1 (Bos taurus) EN EL TRÓPICO HÚMEDOEVALUACIÓN DE DOS DILUYENTES CASEROS Y UN DILUYENTE COMERCIAL PARA CRIOPRESERVAR SEMEN BOVINO DE LAS RAZAS BROWN SWISS Y PATUA (Bos taurus) EN EL TRÓPICO HÚMEDO AUTORA: PALACIOS RAMÍREZ LISBETH FABIOLA DIRECTOR: Dr. FREDY CARRERA MSc. CODIRECTOR: Dr. FÉLIX VALDIVIESO
2 Desconocimiento de biotécnicas reproductivas (I.A.) (T.E.)introducción Bancos genéticos Medina-Robles (2006) Criopreservación Ramos (1996). Economía Castelo (2008) Diluyentes adecuados Gadea (2003) Desconocimiento de biotécnicas reproductivas (I.A.) (T.E.) INEC, en el 2013 existe un total de bovinos nacidos Evaluar dos diluyentes caseros y un diluyente comercial para criopreservar semen bovino de las razas Brown swiss y Patua (Bos taurus) en el trópico húmedo.
3 OBJETIVOS Evaluar dos diluyentes caseros (Triladyl y EYC) y un diluyente comercial (Andromed) para criopreservar semen bovino de la raza Brown swiss y Patua (Bos taurus) en el trópico húmedo. Determinar parámetros de motilidad del semen pre y post descongelación con el fin de evaluar la efectividad de los distintos diluyentes de un eyaculado de toros de raza Brown swiss y Patua (Bos taurus). Evaluar los diluyentes utilizados en parámetros de morfología, concentración, viabilidad y funcionalidad de membrana (test HOST) a nivel espermático.
4 métodos Patua (Bos taurus) Brown swiss (Bos taurus)Diluyente comercial (Andromed)diluyentes caseros (Triladyl y EYC) 0 hora 1 hora 2 hora Evaluación luego de haber sido recolectada o descongelada la muestra
5 FACTORES Y NIVELES A PROBARSemen bovino (S). S1 = Teutón (Brown swiss). S2 = Manuelito (Patua). Diluyentes (D). D1 = Yema de huevo citrato (EYC) (casero). D2 = Triladyl (casero). D3 = Andromed (commercial).
6 TRATAMIENTOS A COMPARAR4 Repeticiones
7 Características de la unidad experimentalDiseño Experimental Esquema Bifactorial AxB conducido en Diseño Completamente al Azar. Características de la unidad experimental 24 unidades experimentales, cada unidad experimental contiene 1 ml de diluyente (casero o comercial) más 0,5 ml de semen de toro de raza Brown swiss o Patua (Bos taurus).
8 ANÁLISIS ESTADÍSTICO Fuente de variación G.L. A 2 B 1 AxB Error 21Total 23 Para el análisis estadístico se utilizó el programa R3.0,2. Para los gráficos y análisis de funciones se utilizó los paquetes agricolae y sciplot .
9 METODOLOGÍA Preparación del montadero Impresión de pajuelasLimpieza y desinfección de laboratorio Código 1TA
10 DILUYENTES-PREPARACIÓNTriladyl Andromed Yema de huevo y citrato (EYC)
11 Armado de la vagina artificialPreparación del laboratorio
12 Recolección de semen bovinoBrown swiss Patua
13 Protocolo de congelamiento de semenEnvasado Diluyente
14 Curva de congelamientoProtocolo de congelamiento de semen Nitrógeno líquido Curva de congelamiento Ice Cube
15 EVALUACIÓN DE SEMEN FRESCOEvaluación macroscópica de semen fresco pH Color Olor Concentración espermática Cuerpos extraños Volumen
16 Evaluación microscópica de semen fresco/congelado-descongeladoEvaluación de la motilidad CASA
17 Evaluación microscópica de semen fresco/congelado-descongeladoViabilidad Test Host Morfología
18 Evaluación microscópica de semen fresco/congelado-descongeladoVivos y muertos Funcionalidad de membrana
19 RESULTADOS
20 Promedio de los parámetros de evaluación.EVALUACIÓN MACROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN. Promedio de los parámetros de evaluación. Donadores Volumen ml. Concentración 106 Color Olor pH Teutón 4,25 750 lechoso-cremoso característico 7 Manuelito 3,75 761,5 Rosenberger 1981 Krause y Dittmar (1962) Jeyendran, Van der Ven, Pérez, Grabo y Zaneveld (1984)
21 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNMotilidad total 9a 9b Aamdal y col, (1968) velocidades descongelamiento Galina y Valencia (2006) lesiones no inmedias
22 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNMotilidad progresiva a ab b (Salisbury, Vandemark y Lodge, 1978) %mayor 50 no son buenos en semen fresco
23 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNMotilidad local 11a 11b (Pickett y Berndtson (1978) mejor proteína vegetal. Müller-Schlösser et al. (2001) no diferencias entre diluyentes proteína vegetal y animal
24 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNVelocidad Curvilínea de Espermatozoide (VCL) 12a 12b Catena y Cabodevila, (1999) valores disminuyen luego de criopreservación
25 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNVelocidad Media de Espermatozoides (VAP) 13a 13b Quintero-Moreno, (2003) subpoblaciones con diferente velocidad
26 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNVelocidad Rectilínea de Espermatozoides (VSL) 14a 14b Liu et al., (1991); Vázquez et al., VCL mayor que VSL bajo nivel de fertilización
27 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNÍndice de Linealidad de Espermatozoides (LIN) Holt y Van Look, (2004) subpoblaciones con mejor velocidad
28 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNÍndice de Rectitud de Espermatozoides (STR) 16a 16b Holt y Van Look, (2004) subpoblaciones con mejor velocidad.
29 Frecuencia de Batida de Espermatozoides (BCF)EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓN Frecuencia de Batida de Espermatozoides (BCF) (Brogliatti, 2005) valores altos incrementan tasa de fertilidad
30 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNAmplitud Media del Desplazamiento Lateral de la Cabeza de Espermatozoides (ALH) Shanis et al. (1989) en presencia de moco cervical, el ALH disminuye mientras que el BCF aumenta para ayudar a la penetración de la célula espermática.
31 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNViabilidad. 19a 19b Thomas et, al. (1998) disminución del 50% de la viabilidad espermática
32 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNMorfología Chenoweth (1997) el 70% de los espermatozoides bovinos evaluados deben ser normales (Davies, Hall, Hibbit y Moore, 1975) a mayor número de anormalidades pre y post-congelación disminuye la capacidad fértil de los espermatozoides.
33 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA PRE CONGELACIÓN Y POST DESCONGELACIÓNTest Host. (Jeyendran et al., 1984) funcionamiento de la membrana plasmática es un parámetro indicador de la capacidad fecundante de los espermatozoides
34 CONCLUSIONES Los toros (Bos taurus) utilizados en la investigación presentaron características similares en cuanto a volumen, pH, y concentración espermática. En cuanto a la motilidad espermática evaluada mediante el sistema CASA esta fue mayor para Andromed seguido por EYC para semen fresco, mientras que para semen congelado/descongelado Andromed ofrece mejor protección a las células espermáticas. El eficiente uso y fácil preparación de Andromed, hacen que la lectura espermática en el sistema CASA sea óptima obteniendo resultados totalmente confiables, al no contener partículas de yema de huevo como los diluyentes Triladyl y EYC. En cuanto a la viabilidad espermática luego del proceso de descongelación el diluyente que mayor porcentaje de supervivencia celular proporcionó fue Andromed, ya que se obtuvo mayor cantidad de células espermáticas vivas. La funcionalidad de la membrana plasmática de las células espermáticas (test Host) fue mayor con el diluyente Andromed en el descongelamiento celular.
35 RECOMENDACIONES Los toros seleccionados deben tener una alimentación adecuada a base de pasto, agua y sales minerales, además deben estar totalmente libre de enfermedades para lograr muestras de semen con valores normales y confianza en su uso en programas de IA. Para la preparación de los diluyentes se debe realizar 24 horas previo al proceso de extracción seminal, debido al limitado tiempo entre la colecta de semen y su dilución para así asegurar una buena viabilidad espermática. Es recomendable filtrar el contenido de yema de huevo en la preparación de Triladyl y EYC, para evitar grumos que dificulten la lectura en el sistema CASA evitando con este proceso la lectura errónea del sistema CASA en donde lea los grumos de yema de huevo como células espermáticas muertas proporcionando tasas bajas en cuanto a la motilidad. Realizar en lo posterior investigaciones en la que se comparen diluyentes a base de proteína vegetal, ya que Andromed a base de lecitina de soya ofreció los mejores resultados en cuanto a criopreservación celular respecto del uso de proteínas animales en la preparación de diluyentes seminales.
36 GRACIAS POR SU ATENCIÓN