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2 COPROLOGICA El examen parasitológico de heces conocido como examen coproparasitario, es un conjunto de técnicas diagnósticas que constituyen la indicación metodológica para la identificación de la mayoría de las enteroparasitosis

3 Para obtener resultados satisfactorios de un examen coproparasitario, debe cumplir con los siguientes requisitos: 1) Solicitud de Examen coproparasitario. 2) Preparación del paciente. 3) Muestra correctamente obtenida. 4) Muestra seriada (3 muestras mínimas de materia fecal)

4 Indicaciones Debe indicársele al paciente la realización de un régimen alimentario 48-72 hs. antes de realizarse el estudio, libre de frutas, verduras y grasas Dado que preparaciones con abundantes residuos o grasas, obstaculizan la visualización microscópica, pudiendo ser causa de falsos negativos

5 UNA MUESTRA CORRECTA Para realizar un examen coproparasitario debe ser de suficiente cantidad(mayor de 50 grs.) Debe ser emitida recientemente pudiéndose conservar en heladera hasta unas 8-12 horas. Debe ser enviada al laboratorio correctamente rotulada con nombre completo del paciente y fecha de emisión, en frasco de plástico transparente, limpio, seco y de boca ancha, con tapa de rosca. La muestra debe recolectarse sin mezcla de orina, para evitar el deterioro de parásitos.

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7 La muestra debe ser seriada, considerándose que muestras únicas solo permiten diagnósticos positivos en 60% de las materias fecales con parásitos; que tanto protozoarios como helmintos tienen ciclos de eliminación de quistes y huevos, con períodos negativos. Existen diferentes esquemas sobre la secuencia de recolección de materias fecales algunos de los mas usados indican: 3 muestras en días alternos o 3 muestras separadas 1 semana entre sí, teniendo siempre presentes las premisas antes mencionadas para la colecta de la muestra.

8 A.- MATERIAL NECESARIO: Frasco de plástico, limpio y seco, transparente, de boca ancha y con tapa de rosca. No se deben utilizar recipientes con medios de transporte. B.- TÉCNICA: Si son formadas o pastosas se toma una porción del recipiente donde hayan sido emitidas, y se transfieren al frasco que se enviará al laboratorio. En caso de que sean líquidas puede emplearse jeringa para pasar la muestra al frasco de envío. Se descartarán muestras contaminadas con orina. C.- VOLUMEN MÍNIMO heces formadas o pastosas: tamaño de una nuez. Heces líquidas: 10-15 ml. D.- TRANSPORTE: Deben enviarse lo antes posible al laboratorio, de no ser así se podrán mantener refrigeradas a 4 ºC hasta 8-12 hs, antes de ser procesadas. Nunca se guardarán en estufa o a temperatura ambiente hasta el envío.

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10 Montaje 1. En un extremo de porta objetos se colocan 1 o 2 gotas de solución salina, en otro extremo del porta objetos se colocan 1 o 2 gotas de lugol después se colocan una pequeña muestra de materia fecal y luego se esparcen hasta dejarla semilíquida y se observa en el microscopio. 2. Colocar el cobre objetos y repetir estas indicaciones en la gota del lugol. 3. Observar al microscopio Nota Con el suero fisiológico, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, núcleo y vacuolas

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12 FASES DEL EXAMEN Examen Macroscópico COLOR  Café: bilirrubina  Blanquecino: ausencia de pigmentos biliares.  Amarillo: Leche, o presencia de bilirrubina inalterada  Gris oscuro: ingesta de grandes cantidades de chocolate o cacao.  Verde: ingesta de espinacas.  Rojo: remolacha

13 ASPECTO Homogéneo: Presentan la misma composición química e iguales propiedades en todos sus puntos. Heterogenia: No son uniformes, presentan una estructura y una composición diferente en distintos puntos. CONSISTENCIA 1. Pastosas: presentan un aspecto moldeado 2. Semi Líquidas o Semidiarreicas 3. Líquidas

14 SANGRE OCULTA ES HECES Incluye laminas de papel recubiertas con goma de guayaco y frasco H2O2 como reactivo catalizador. Su interpretación se basa en el desarrollo de color que genera la hemoglobina presente cuando reacciona al oxidar un compuesto fenólico de la goma. Sin hemoglobina no se desarrolla color azul.

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16 rotavirus Procedimiento: Abrir el tapón del gotero con cuidado de no derramarlo. Con el extremo del aplicador recoger una cantidad suficiente de heces (25 -100 mg) Si las heces son líquidas tomar con ayuda de una pipeta 100 microlitros y transferirlos al gotero. Introducir el aplicador con la muestra en el gotero, cerrar bien el tapón y agitar vigorosamente para asegurar una mezcla homogénea. Sacar el casette de prueba de la bolsa de aluminio.

17 Romper el extremo superior del gotero. Añadir 4 ó 5 gotas (120 a 150 ul) de la muestra contenida en el gotero en el pozo de reacción de la prueba (ventana circular señalada con una flecha). Esperar entre 5 y 10 minutos, leer e interpretar el resultado. Una muestra fuertemente positiva puede mostrar el resultado antes de los 10 min. Nota: No interpretar resultados después de 10 minutos

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20 pH en heces El pH de las heces normales tiene un valor comprendido entre 6'8 y 7'2, aunque depende de la alimentación. La determinación del pH es importante para completar el estudio de la digestión. o Reacción ácida: indica trastornos digestivos por exceso de fermentación o exceso de ácidos grasos o Reacción alcalina: indica trastornos digestivos con aumento del amoníaco producido por la flora de putrefacción..

21 Técnica de determinación del pH Se realiza la determinación con papel indicador. Se coloca una porción de heces en un tubo de ensayo, se agrega agua destilada y se agita con una varilla hasta formar una papilla uniforme en la cual se introduce una tira de papel indicador universal durante unos segundos. Limpia ésta y el color desarrollado se compara con la escala de colores del indicador

22 QUÍMICA E INMUNOLOGÍA La Química sanguínea: Es una serie de pruebas que suministra información al médico o Naturópata de las condiciones del metabolismo en el cuerpo humano y además como funcionan ciertos órganos como el hígado riñón etc.

23 Significado de las abreviaturas: UI = unidad internacional. L = litro. dL = decilitro = 0.1 litro. g/dL = gramos por decilitro. mg = miligramos. mmol = milimoles. mEq = miliequivalentes. mm = milimetro μl = microlitro

24 LOS VALORES NORMALES DE ANÁLISIS DE GRUPO DE PRUEBAS METABÓLICAS Albúmina: 3.9 a 5.0 mg/dL. Fosfatasa alcalina: 44 a 147 UI/L. ALT (alanina transaminasa): 8 a 37 UI/L. AST (aspartato de aminotransferasa): 10 a 34 UI/L. BUN (urea en la sangre): 7 a 20 mg/dL. Calcio: 8.5 a 10.9 mg/dL. Cloruro: 101 a 111 mmol/L. CO2 (dióxido de carbono): 20 a 29 mmol/L. Creatinina: 0.8 a 1.4 mg/dL.** Bilirrubina directa: 0.0 a 0.3 mg/dL. Gama GT (gamma-glutamiltranspeptidasa): 0 a 51 UI/L. Análisis de glucosa: 100 mg/dL. Análisis de potasio: 3.7 a 5.2 mEq/L. Sodio: 136 a 144 mEq/L. Bilirrubina total: 0.2 a 1.9 mg/dL. Proteína total: 6.3 a 7.9 g/dL.

25 Limpieza de equipos ANALIZADOR AUTOMÁTICO DE QUÍMICA SANGUÍNEA XL-200

26 ANALIZADOR SEMIAUTOMATICO DE QUIMICA SANGUINEA BA-88A El espectrofotómetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la concentración de una sustancia en una solución, permitiendo así la realización de análisis cuantitativos.

27 Limpiar externamente el espectrofotómetro, incluyendo los controles, pantallas. Esto se puede realizar con una pieza de tela fina similar a la textura de los pañuelos– humedecida con agua destilada. Inspeccionar y limpiar el cable de alimentación eléctrica. Verificar que la lámpara esté limpia y en buen estado y revisar el fusible (realizar este paso con el operador) Nota La limpieza se la realiza con el equipo apagado.

28 Material básicos para realizar una prueba de química sanguínea Tubos de ensayo Pipetas automáticas Centrifuga Puntas plásticas Espectrofotómetro

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30 Almacenamiento

31 Reactivos

32 Pruebas especiales (INMUNOLOGIA) VDRL (Venereal Research Disease Laboratory) MUESTRA Suero, plasma o líquido cefalorraquídeo (LCR) o Recolección: obtener de la manera usual. o Aditivos: no se requieren para suero o LCR. Si la prueba se realiza con plasma, éste puede obtenerse empleando heparina, EDTA. o Sustancias interferentes conocidas: hemólisis o hiperlipemia

33 o Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: en caso de no procesarse de inmediato los sueros pueden conservarse hasta una semana en refrigerador (2-10oC). o El plasma puede emplearse hasta 24 horas luego de la extracción

34 MATERIAL REQUERIDO 1- Provisto 1. 1 gotero 2- No Provisto 1. Agitador rotativo ajustable a 180 rpm. 2. Placa de vidrio transparente con sectores de 14 mm de diámetro cada uno. 3. Micropipetas para medir los volúmenes indicados. 4. Microscopio

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36 PROCEDIMIENTO Tanto los reactivos como la muestra deben estar a Temperatura ambiente antes de realizar la prueba. I- PRUEBA CUALITATIVA EN SUERO O PLASMA En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar: 1. Muestra 50 ul 2. Reactivo A 1 gota Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4 minutos. 3. Observar inmediatamente en microscopio con poco aumento II- PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO O PLASMA Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32 con solución fisiológica y realizar para cada dilución.

37 PRUEBAS RAPIDAS CASSETTE La prueba Rápida a cassette es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral para la detección cualitativa de anticuerpos en suero humano o plasma. Sirve como prueba de tamizaje para ayudar al diagnóstico de la infección.

38 Principio del examen El examen consiste: 1) Almohadilla de conjugado de color budeos conteniendo antígenos de ratón anti anticuerpos IgM humano conjugados con oro coloidal (Conjugados IgM) 1) Una tira de membrana de nitrocelulosa que contiene una banda de prueba (banda T) y una banda de control (Banda C). La banda T es pre-recubierta con antígenos recombinantes, y la banda C es pre-recubierta con anticuerpos lgG de cabra anti-conejo.

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41 PRUEBAS RAPIDAS TIRILLAS Se lo realiza en (Orina/Suero) es un inmunoensayo cromatográfico rápido para la detección cualitativa, para el diagnóstico precoz un ejemplo del embarazo. La prueba utiliza dos líneas para indicar los resultados. 1. La línea de la prueba utiliza una combinación de anticuerpos que incluyen un anticuerpo monoclonal para detectar selectivamente. 2. La línea de control está compuesta por anticuerpos policlonales de cabra y partículas coloidales de oro. El ensayo se realiza sumergiendo la tira de análisis en una muestra de suero al pocillo y observando la formación de las líneas de color. La muestra migra por acción capilar por la membrana para reaccionar con el conjugado de color. Las muestras positivas reaccionan con el conjugado de color del anticuerpo específico para formar una línea de color en la región de la línea de la prueba de la membrana. La ausencia de esta línea de color sugiere un resultado negativo.

42 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD  Almacenar tal como está empaquetado en la bolsa sellada a temperatura ambiente o refrigerado (2-30 ).  La tira de análisis es estable hasta la fecha de caducidad que figura en la bolsa.  La tira de análisis se mantendrá en la bolsa sellada hasta su uso.  NO CONGELAR. No utilizar después de la fecha de caducidad.

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44 Eliminación de las muestras sanguíneas  Todo el material de plástico descartable en contacto con muestras biológicas no infecciosas, así como guantes, batas y botas descartables serán descartado directamente en bolsas rojas.  El material de plástico descartable contaminado con muestras biológicas infecciosas será desinfectado por al menos 30 min con hipoclorito de sodio al 0,5% (5g/L) y luego descartadas en bolsas rojas.  Los fluidos biológicos no infecciosos serán diluidos con hipoclorito de sodio al 0,5% (5g/L) y luego eliminados por desagüe, dejando correr abundante agua.

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46  Los fluidos biológicos infecciosos (a excepción de la sangre) serán tratados durante al menos 30 min con hipoclorito de sodio al 0,5% (5g/L) y luego eliminados por desagüe, dejando correr abundante agua.  Los restos de sangre serán tratados durante al menos 30 min con hipoclorito de sodio al 0,5% (5g/L) y luego eliminados en bolsas de residuos patógenos en recipientes cerrados que no derramen.  Los coágulos se los almacenara en un envase de orina posteriormente este será tratado y cerrado puesto en fundas rojas para su posterior recolección.  Para ello es aconsejable, manipular la sangre en tubos plásticos descartables de cierre hermético que puedan ser llenados con solución desinfectante y eliminados, minimizando su manipulación.

47 Generación de desechos

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