1 BIOMARCADOR Característica medible objetivamente que es evaluada como indicador: proceso biológico normal proceso patológico respuesta farmacológica respuesta a una intervención terapéutica

2 BIOMARCADOR Validación analíticaValidación clínica (pronóstico, predictivo) Utilidad clínica (decisión clínica)

3 BIOMARCADOR Y CÁNCER Diagnóstico A quién tratar Qué tratamiento Cuanta dosis

4 Guías de Consenso elaboradas con el aval científico de la Sociedad Española de Anatomía Patológica y la Sociedad Española de Oncología Médica. Propuestas de expertos Biomarcador recomendado HER2 Cáncer de Mama HER2 (amplificación/expresión) Cáncer Gástrico (amplificación /expresión Biomarcadores en Cáncer de Pulmón EGFR (mutación) ALK (traslocación) Biomarcadores en Cáncer de Colon KRAS/NRAS (mutación) MSI (expresión/microsatélites) Biomarcadores en Melanoma BRAF (mutación)

5 HER2 EN CÁNCER DE MAMA

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15 HER2 EN CÁNCER GÁSTRICO

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18 Algoritmo para la selección de pacientes para trastuzumab en cáncer gástricoMétodo IHQ 0 / 1+ 2+ 3+ negativo equívoco positivo FISH / CISH / SISH negativo positivo

19 HER2 EN CÁNCER GÁSTRICO

20 Diferencias en la interpretación de los tests IHQ/ISH entre cáncer de mama y cáncer gástrico En el cáncer gástrico la inmunoreactividad lateral o basolateral de membrana (en forma de U) se equipara a la inmunoreactividad completa de membrana. La heterogeneidad tumoral es mayor en el cáncer gástrico (4,8%) que en el cáncer de mama (1,4%), aspecto que afecta a los criterios de consenso para las biopsias endoscópicas. Hofmann et al. Assessment of a HER2 scoring system for gastric cancer: results from a validation study. Histopathology 52: , 2008.

21 HER2 EN CÁNCER GÁSTRICO

22 HER2 EN CÁNCER GÁSTRICO

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27 De Roock et al; Lancet Oncol 2010

28 KRAS exon 2 at codons 12 and 13 KRAS exon 3 at codon 61KRAS exon 4 at codon 117 or 146 NRAS exon 2 at codons 12 and 13 NRAS exon 3 at codon 61 Tumors WT for KRAS mutations in exon 2 17% KRAS/NRAS mutations in other codons Douillard et al; N Engl J Med 2013

29 Douillard et al; N Engl J Med 2013

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35 El gen ALK La translocación mas frecuente de este gen es la t(2;15) con el gen NPM (nucleophosmin), anomalía característica de los Linfomas Anaplásicos (92-95%). t(2;11)(p23;p15) con el gen CARS y t(2;4)(p23;q21) con el gen SEC31A, características de los tumores miofibroblásticos inflamatorios. Translocación del gen ALK con el gen EML4 (echinoderm microtubule-associated protein-like 4) t(2;2)(p24;p21) en un 2-5% de pacientes con cáncer de pulmón no microcítico.

36 TTF1 ALK ALK

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42 CRITERIOS DE CALIDAD EN LA DETERMINACIÓN DE BIOMARCADORES

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44 Tipos de melanomas - Melanoma de extensión superficial (60-70%)Léntigo maligno melanoma (5-10%) Melanoma lentiginoso acral (5-10%) Melanoma nodular (15-30%) Los tres primeros tienen una fase de crecimiento radial, que puede durar de semanas a años. El melanoma nodular, sólo tiene fase de crecimiento vertical.

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46 Biología Molecular en el Melanoma : Múltiple Entidades TumoralesBRAF CyclinD1 KIT cKIT GNAQ ??

47 FACTORES PRONOSTICOS TIPO DE MELANOMA NIVEL DE CLARKESPESOR DE BRESLOW ULCERACIÓN REGRESIÓN FASE DE CRECIMIENTO METÁSTASIS MITOSIS

48 Anti B-RAF Vemurafenib, DabrafenibAnti CTLA-4  Ipilimumab Anti-PD1/PDL1  Lambrolizumab, Nivolumab, MPDL3280

49 Mutated BRAF The role of “V600”Receptor tyrosine kinase Growth factor Cell membrane RAS MEK ERK Abnormal cell growth BRAF mutation A single codon mutation (V600) in the gene for the BRAF protein leaves it “switched on” Mutated BRAF is present in many cancers: >50% melanomas ~10% colorectal ~8% all solid tumors Co-desarrollo de un diagnóstico validado (Roche Molecular Diagnostics) permite la selección de la población objetivo apropiado Una mutación única del codón (V600) en el gen de la proteína BRAF lo deja activado BRAFV600E es la mutación BRAF más frecuente (90%) La sustitución del ácido glutámico por valina en la posición 600 (V600E) de la cadena de la proteína BRAF conduce a la actividad de la cinasa constitutiva Excessive cell proliferation and survival Nucleus

50 Muestras: mutados: 40,3%* inválidos: 1,2%* Resultados acumulados:576 positivas 875 negativas 14 pendientes 19 inválidos 6 no analizables 23 no evaluables mutados: 40,3%* 1504 muestras BRAF enviadas a Biomarker Point 147 centros usuarios activos inválidos: 1,2%* *datos % de mutados sobre número muestras enviadas sin tener en cuenta dobles pruebas No analizable: la muestra no ha llegado en buen estado. No evaluable: la muestra recibida no es adecuada para el análisis. Inválido: la técnica no ha ofrecido un resultado con el análisis,

51 Inicio de la plataforma GSK:1/6/2014El kit THxIDTM-BRAF AMP (bioMérieux) es un reactivo de diagnóstico in vitro diseñado para la detección cualitativa de las mutaciones V600E y V600K del gen BRAF a partir de ADN extraído de muestras de melanoma humano fijadas en formol e incluidas en parafina. La metodología utilizada se basa en la PCR a tiempo real y se lleva a cabo en el sistema ABI 7500 Fast Dx. Inicio de la plataforma GSK:1/6/2014 Nº de determinaciones 26 5 casos con mutación V600K 9 casos con mutación V600E 12 casos sin mutación

52 El análisis estadístico de los datos demuestra que la sensibilidad de la inmunohistoquímica es del 100% y la especificidad del 97%.

53 IHQ anti-BRAFV600E: expresión homogénea. De forma sorprendente un 37´5% mostraron metástasis ganglionares nativas. 53

54 MELANOMA PRIMÁRIO METÁSTASIS POSITIVO INTENSO POSITIVO DÉBILIHQ anti-BRAFV600E POSITIVO INTENSO IHQ anti-BRAFV600E POSITIVO DÉBIL IHQ anti-BRAFV600E . De forma sorprendente un 37´5% mostraron metástasis ganglionares nativas. NEGATIVO IHQ anti-BRAFV600E 54

55 ALGORITMO DE DETERMINACIÓN DE MUTACIONES DE BRAFNo hay heterogeneidad Intra- o Inter-tumoral de la mutación BRAFV600E La inmunohistoquimica es un método sensible y especifico para la identificación de BRAFV600E, sin embargo, los casos negativos deberían ser analizados por métodos moleculares (V600K) Los métodos de moleculares pueden generar falsos negativos, principalmente en muestras con baja celularidad tumoral. IHQ 50% Mutado Nativo Tratamiento RT-PCR Mutado Nativo Tratamiento SEC

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57 Implementación de los biomarcadores en la práctica clínicaPara un centro oncológico imprescindible acceso a un Servicio de anatomía patológica / laboratorio de biología molecular Resultados disponibles en un tiempo adecuado Cada Institución debe desarrollar su propia estrategia multidisciplinaria de como obtener tejido tumoral y como procesarlo El flujo dependerá de la organización y estructura de cada Institución y de la localización de los recursos El comité de tumores, mejor estrategia para conseguir un abordaje multidisciplinario El papel del patólogo, relevante Se deben discutir los casos antes de abordajes invasivos, re-biopsias Es un foro para discutir nuevos avances

58 Implementación de los biomarcadores en la práctica clínicaEn España, se analizan los principales marcadores predictivos (RAS, BRAF, EGFR, ALK) Para los centros sin laboratorio molecular, las muestras se pueden enviar a laboratorios/plataformas centrales (soporte de la industria farmacéutica) Necesidad de una organización que garantice la realización de los biomarcadores Conocimiento resultados Participación en controles de calidad Facilitar colaboración / investigación clínica Implementación nuevos biomarcadores

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60 La Plataforma de Biomarcadores SEAP-SEOM. Acciones realizadasHasta el momento se han realizado diversas acciones para la puesta en marcha y desarrollo de la Plataforma PBC SEAP-SEOM Incluyendo actividades de difusión externa, contacto con los principales agentes involucrados en los aspectos regulatorios, sanitarios y productivos del desarrollo y aplicación del análisis de biomarcadores en cáncer. Reunión MSSSI Reunión MSSSI Solicitud de propuestas plataforma informática y gestión flujo de muestras Apertura del plazo de expresiones de interés para participar como centros prestadores de servicios a terceros Creación del grupo de trabajo sobre aspectos técnicos Creación del grupo de trabajo para la evaluación de «Centros de referencia PCB» Finalización del plazo de presentación de expresiones de interés para participar como centros prestadores de servicios a terceros Reunión ISCIII Creación del grupo de trabajo sobre aspectos legales. Servicios de consultoría para la constitución de la Plataforma Creación del «Comité Ejecutivo PCB» Reunión del «Comité Ejecutivo PCB» Nov 13 Ene 14 Feb 14 May 14 Jul 14 Sep14

61 SEOM Dra. Pilar Garrido Dr. Luis Paz-Ares Dr. Ramón Colomer Dr. Fernando Rivera Dr. Alfonso Berrocal Dr. Ramón Salazar Dr. M Martin Dr. J Albanell Dr. Javier Puente Dr. JM Tabernero Dra. E Felip 1. Contexto y antecedentes Las sociedades SEAP-SEOM constituyeron el Grupo de Trabajo en Biomarcadores, con el fin de explorar iniciativas conjuntas para el desarrollo del análisis de biomarcadores en cáncer. SEAP Dr. José Palacios Calvo Dr. Miguel Ángel Piris Dr. Eduardo Salido Matías-Guiu Dr. Xavier Dr. Javier Gómez Román Dr. Enrigue de Álava Dr. José Luis Rodríguez Peralto Dr. Santiago Ramón y Cajal Rojo Todo Dr. Federico

62 La Plataforma de Biomarcadores SEAP-SEOM. DescripciónLa Plataforma de Biomarcadores en Cáncer es una iniciativa conjunta de las sociedades profesionales SEAP-IAP y SEOM que nace con la vocación de ser un proyecto inclusivo. Aspira a la participación de todos aquellos centros asistenciales interesados en colaborar en él, con el fin último de promover y facilitar la aplicación de las técnicas de análisis de biomarcadores en indicaciones terapéuticas en cáncer. Para ello es imprescindible disponer de una herramienta que permita la inclusión de la información derivada de la aplicación de estas técnicas. Base de datos de biomarcadores Centros clientes Centros que realizan análisis de marcadores in-house Centros prestadores de servicios de análisis de biomarcadores

63 Promover y participar en actividades de investigación. SERVICIOS DE CONSULTORÍA: ASCENDO CONSULTING La Plataforma será gestionada por una entidad jurídica sin ánimo de lucro constituida por las dos sociedades profesionales bajo la fórmula de fundación. Capacidad para captación de fondos y celebración de acuerdos de colaboración con los distintos agentes implicados en la determinación de biomarcadores de valor terapéutico. Promover y participar en actividades de investigación. Desarrollar actividades formativas propias. Participación en la elaboración de informes, guías, y otras actividades de difusión y transferencia del conocimiento.

64 Destinatarios de serviciosEstructura organizativa tentativa de la Plataforma de Biomarcadores SEAP-SEOM Fundación para el Desarrollo de la Plataforma de Biomarcadores SEAP-SEOM Patronato Comisión Ejecutiva Comisión de Investigación y Calidad Unidad Técnica Destinatarios de servicios Internos Externos Centros asistenciales Centros de investigación Farma Administración Proveedores de bienes y servicios Plataforma web CRO/mensajería Empresas de diagnóstico (kits)