1 Caracas. Correo electrónico: [email protected].Estudio morfometrico del área mitocondrial en tejido peritumoral y peritumoral en pacientes con adenocarcinoma rectal Osorio-Vega, Héctor L1, Sierra, Sandra D1, González, Roschman A1, Pacheco, Ítalo1, Sardiñas, Carlos2, Finol, Héctor J.1. 1Centro de Microscopía Electrónica “Mitsuo Ogura”. Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela (UCV), Paseo Los Ilustres, Caracas, 2Unidad de Coloproctólogia del Hospital Universitario de Caracas, UCV, Caracas. Correo electrónico: RESUMEN Los Adenocacinomas colorrectales son curables mediante su extracción quirúrgica, sin embargo, luego de la eliminación del tumor, es común que un porcentaje de los pacientes vuelvan a presentar tumoraciones producto de una invasión local del tumor principal que no fue detectada durante la cirugía, usualmente a causa de lo leve de las alteraciones en el tejido afectado. En la presente investigación se buscó describir el comportamiento del parámetro área mitocondrial (cuyos valores extremos son comunes en tejidos neoplásicos) tanto en el tumor principal extraído como en el tejido peritumoral. Con este propósito, Se recolectaron muestras de pacientes diagnosticados con ACC,, las cuales fueron luego procesadas mediante el protocolo usual para microscopia electrónica de transmisión de muestras biológicas. Entre los resultados obtenidos se observó que el tumor presentó alta heterogeneidad para los valores del parámetro estudiado y también el que las mitocondrias se presentaban gravemente alteradas aún en tejidos peritumorales histológicamente bien diferenciados. RESULTADOS Microscopia Electrónica de Transmisión: 0 cm: Célula epitelial con mitocondrias fuertemente edematizadas. Hay perdida total de crestas (Rectángulo anaranjado). 1 cm: Fibroblasto con mitocondrias severamente dilatadas y con perdida parcial de sus crestas (Flecha amarilla). 2 cm: Células epiteliales con mitocondrias con edematizacion moderada, se puede observar cierto polimorfismo (Ovalo rojas). 3 cm: Musculatura lisa. Se pueden ver una mitocondria con ligera perdida de electrodensidad en su zona superior, dilatación parcial y desorganización de sus estructuras internas (Ovalo verde). 4 cm: Célula endotelial con mitocondria ligeramente dilatadas (Circulo negro). Estadística: 0 cm 1 cm 2 cm 3 cm 4 cm INTRODUCCIÓN El cáncer es un conjunto de enfermedades altamente dinámico que causa la alteración celular a nivel metabólico, de capacidad replicativa, interacción con el microambiente, entre otros. En los Adenocarcinomas colorrectales (ACC), cuando se estudian los componentes subcelulares del tejido tumoral y peritumoral, es posible detectar una variedad de alteraciones, sin embargo, las anomalías organelares y en particular, la dilatación mitocondrial están entre las más comunes. Debido a esto, es importante estudiar esta alteración a través del gradiente espacial existente a lo largo del intestino. El diagrama de distribución de la fig. 1 muestra que en el tumor (cm 0), mas del 75% de los valores de área medidos son superiores a 0,2 µm2 . Se puede observar también que en este existe gran variabilidad interna, es decir, la población es altamente heterogénea. El cm 1 contiene valores de menor magnitud con un máximo absoluto poco mayor de 0,4 µm2 y una repentina disminución de la heterogeneidad de los datos. En el caso del cm 2 la mayoría de las medidas se encuentran por debajo de 0,3 µm2 , sin embargo, se puede notar un súbito incremento tanto en los valores como en la variabilidad de los datos en comparación con el cm 1. Para el cm 3 se puede ver que la distribución tiene características en común con el 2, como un rango similar de valores, sin embargo, al contrario del 2, en este la mayoría de los datos se concentran por encima de la mediana. Finalmente, el cm 4 presenta un máximo poco menor que 0,4 µm2 . Se evidencia entonces una caída en el área mitocondrial y en la variabilidad de los datos, sugiriendo de esta forma cierta homogeneidad en la población de este punto. Fig. 1 OBJETIVO Describir mediante el uso de microscopia electrónica de transmisión y estadística, el comportamiento del parámetro “área mitocondrial” a través de los primeros 4 cm peritumorales de los Adenocarcinomas colorrectales muestreados. METODOLOGÍA Muestras de tejido tumoral y peritumoral proveniente de resecciones quirúrgicas, fueron tomadas con el debido consentimiento informado de 3 pacientes, 2 masculinos (♂) y 1 femenino (♀) de 41, 65 y 67 años respectivamente. diagnosticados con ACC en la Unidad de Coloproctólogia del Hospital Universitario de Caracas (UCHUC). Las muestras fueron fijadas con solución Karnovsky (glutaraldehido al 2.5% y formaldehido al 37% en buffer fosfato de Millonig a pH 7,4 y 320 mOsm), lavadas en el buffer y post-fijadas con tetraóxido de osmio al 1%, bajo las mismas condiciones de osmolaridad y pH. Posteriormente, fueron deshidratadas en concentraciones ascendentes de etanol. Luego, el material fue incluido en resina EMBed-812. Los cortes finos fueron obtenidos usando un ultramicrotomo Porter-Blum MT2-B. Las secciones fueron contrastadas con acetato de uranilo y citrato de plomo. Las rejillas se examinaron en un microscopio electrónico de transmisión Hitachi H Los datos fueron recolectados y procesados mediante el uso del software Image Tool for Windows© (Centro de salud de la Universidad de Texas, San Antonio, Texas, Estados Unidos) y el paquete de estadística paleontológica PAST©. Fig. 1: Diagrama boxplot para los valores de área mitocondrial en los centímetros muestreados. Con un p=1.81 E-11 resultante del análisis Kruskal-Wallis, se rechaza la hipótesis nula. En la fig. 2 se muestra que el cm 0, cm 2 y cm 3 son estadísticamente iguales, sugiriendo de esta manera la presencia de alteraciones mitocondriales comparables a las del tumor en el segundo y tercer centímetro peritumoral. Los centímetros 1, 3 y 4 resultaron ser similares también. Fig. 2 Fig. 2: Comparación por pares de Mann-Whitney resultante del ANOVA no paramétrico (Kruskal-Wallis de una vía). CONCLUSIONES Las mitocondrias de mayor área de entre todas las muestreadas se encontraron agrupadas en el tumor. Los centímetros peritumorales pueden presentar subpoblaciones de mitocondrias con iguales alteraciones que las encontradas en el tumor principal. El tumor parece ser el punto de máxima heterogeneidad de entre los grupos muestreados. Los datos recolectados del primer centímetro peritumoral no revelaron ninguna similitud entre las mitocondrias alteradas presentes en el cm 0 o el 2. A partir del cm 2 se puede apreciar la disminución de la magnitud del área a medida que incrementa la distancia al tumor del punto muestreado. Durante la toma de mediciones, 9 datos extremos fueron encontrados en el cm 0 (tumor) con valores de (2,82 – 1,13) µm2 . Estos no fueron incluidos en el ANOVA no paramétrico a fin de evitar el cometer un error del tipo 1. Bibliografía Arismendi-Morillo, G Electron microscopy of the mitochondrial network in human cancer. Int j Biochem Cell B. 41: Henry-Mowatt, J., Dive, C., Martiou, J. C., James, D Role of mitochondrial membrane permeabilization in apoptosis and cancer. Sierra, S. Finol, H. J., Gonzalez, R., Sardiñas, C Ultraestructura peritumoral de pacientes tratados con quimioterapia y radioterapia. Acta. Microsc. 22: