1 CUANTIFICAR LA RESPUSTA IMUNE DE LOS LINFOCITOS (T MEDIANTE IMAGEN DE PET (TOMOGRAFIA POR EMISION DE POSITRONES) Maissa Melehi. Hospital General de Elche.

2 MATERIAL Y METODOS n ANIMALES Y CELULAS: Ratones imunocompetentes BALB/C y inmuodeficintes CB.17SCID/SCID.Celulas del mastocitoma de P815 in vitro. n FORMACION DEL PLASMIDO: Se introduce el fragmento 1-0kbsr39TK en de MSCV-IRES-GPF. n VIRUS:M-MSV/ M-MuLV aislados de ratones con los tumores respectivos producidos por estos virus

3 MATERIAL Y METODOS n Virus: El retrovirus MSCV-sr39TK-IRES- GFP fue procesado por HEK 293 linfocito T.Se utiliza para la primoinfeccion de los linfocitos T virus vivos. n Produccion del tumor y la reaccion imune en el raton: Se injecta intramuscularmente a BALB/c Y CB,17SCID/SCID 100microL de los virus M-MSV/M-MuLVse controla con p815.Se sacrifica el raton cuando el volumen del tumor es de 1.5cc.

4 MATERIAL Y METODOS: n Infeccion retoviral y purificacion de LT:La purificacion se determina mediante anticuerpos B220,CD8,CD4 teñidos de LT de bazo infectado. Se estumula la proliferacion de estos LT con CD3 y CD28 y se infectan con el retrovirus MSCV- sr39TK-IRES-GPF y 24 horas despues se anliza la poblacion de CD8 yCD4 producida mediante PET.

5 Material y metodos n Imagen del tumor en el animal portador medianteMicroPET: Se injecta al animal 200 microg Ci de F (FHBG) y se seda.Se coloca al raton en el Scaner emisor de positrones y se escanea en 56min, las imagenes son reconstituidas mediante filtros y mapas algoritmicos. n Se transfiere L T previamente marcados e imnuzados: En un medio de cultivo se pone en contacto a las 24-36 H estos linfocitos con el tumor de animales.Como forma de preimunizacion don se recoje L T CD8.

6 RESULTADOS n M-MSV/M-MuLVson virus poructores de tumores altamente imunogenicos capaces de ser rechados por ratones imunocompetentes. n La intoduccion de gen del PET en celulas diana mediante retovirus es crucial para la determinacion de la poblacion de LT imunizados. n Se demostro que para determinar la localizacion del tumor los LT tenian que estar imunizados con antigenos positivos.

7 RESULTADOS n La tranferencia de la reaccion imune adaptativa o secundaria de los LT previamente imunizados solo se demostro en tumores que expresan antigenos positivos. n Los linfocitos T imunizados se determinan posteriormente con CD3 teñidos para confirmar el hecho.

8 DISCUSION n Se estudio mediante metodos invasivos la tansferencia de material imunogenico teniendo que utilizar muchos animales y la recojida de datos durante un tiempo largo y sin vision tridimensional. n El metodo no invasivo mediante imagen te permite hacer un seguimiento mediante localizacion del tumor con LT previanmente marcados.

9 DISCUSION n La autoradiografia y el estudio imunohistoquimico corroboran los resultados del PRT.

10 CONCLUSIONES n EL PET ES UN METODO NO INVASIVO QUE PERMITE DETERMINAR LA LOCALIZACION Y EL SEGUIMIENTO DEL TUMOR CON CELULAS PREVIAMNETE MARCADAS Y IMUNIZADAS ASICOMO CUANTIFICAR E IDENTIFICAR LOS IMUNOMODULADORES DE LA REACCION IMUNE FRENTE AL TUMOR.