1 António, Camilo Bruno1, Militão, Elias Amadeu2 e Buchir, Joelma Leao3Detecção Molecular de Organismos Meneticamente Modificados Em Produtos Alimentares Comercializados Na Cidade de Maputo António, Camilo Bruno1, Militão, Elias Amadeu2 e Buchir, Joelma Leao3 e 1 Departamento de Ciências Biológicas, Faculdade de Ciências da UEM, 2 Departamento de Ciências Biológicas, Faculdade de Ciências da UEM, 3Centro de Biotecnologia da UEM INTRODUÇÃO A biotecnologia no geral e a tecnologia do ADN recombinante em particular são utilizados para produzir (plantas, animais e microrganismos) com características distintas dos seus semelhantes. Os organismos geneticamente modificados (OGMs) são organismos vivos (plantas, animais ou microrganismos) cujo material genético foi alterado por meio de engenharia genética, esses são obtidos pela adição de um ou mais genes exógenos com o objectivo de melhorá-los geneticamente fornecer uma maior produção, obter um produto com características de resistência a doenças, a pragas, condições ambientais adversas ou ainda obter variedades nutricionalmente enriquecidas. De 1996 a 2014 um aumento considerável de 120 vezes foi verificado na área de plantio de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs), onde cerca de 28 países são produtores de OGM, dos quais 20 são países em desenvolvimento e 8 países desenvolvidos ou industrializados, os Estados Unidos da América lideram a produção mundial de OGMs com cerca de 69.0 milhões de hectares, seguido pelo Brasil com cerca de 30.3 milhões de hectares, a China com cerca de 3,9 milhões de hectares e a África do Sul com 2.3 milhões de hectares. O milho e a soja são as culturas geneticamente modificadas mais cultivadas no mundo e representam o principal constituinte de vários alimentos. Para detectar a presença de OGMs em matéria-prima ou em produtos processados, e usado PCR o método mais comummente aplicado, devido a sua alta sensibilidade e especificidade para a amplificação. Detectar a presença de organismos geneticamente modificados em produtos alimentares comercializados na cidade de Maputo contendo milho e/ou soja na sua composição; Identificar a presença do promotor P35S em produtos comercializados na Cidade de Maputo; Identificar a presença de eventos de milho (MON863 e TC1507) e soja (RR) geneticamente modificados em produtos comercializados na Cidade de Maputo. Objectivos 1 METODOLOGIA Amostragem As amostras de alimentos contendo milho e/ou soja na sua composição foram adquiridos nos supermercados da cidade de Maputo em Após a aquisição das amostras, estas foram transportadas para o Centro de Biotecnologia da Universidade Eduardo Mondlane (CB-UEM) onde foram armazenadas em lugar (prateleira) fresco e seco. Extracção de AND Para a extracção de ADN das amostras foi utilizado o método CTAB (Brometo de hexadecil-trimetil-amónio) (Van den Eede et al, 2000). Os controlos ambientais e de extracção de ADN também foram inclusos utilizando água destilada. Quantificação do AND Após a extracção do ADN as amostras foram quantificadas usando gel de agarose a 1.5%. Amplificação do ADN por PCR as amostras de soja em sua composição foram amplificadas com os promotores específicos para o gene de referência da lectina e milho com gene Adh. Para o rastreio de material transgénico nas amostras foi usado o promotor P35S. Para a detecção de de eventos especificos (soja e milho) foram usados iniciadores específicos de modificação genética (RR para soja GM e MON 863 e TC1507 para milho GM). RESULTADOS Foram analisadas amostras, 2 contendo somente soja na sua composição, 14 contendo somente milho na sua composição e 11 contendo milho e soja na sua composição, totalizando 24 amostras. OS resultados demonstraram que das amostras analisadas, 14 mostraram se positivas para o gene Lec da soja e 8 para o gene Adh do milho. Das 14 amostras contendo o gene Lec da soja somente 2 foram positivas para o evento RRS e das 8 que continham o gene Adh do milho 6 foram positivas para o evento Mon 863, 1 foi positiva para Mon 863 e TC1507 e nenhuma foi positiva para o evento TC 1507 Local de colheita Código amostra Resultados de soja Rastreio Resultados de Milho No. da amostra Lec RRS P35S Adh Mon 863 TC1507 CM 5 + - CM 7 CM 8 CM 9 CM 13 CM 17 CM 18 CM 20 CM 24 CM 25 CM 26 CM 27 Cidade de Maputo M-marcador de peso molecular, 1 a 13- amostras, CA- controlo de ambiente e CE- controlo de extracção Fig. 1 – Electroforese em gel de agarose (1,5%) do ADN genómico extraído das amostras, pelo método CTAB. Local de colheita Resultados de Milho No. da amostra Adh P35S Mon 863 TC 1507 CM 1 - CM 2 + CM 3 CM 4 CM 6 CM 10 CM 11 CM 12 CM 14 CM 15 CM 16 CM 21 CM 22 CM 23 DISCUSSÃO A extracção do ADN é a etapa crucial para a detecção de transgénicos em amostras. Segundo Costa et al. (2010), a escolha do método de extracção é crucial para o sucesso da determinação do transgénico tanto para a detecção qualitativa como para a análise quantitativa. Segundo (Cardarelli et al., 2005; Greiner et al., 2005 e Kakihara et al.,2006), a eficiência do método CTAB não é só em matéria-prima, como também em produtos alimentares com alto nível de processamento como no presente estudo. Outros estudos ainda enfatizam a utilização do método CTAB na extracção de ADN de amostras animais. A lecitina foi detectada em todas as amostras, confirmando que todas as amostras continham soja na sua composição. Estes resultados estão de acordo com os resultados apresentados por (Faustino et al., 2009), que verificaram a presença do gene da lectina, em todas amostras de salsichas, Purity e outros. De igual modo (Ferreira et al., 2009), detectaram o gene da lecitina em todas as amostras de Marilan, bolachas e carne processada. A presença de TC1507 e Mon 863 foi detectada por PCR específica das amostras positivas para milho GM. Zdjelari et al. (2013) analisaram 89 alimentos contendo soja e milho, 25 foram positivos para presença do gene Adh, 20 foram positivos para amplificação com os iniciadores TC1507 e Mon863. Cidade de Maputo Foi observada somente em 8 amostras com a presença do promotor P35S. O evento RR da soja foi detectado em 2 amostras e os eventos de milho Mon 863 e TC 1507 foram detectados em 6 amostras CONCLUSÕES