1 Metody diagnostyki zakażeń wirusowych i techniki badań wirusologicznych

2 Bezpośrednie wykrywanie zakażeń wirusowych przez:Stwierdzenie obecności (izolacja) i identyfikacja wirusa Stwierdzenie obecności wirusowego antygenu Stwierdzenie obecności wirusowego kwasu nukleinowego Wykazanie swoistej funkcji - zakaźności

3 2.Pośrednie wykrywanie zakażeń wirusowychwykrycie i badanie poziomu specyficznych przeciwciał antywirusowych badanie aktywności mechanizmów odpornosci komórkowej

4 Izolacja i namnażanie Identyfikacja Wirusa izolowanego in vitroW materiale bezpośrednim

5 Izolacja i namnażanie wirusów kręgowców

6 Izolacja i namnażanie wirusów kręgowcówMateriał używany do izolacji wirusów: płyny ustrojowe wydaliny i wydzieliny zeskrobiny płyny ze zmian pęcherzowych skrawki śródoperacyjne i bioptaty próbki tkanek pobierane post mortem

7 2. Sposoby namnażania wirusów:w zwierzętach laboratoryjnych (próba biologiczna) w zarodkach ptaków w hodowlach komórkowych

8 Namnażanie wirusów w zwierzętach laboratoryjnychZwierzęta używane do eksperymentów: małe gryzonie (myszy, szczury, chomiki) króliki naczelne (rhesusy i szympansy)

9 Namnażanie wirusów w zwierzętach laboratoryjnych2. Drogi podawania materiału zakaźnego: domózgowo dootrzewnowo donosowo dożylnie domięśniowo

10 Namnażanie wirusów w zarodkach ptakówZarodki używane do zakażeń: najczęściej stosowane są 7-11 dniowe zarodki kurze 2. Drogi podawania materiału zakaźnego: na błonę kosmówkowo-omoczniową do jamy owodni do woreczka żółtkowego do ciała zarodka (dożylnie, domózgowo)

11 Objawy wirusowego zakażenia zarodka kury:zmiany w wyglądzie ciała zarodka (przekrwienia, wybroczyny, deformacje) często śmierć zarodka wirusowe ogniska na błonach zarodka zmiany właściwości płynów w jaju (np. mogą nabierać właściwości hemaglutynujących)

12 Wirusowa hemaglutynacja czylizlepianie czerwonych krwinek za pośrednictwem wirusa w widoczne gołym okiem agregaty

13 Namnażanie wirusów w hodowlach komórkowychRodzaje hodowli stosowanych do namnażania wirusów: pierwotne półciągłe ciągłe Źródła komórek używanych do hodowli komórkowych: tkanki embrionalne tkanki nowotworowe tkanki dojrzałe

14 Przejawy zakażenia hodowli komórkowej – efekt cytopatyczny CPENormalna hodowla fibroblastów zarodka kury Przejawy zakażenia hodowli komórkowej – efekt cytopatyczny CPE rozsiany syncytialny miejscowy (łysinka)

15 Identyfikacja wirusa

16 W materiale bezpośrednimIzolowanego in vitro

17 Badanie mikroskopowe mikroskop świetlny – ciałkawtrętowe cytoplazmatyczne i wewnątrzjądrowe mikroskop elektronowy - wiriony c. w. cytoplazmatyczne c. w. wewnątrzjądrowe

18 S Wewnątrzjądrowe ciałka wtrętowe w komórkach linii ED (skóry konia) podczas zakażenia herpeswirusem typu 2 (EHV-2)

19

20 Filo Corona Pox Rhabdo Hepadna Papilloma Orthomyxo

21 W skrawkach mrożeniowychImmunofluorescencja W skrawkach mrożeniowych

22 W zakażonych hodowlach komórkowych Techniki immunoenzymatyczneImmunofluorescencja W zakażonych hodowlach komórkowych Techniki immunoenzymatyczne

23 Wykrywanie i analiza kwasów nukleinowychPCR hybrydyzacja analiza restrykcyjna

24 Nested PCR

25 In situ w skrawku histopatologicznymHybrydyzacja In situ w skrawku histopatologicznym

26 In situ w hodowli komórkowejHybrydyzacja In situ w hodowli komórkowej

27 Hybrydyzacja Na membranie

28 Analiza restrykcyjna