1 Colesterol Total Perfil lipídico: Universidad de Talca Facultad de Ciencias de la Salud Departamento de Inmunohematología y Bioquímica Clínica Nombre: Paula Romero O. Ramo: Bioquímica Clínica II Docentes: MgSc. TM Elba Leiva. MgSc. TM Roxana Orrego MgSc. TM Luis Guzmán 01-octubre-2013

2 Introducción  Compuesto acíclico de 27 carbonos, todos sus carbonos provienen del acetato.  Estructura molecular:  Un núcleo ciclopentanoperhidrofenantreno, con sus cuatro anillos fusionados.  Un grupo hidroxilo en C3.  Un centro insaturado entre C5 y C6.  Una cadena hidrocarbonada ramificada de 8 carbonos unidos al anillo D en posición 17.  Dos grupos metilos en posición 10 y 13, que corresponden a los carbonos 18 y 19.

3 Síntesis de colesterol

4  Destinos del colesterol:  Incorporación en las membranas del hepatocito.  Exportación: colesterol biliar, ácidos biliares, colesterol esterificado.  Regulación de la síntesis de colesterol:  HMG-CoA reductasa.  Efectos hipolipemiantes de las estatinas.

5 Valores para colesterol Dislipidemias  Sin riesgo: >200 mg/dL  Riesgo moderado: 200-239 mg/dL  Alto riesgo:>240 mg/dL  Clasificación:  Dislipidemias primarias (genéticas 4%)  Dislipidemias secundarias (a patologias, a factores ambientales)  Hipercolesterolemia aislada  Hipertrigliceridemia  Dislipidemia mixta.

6 Colesterol total  Método CHOD-PAP. Prueba enzimática colorimétrica para colesterol con factor aclarante de lípidos. Esteres de colesterol + H 2 O colesterol + ácidos grasos Colesterol + O 2 colestene-3-ona + H 2 O 2 2H 2 O 2 + 4-aminoantipirina + fenol quinoneimina + 4 H 2 O 2 Linealidad: hasta 750 mg/dL  Colesterol Liquiform: reacción de punto final Esteres de colesterol Colesterol + Ácidos grasos Colesterol + O 2 Colest-4-en-ona + H 2 0 2 2H 2 O 2 + Fenol + 4-Aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4H 2 O linealidad: hasta 500 mg/dL  Método Liebermann-Burchard Medio fuertemente ácido. Colesterol ión carbonio 3,5-colestadieno ácido colesta-hexaeno-sulfónico  Método Abell-Levy-Brodie-Kendall 1. Extracción del colesterol con zeolita. 2. Hidrólisis química de los esteres (saponificación) 3. Medición del colesterol total por la reacción L-B.

7 CondiciónAbell-Levy-Brodie- Kendall Liebermann-Burchard (L-B) Enzimáticos Temperatura50°C, hidrólisis 25°C, reacción colorimétrica Ambiente, extracción, reacción. 37°C Vol. De muestra500 µL 4 µL Fracción del vol. De muestra 0,091 para hidrólisis 0,1 para extracción0,01 Concentración final de reactivos Hidrólisis KOH: 0,322 mol/L Etanol: 909 g/L Extracción Hexano 50% (v/v) Reacción colorimétrica Anhídrido acético: 64,5% v/v Ácido sulfúrico : 3,2% v/v Ácido acético: 32,3% v/v Mezcla de extracción insoluble (en isopropanol 99%) Isopropanol 99%: 990g/L Zeolita: 320g/L CuSO 4 * H 2 O: 16 g/L Caolín: 32 g/L Ca(OH) 2 : 32 g/L Mezcla de reacción Anhídrido acético 60% v/v Ácido sulfúrico: 30% v/v Ácido acético:10v/v Colesterol esterasa: 40U/L Colesterol oxidasa: 56U/L Peroxidasa: 1U/L Colato de sodio: 15mmol/L 4-Aminoantipirina: 0,4 mmol/L Hidroxibenzoato de sodio: mmol/L Buffer fosfato: 90 mmol/ L (pH:6,75) EDTA: 8 mmol/L Tiempo de reacciónHidrólisis: 60 minutos Reacción : 30 minutos extracción: 20 minutos AutoAnalyzer-II: 8 min 10 minutos Longitud de onda620 nm630 nm 505 nm, 600 nm secundaria Linealidad5 g/L (12,5 mmol/L) 4 g/L 5 g/L Precisión - 2.879 mg/L,

8 Referencias Bibliográficas  Lehninger. Fundamentos de Bioquímica, capitulo 21, biosíntesis de lípidos.  Química clínica Métodos. Pesce/Kaplan. Editorial medica panamericana.1991, 1° Edición, Cap. 18, pág. 1164- 1186  Revista española de obesidad. Metabolismo del colesterol: bases actualizadas. Vol. 7, Núm. 6, Noviembre-diciembre 2009. V. Navarro et al.  Clin Invest Arterioscl. 2012; 24(1): 40-52. Documento abordaje de la dislipidemia. Sociedad española de Arteriosclerosis (parte II). J. Millán Núñez-Cortés et al.

9 Serum Cholesterol and Nigrostriatal R2* Values in Parkinson’s Disease Guangwei Du 1, Mechelle M. Lewis 1,2, Michele L. Shaffer 6, Honglei Chen 7, Qing X. Yang 3,4, Richard B. Mailman 1,2, Xuemei Huang 1,2,3,4,5 * Paper: Universidad de Talca Facultad de Ciencias de la Salud Departamento de Inmunohematología y Bioquímica Clínica Nombre: Paula Romero O. Ramo: Bioquímica Clínica II Docentes: MgSc. TM Elba Leiva. MgSc. TM Roxana Orrego MgSc. TM Luis Guzmán 01-octubre-2013 Revista Plos One. Publicado: 17-abril-2012

10 Introducción:  Enfermedad de Parkinson (PD): etiología idiopática multifactorial  Perdida de neuronas dopamenérgicas en SN y de hierro en SN Autopsia en PD.  Hierro unido a Ferritina sérica, tiempo de relajación transversal de protones (T2*).  La velocidad de relajación transversal de los protones (R2 * =1/T2 *) se correlaciona con la concentración de hierro en el tejido cerebral y se aumenta en la sustancia gris de pacientes con enfermedad de Parkinson.  Depósitos de hierro en el cerebro patogenia del Parkinson.  Es posible que el aumento de hierro sea un mecanismo compensatorio debido a la patología primaria. (Fe como cofactor para la síntesis y degradación de catecolaminas).  Asociación inversa entre el colesterol y la aparición de la enfermedad de Parkinson. Hipótesis:  El aumento de los niveles de colesterol sérico estaasociado con una menor acumulación de hierro en la SN y se relaciona con estructuras negroestriadas en PD. Objetivo:  proporcionar evidencias de que el colesterol alto en suero en pacientes PD puede ser asociado con contenidos bajos de hierro en la SN y GP.

11 Métodos. 50 sujetos con PD 29 controles En Unified PD Rating Scale part III (UPDRS-III) se obtuvieron puntuaciones motoras de los sujetos con PD. La dosis equivalente de levodopa (LEDD) fue estimada para sujetos con enfermedad de Parkinson. Sujetos Muestras de sangre en ayunas (4ml) Se dejaron coagular por 30min y se centrifugaron para separar el suero. Los lípidos en suero se midieron según el manual Vitros Chemistry product. Determinación de niveles de colesterol en suero total en ayunas y en LDL Todos los sujetos fueron escaneados utilizando un escáner Tesla MR escáner 3.0. Se obtuvieron imágenes de alta resolución T1 y T2, solo las imágenes cargadas con T2* fueron recolectadas. Obtención de los datos MRI Segmentación de regiones de interés (ROIs).La sustancia negra fue delineada manualmente. La distribución de neuronas dopaminergicas dentro de la sustancia negra es heterogénea y posiblemente se extiende a la parte reticulada. El putamen, núcleo caudado, y globo pálido (GP) fueron segmentados utilizando un atlas probabilístico basado en la segmentación automática de software AutoSeg. Mapas R2 *. Procesamientos y análisis de imagenes Test T y prueba exacta de Fisher Valores R2* regionales y niveles de colesterol sérico se compararon por separado entre la enfermedad de parkinson y controles por análisis de covarianza con ajustes para la edad, el género, y el uso de los medicamentos para bajar el colesterol (estatinas). Las correlaciones entre los valores R2 * y los niveles de colesterol en suero, en sujetos con enfermedad de parkinson y control se determinaron utilizando coeficientes de correlación parcial de Spearman, con ajuste por los efectos de la edad, el género, y el uso de estatinas tanto en PD y los controles por separado. Análisis estadísticos

12 Resultados  Existían valores extremos para cada grupo en cuanto a colesterol total (290 mg/dL para PD y 285 mg/dL para control). Debido a que estos valores extremos pueden sesgar el análisis de las correlaciones, los resultados restantes provienen de 39 sujetos PD y 28 controles con los dos valores extremos excluidos. o Los valores de R2 * en el SN se asociaron con tres mediciones clínicas

13 Resultados

14 Discusión Gorell JM. et al. 1995 Sujetos PD mostraron un aumento significativo en el valor R2* en el SN en comparación con los controles en el presente estudio. Además, encontramos una correlación significativa entre el valor R2* de SN y los tres valores clínicos en PD. Esto es consistente con la idea que R2* en el SN puede tener utilidad como un marcador de imágenes para la progresión de PD Martin WR. et al.2008 Consecuentemente, una limitación del estudio es que ellos no han podido explorar la relación entre R2*y las mediciones clínicas en una forma más detallada como se ha realizado en estudios previos Huang x. et al. 2007 Al igual que el estudio citado, no se encontró una asociación entre los niveles de colesterol y la duración de la enfermedad Ikeda k. et al. 2011 La información actual sugiere que en el grupo PD, los niveles más altos de colesterol parecen estar asociadas con mayores puntuaciones motoras de UPDRS-III, en consonancia con el reciente informe, que se cita.

15 Conclusión  Aunque no hubo una diferencia global en la acumulación de hierro en el GP entre PD y controles, el colesterol mayor en la PD se asoció con un menor contenido de hierro en esta estructura. Esta asociación también es PD-específica y no se observó en los controles.  El presente estudio tiene varias limitaciones. En primer lugar, aunque nuestro tamaño de muestra de 40 pacientes y 29 controles es considerable en comparación a algunos otros estudios de neuroimageneología de PD, es una muestra relativamente pequeña para un estudio de corte transversal. En segundo lugar, de los sujetos que participaron en el estudio, nueve pacientes con PD y seis controles usan estatinas. El uso de estatinas puede afectar a estos datos en formas complicadas debido a que estos medicamentos no sólo modifican los niveles de colesterol, sino que también se ha planteado la hipótesis de que tienen propiedades anti-neurodegenerativas. En el presente estudio, los posibles efectos causados por las estatinas se ajustaron mediante análisis de correlación parcial con el uso de estatinas como co-variable.  En resumen, este estudio es el primero que relaciona los niveles de colesterol en suero con el contenido de hierro en las estructuras nigroestriatales en PD.