±±0,0180703 156ApicalO+++++++++-±- +0,015832 157ApicalO++++±±++---0,0102187 154ApicalO++++±±±-±+-0,0099453

13 Table Nº 2 Process Apical Healthy Closed Open symptomatic asymptomatic Mean 0.0136516 0.0037093 0.0125013 0.0196367 Median 0.0149218 0.00275 0.008 0.00935935 Standard deviation 0.00498304 0.00197565 0.0212762 0.0346873 Interquartile range 0.0069297 0.004 0.0067852 0.0078515 Table Nº 3 Process N= Average Range Homogeneous group Apical 21 66.90 * Healthy 10 15.1 * Closed Symptomatic 28 43.68 * Open Asymptomatic 36 49.47 * *

14 Sensitivity Parameter Open asymptomatic Closed symptomatic Apical Healthy 00.030.060.090.120.15

15 Discusión *En este trabajo se analizaron 28 muestras biológicas de tejido de granulación proveniente de piezas dentarias extraídas con diagnóstico de procesos de muerte pulpar con compromiso periapical. * Se determinaron niveles de CD44. *Sometidos a los test estadísticos se concluye que las diferencias son significativas entre los grupos de procesos periapicales y los procesos inflamatorios pulpares. *Los resultados concuerdan con los trabajos de Tasman, quienes demostraron altos niveles de expresión de CD44 tanto en las paredes endoteliales de los vasos como en el tejido conectivo, participando en la convocatoria y organización de especialmente de mononucleares y linfocitos elementos. *A pesar de haber observado marcada sensibilidad del CD44.y que se demuestra su participación en los procesos inflamatorios y de migración celular, nuevos estudios deberían seguir realizándose.

16 Futuro ?????? Posibilidad curativa del Acido Hialurónico Posibilidad curativa del Acido Hialurónico en: en: Procesos Regenerativos Procesos Regenerativos Procesos Reparativos Procesos Reparativos

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18 Modelo experimental

19 Bicentenario de la creación de la Bandera Nacional 1812-2012.