1 DESCRIPCIÓN Y MANEJO. FUNDAMENTOEL MICROSCOPIO ÓPTICO DESCRIPCIÓN Y MANEJO. FUNDAMENTO

2 1. MICROSCOPIOS Y MICROSCOPÍA1.1 Microscopios ópticos De campo claro. De campo oscuro. De contraste de fases. De fluorescencia. 1.2 Microscopios electrónicos. De transmisión. De barrido. 2. LA RESOLUCIÓN DE LOS MICROSCOPIOS Empleo del objetivo de inmersión en aceite. 3. DESCRIPCIÓN DEL MICROSCOPIO ÓPTICO 4. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO 5. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 6. PREPARACIONES PARA EXAMEN POR MICROSCOPÍA ÓPTICA TÉCNICAS DE " MONTAJE HUMEDO” Y GOTA PENDIENTE EXTENSIONES FIJADAS Y TEÑIDAS

3 TAMAÑOS CELULARES 1 MICRA = 10-6 m 1 NANOMETRO = 10-9 m 1 AMSTRONG = m El ojo humano no distingue menos de 50 micras de diámetro

4 TIPOS DE MICROSCOPIOS MICROSCOPIOS ÓPTICOS: MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS:Fuente de iluminación: luz visible Sistema de lentes ópticas. MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS: Fuente de iluminación: chorro de electrones. Lentes: electroimanes.

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6 Microscopios ópticos Muestras de más de 0,2 micras.Características de la muestra: Finas Contraste entre las estructuras Que reciba luz del condensador Necesario: Tinciones Equipo de contraste de fases

7 TIPOS DE MICROSCOPIOS ÓPTICOSDe campo claro De campo oscuro De contraste de fases De fluorescencia

8 Microscopio de campo claroEl más utilizado Zona de observación iluminada Preparaciones naturales y teñidas Amplificación: 1000 aumentos Dos sistemas de lentes (cóncavas y convexas) y espejos correctores Sistema de iluminación

9 MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO

10 Observación con M.O de campo claro

11 Microscopio de campo oscuroZona de observación oscura Objetos fuertemente iluminados Condensador especial: haces de rayos laterales sobre el objetivo Útil para microorganismos en suspensión (preparaciones en fresco o en gota pendiente)

12 REPRESENTACIÓN ESQUEMÁTICA DE LA MICROSCOPÍA EN CAMPO OSCUROREPRESENTACIÓN ESQUEMÁTICA DE LA MICROSCOPÍA EN CAMPO OSCURO. Solo penetran en el objetivo los rayos de luz que chocan contra un objeto situado sobre el portaobjetos.

13 OBSERVACIÓN EN CAMPO CLARO

14 Observación en campo oscuro

15 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASESObservación de células vivas. No hay que teñirlas. Provistos de diafragmas y lentes especiales: aumentan la diferencia en el índice de refracción de las células y el medio. Imagen en relieve.

16 Células epiteliales con contraste de fases

17 Microscopio de fluorescenciaSe utiliza luz ultravioleta. Dicha luz excita ciertas moléculas presentes en la muestra (naturales o añadidas) que emiten la fluorescencia.

18 Células epiteliales con fluorescencia

19 Células epiteliales con m. de fluorescencia a mayor aumento

20 Microscopio electrónico

21 MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOSFuente de iluminación: chorro de electrones Lentes: electroimanes Amplificación: varios cientos de miles. (se pueden apreciar objetos de 3 A. No se puede utilizar para células vivas: la muestra es bombardeada por el chorro de e- que incrementan su temperatura. Se pueden utilizar sustancias para aumentar el contraste.

22 ELEMENTOS BÁSICOS DEL M.E.Cañón de e-: crean la imagen aumentada Lentes magnéticas: enfocan y dirigen el haz de e-. Sistema de vacío: para no alterar la trayectoria de los e-. Sistema de registro de la imagen

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24 MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOSMicroscopio de transmisión: Cortes finos Amplificación: entre y aumentos. Microscopio electrónico de barrido Células enteras Amplificación: entre y aumentos.

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27 Mitocondria (X 60000) con microscopio electrónico de transmisión

28 Bacteria creciendo sobre estomas (X 4000) Microscopio electrónico de barrido

29 PODER DE RESOLUCIÓN: Ojo humano: 0,1 mm Microscopio óptico: 0,2 micras Microscopio electrónico: 4 amstrong OBJETIVO DE INMERSIÓN: Mayor amplificación de la imagen El más usado en Bacteriología

30 Sistema óptico: condensador, objetivos y oculares.Sistema mecánico: soporte (base, brazo), platina, macro y micrométrico, cabezal y revólver

31 Gota pendiente: a.- Círculo de vaselina b.- Muestra c.- Se coloca el portaobjetos d.- Se da la vuelta y se observa

32 EXTENSIONES FIJADAS Y TEÑIDAS:Extensión 2. Fijación: - calor - química: ácido ósmico, formaldehido Colorante Lavar el exceso