1 CULTIVO CELULAR Proliferación de Linfocitos con Concanavalina A 1065. Inmunología Aplicada Dra. Ana Esther Aguilar Cárdenas

2 Obtención de células esplénicas. Ratón Perfundir con 5 mL de RPMIss Suspensión celular en tubo de 15 mL Centrifugar 1500 rpm, 10’ Decantar sobrenadante Resuspender en 5 mL RPMIss Centrifugar 1500 rpm, 10’ Decantar sobrenadante Resuspender en 5 mL RPMIs Extracción del bazo

3 Conteo de Linfocitos Dilución 1:20 10  L suspensión + 90  L azul tripano Llenar cámara de New Bauer Realizar conteo de linfocitos (40x) Ajustar suspensión con RPMIs (10 6 cel/mL)

4 Muestreo en Placas Llenar 3 pozos con: 500  L de la suspensión de linfocitos ajustada + 500  L de Concanavalina A 10  g/mL Llenar 1 pozo con: 500  L de la suspensión de linfocitos ajustada + 500  L de RPMI suplementado. Incubar la placa a 37°C durante 24 horas. Realizar las observaciones