1 Desintegrinas - MetaloproteasaBiol. Juan C. López J.

2 Integrinas Superfamilia de Receptores:Heterodiméricos ( y ). Subunidades  (12 – 200 kDa) y  (90 – 110 kDa). 14 tipos subunidades  y 7 tipos de subunidades . Transmembrana. Citoadhesividad. Célula – célula y célula – matriz extracelular (ECM). Grupo más importante de receptores para proteínas de la ECM. Receptores para otras moléculas de adhesión. vWF, Trombospondina Vínculo de unión entre medio extracelular en el citoesqueleto. Reconocen dominio unión Arg-GLy-Asp (RGD). Morfogénesis Tisular, regeneración de tejidos, tumoración y metástasis. (Gould y cols, 1990; Wolfsberg y cols, 1995, Dzamba y cols, 2001)

3 Integrinas Nombre del Receptor Fibrinógeno Colágeno FibronectinaLaminina Vitronectina Designación GP GPIIb/IIIa GPIa/IIa GPIc*/IIa GPIc/IIa V/GPIIIa CD CD41a-b/CD61 CD49b/CD29 CD49e/CD29 CD49f/CD29 CD51/CD61 Designación Integrina IIb3 21 51 61 V3 PM (kDa) 145/90 150/138 140/138 150/90 (Parise y cols, 2001)

4 Integrinas Características Estructurales:Subunidades  y  transmembrana asociadas no covalentemente. Región extracelular voluminosa Región intracitoplasmática pequeña. Formación del heterodímero depende de la expresión en membrana de ambas subunidades. Muestran diferentes estados de activación. “Modulación de Afinidad”: Cambios en afinidad por unión al ligando. Cambios conformacionales. (GPIIb/IIIa) Regula las funciones del receptor. Iones metálicos importantes en función adhesiva por ligando: Motivo “EF-Hand”. MIDAS (Metal Ion-Dependent Adhesion Site). Mn+2 estabiliza receptores en estado activado (Alta afinidad). Ca+2 estabiliza receptores en estado de reposo (Baja afinidad). (Dzamba y cols, 2001)

5 Integrinas Estructura General de las Integrinas: Citoesqueleto(Gomperts y cols., 2002)

6 Integrinas Características Estructurales:Diferentes combinaciones de subunidades  y  definen su afinidad y señalización que originan. Afinidad por ligando: Secuencias flanqueantes del dominio RDG del ligando. Conformación del bolsillo de unión en la integrina. Puede aumentarse por la interacción concertada de varios receptores de baja afinidad. Ligandos multivalentes. “Clustering” de receptores. Interacción ligando –receptor: Depende de Dominios-I presentes en ambas subunidades. (Dzamba y cols, 2001)

7 Integrinas Características Estructurales:Subunidad : 1000 – 2000 resiudos aa. Siete secuencias repetitivas N-terminales de aprox.60 aa. Motivo de unión de cationes divalentes “EF Hand” Secuencia consenso DxDxDGxxD. Importante en función citoadhesiva y relación de cambios conformacionales – afinidad por ligando. (Dzamba y cols, 2001)

8 Integrinas Características Estructurales: Subunidad :Clasifican según características estructurales comunes: Sitio de hidrólisis postraduccional en dominio extracelular Presente sólo en la mitad de las subunidades  de mamíferos. Dominio de Inserción (Dominio – I) N-terminal. Presente en la mita de las subunidades  que cerece de sitio de hidrólisis postraduccional. También conocido como Dominio A, similar al A3 del (vWF) para unión a colágeno. MIDAS (Metal Ion-Dependent Adhesion Site) Secuencia consenso DxSxS para unión de cationes (Ca+2) Importante en función adhesiva de la subunidad. Formas de alternativas por “splicing”. (Dzamba y cols, 2001)

9 Integrinas Subunidad  Subunidad  Domino - I EF Hand like repeatsSitio putativo EF Hand like repeats -SH Región rica en Cys -SH -SH S - I -SH Sitio de proteólisis S - Dominios Transmembrana Dominios Citoplasmáticos (Dzamba y cols, 2001)

10 Integrinas Características Estructurales:Subunidad : 760 – 790 residuos aa. Región extracelular: 56 Cys localizadas a aprox. 50 aa de dominio transmembrana. 5 secuencias repetitivas de 8 Cys altamente similares. Primeras 4/5 Regiones C-terminales son similares a “EGF-like repeats” de laminina. Confiere conformación en forma de bastón (dominio estructural). Dominio I modificado localizado a 240 residuos de región N-terminal. Secuencia consenso DxSxS Importante en propiedades adhesivas de la subunidad. Invertebrados: Aparente carencia de Dominio-I subunidad . (Dzamba y cols, 2001)

11 Integrinas Características Estructurales: Región Citoplasmática:Interactúa con gran número de proteínas citoplasmáticas. Tres tipos principales de interacción: Interacción individual entre regiones  y : Regulan la Modulación cambios conformacionales asociadas con afinidad. Interacción con moléculas señalizadoras y/o adaptadoras. Propagación de señales. FAK, ILK, Paxilina, Sch, Grb2. Función mecánica como eslabón entre la ECM y otras moléculas adhesivas y componentes estructurales del citoesqueleto (talina, filamina, -actina). (Dzamba y cols, 2001)

12 Integrinas Señalización: “Outside-in”: Incluye eventos como:Progresión del ciclo celular. Supervivencia celular. Cambios en expresión génica. Migración celular y reorganización del citoesqueleto. Involucra : interacción cruzada y paralela de señales con factores de crecimiento.  pH intracelular, AMPc, Ca+2 intracelular, activación MAPK  expresión génica. (Dzamba y cols, 2001)

13 Integrinas ECM Integrinas Ras Raf MEK ERK Membrana Celular RGDFactor de Crecimiento Integrinas Receptores de Factores de Crecimiento Membrana Celular Talina Ras Raf MEK ERK Progresión y diferenciación Ciclo Celular Shc Grb2 Rho FAK Paxilina FAK/Src PI3-K Cdc42 p130CAS Akt Rac Adhesión y “spreading” celular MLCK Sobrevivencia Dependiente de anclaje Migración Celular (Dzamba y cols, 2001)

14 Integrinas Señalización: “Inside-out”:Cambios conformacionales del receptor  activación. GPIIb/IIIa (IIb3). Plaquetas en reposo expresan el receptor en superficie. Requiere ser activado para interacción con fibrinógeno. Ejm: Interacción colágeno  (vWF)  GPIb/IX/V  señalización  activación GPIIb/IIIa. Reposo: Dominio-I/3 bloquea región de unión del ligando en IIb. Activada: Exposición de región de unión de IIb y Dominio-I/3 asume conformación activa. Otras señales: Trombina, ADP, TXA2 y norepinefrina. Diferentes señales convergen hacia formación IP3 + DAG. Otros ejemplos: Activación y extravasación de leucocitos y migración celular. (Dzamba y cols, 2001 , Andrews, R )

15 Integrinas Colágeno 1 vWF 2 3 5 Activación GPIIb-IIIa GP Ib-IX-VMatriz Endotelial 1 vWF 2 -S-S- -S-S- (a) PI-3K (p85) Raf-1 PKC P60src p59lyn P72syk PTP-1B GP Ib-IX-V 3 ADP Rearreglo citoesqueleto y cambio de forma (b) p125fak P60src P72syk Activación Sistema de Señales(a) Canal Ca+2 P2X1 Ca+2 Activación GPIIb-IIIa Fibrinógeno Activación Sistema de Señales(b) 5 (Andrews, R )

16 ADAM´s

17 Desintegrinas-MetaloproteasaA Disintegrin And Metalloprotease (ADAM´s) Familia de genes que codifican para proteínas con dominio Metaloproteasa y Desintegrina Superfamilia: Metaloproteasa metzincin dependiente de Zn+2. Subfamilia : Adamalisina/Reprolisina. ADAM´s y SVMP´s Primera descripción por Primakoff, 1987 y Blobel y cols, 1992. Fertilinas  y , esperma de cerdo de guinea. Primera proteína de superficie de membrana con dominio desintegrina. ( Black y White, 1998; Schlöndorff, 1999; White y cols, 2001).

18 Desintegrinas-MetaloproteasaA Disintegrin And Metalloprotease (ADAM´s) Estructura: Proteínas de superficie de membrana. Filogenéticamente conservadas. Dominios de adhesión (Desintegrina) y proteólisis. Pueden contener dominios de fusión celular y señalización. Funciones: Fertilización. Neurogénesis. Miogénesis. Procesamiento de ectodominios (White y cols, 2001 Schlöndorff, 1999).

19 Desintegrinas-MetaloproteasaTipo Desintegrina Rico en Cys EGF like repeat Cola Citoplasma´tica Transmembrana Pro RGD ADAM 1 – Fertilina  ADAM 2 - Fertilina  ADAM´s RGD RGD ADAM 17 - TACE ADAM-TS 1 Trombospondina P-I P-II P-III SVMP´s RGD RGD (White y cols, 2001).

20 Desintegrinas-MetaloproteasaADAM ADAM 1, Fertilina , HP-30  ADAM 2, Fertilina , HP-30  ADAM 3 ADAM 4 ADAM 5 ADAM 6 ADAM 7 ADAM 8, CD 156 ADAM 9, MDC9 ADAM 10 ADAM 11 ADAM 12, Meltrina  ADAM 19, Meltrina  ADAM 15 ADAM 17 ADAMTS-I Función/patología Fusión óvulo-esperma Infiltración PMN Señalización Degradación mielina, liberación TNF- Supresor tumoral Miogénesis Miogénesis, metaloproteasa Agregación plaquetaria, aterosclerosis Liberación TNF- caquexia Esperma y otros Esperma Epidídimo PMN Pulmones y otros Hígado, bazo y otros Mamas y ovarios Hueso y músculo fetal Células endoteliales Corazón y riñones White y cols, 2001 refieren 33 desintegrinas diferentes (Yamamoto y cols, 1999)

21 Desintegrinas-MetaloproteasaActividad Proteolítica: 18/31: posible actividad metaloproteasa dependiente de Zn+2: Sitio catalítico HEXGHXXGXHD. 6/18: Actividad proteolítica demostrada experimentalmente: ADAM´s 9, 10, 12, 13, 17 y 28. ADAM 10: Neurogénesis. ADAM 12 y 13: osteogénesis y miogénesis. ADAM 17: desprende TNF de la membrana. (White y cols, 2001).

22 Desintegrinas-MetaloproteasaECM Metaloproteasa Metaloproteasa Desintegrina Inhibición Celular Migración Celular Desintegrina ECM Proteínas superficie integrinas Disparo señales que activa ó potencia actividad metaloproteasa Influencia del Dominio desintegrina sobre la actividad metaloproteasa (White y cols, 2001).

23 Desintegrinas-MetaloproteasaCómo Péptidos de Adhesión: Depende de dominios desintegrina y ricos en cisteína. ADAM´s 2, 3, 9, 12, 15, 23. Como Péptidos de Fusión: 6/33: dependen de dominio rico en cisteína. ADAM 1: fertilina : fertilización. ADAM 12 y 9 : fusión de mioblastos. ADAM 12: formación de osteoclastos. (White y cols, 2001).

24 Desintegrinas-MetaloproteasaComo Activador de Señalización: Depende de domino intracelular. 14/33 ADAM´s presentan dominio de unión de SH3. Interacción con moléculas señalizadoras ó asociadas al citoesqueleto. ADAM´s 9, 12, 13, 15, y 17. (White y cols, 2001).

25 Desintegrinas-MetaloproteasaECM ECM Integrina SVMP´s Integrina Integrina + ligando en matriz extracelular Integrina + ligando soluble ADAM´s (White y cols, 2001).

26 Desintegrinas

27 Desintegrinas Familia de inhibidores de la agregación plaquetaria.Descritos inicialmente en el venenos de la serpiente. Trimeresurus gramineus (Huang, 1987). Capaces de interactuar con fibroblastos, osteoclastos y células de melanoma. Pueden presentar motivo RGD (Arg-Gly Asp). Presente en la mitad de las ADAM´s y todas las SVMP´s. Residuo (D) importante en unión con integrinas. Localizado en la mitad de un “protruding loop” . Pueden presentar dominio: RGD: Kistrina KGD: Echistatina (Echis carinatus). MGD: Bitistatina (Bitis arietans) (Wolfsberg y cols, 1995, White y cols, 2001).

28 Dominio Desintegrina de las ADAM´s:Desintegrinas Dominio Desintegrina de las ADAM´s: Conformación primaria de ADAM´s varía según el tipo. Depende del ligando (integrina o receptor). Diferentes ADAM´s pueden unirse a un mismo receptor. Responsable de las propiedades adhesivas de la molécula. Sólo un grupo de estas ADAM´s son funcionalmente adhesivas. (Schlöndorff, 1999, White y cols, 2001).

29 Dominio Desintegrina de las ADAM´s:Desintegrinas Dominio Desintegrina de las ADAM´s: Alta variabilidad en secuencia de los lazos. Longitud entre 13 y 15 residuos. Mayoría son de 14 residuos. Residuos conservados: Tres residuos de Cys están absolutamente conservados. Posiciones Cys1, Cys8, Cys14. Funciones estructurales. También se encuentran absolutamente conservados: Arg2, Asp9, Glu12. Excepto ADAM´s 10 y 17 ( White y cols, 2001).

30 Desintegrinas Secuencias de residuos del lazo de Desintegrina Secuencias de residuos del lazo de Desintegrina en ADAM´s ( White y cols, 2001).

31 Dominio Desintegrina de las ADAM´s:Desintegrinas Dominio Desintegrina de las ADAM´s: Posiciones 7 y 9 (flancos de Cys central) Carga negativa. Importantes para función. Cambios en secuencia producen diferentes efectos en diferentes ADAM´s. Residuos centrales (5  9) son importantes para función. Secuencias fuera del lazo desintegrina influencias la función de la misma. ( White y cols, 2001).

32 Dominio Desintegrina de las ADAM´s:Desintegrinas Dominio Desintegrina de las ADAM´s: Análisis génicos demuestran presencia de numerosos exones. Límites intrón - exón no coinciden con los límites de los interdominios. Pueden presentar “splicing” alternativo: Para formas secretadas o acopladas a membrana. Para distintas formas de dominios específicos. Diferentes formas de dominio citoplasmático. ( White y cols, 2001).

33 Metaloproteasa

34 Metaloproteasa Dominio Metaloproteasa de las ADAM´sImportante en procesamiento “Shedding” de proteínas de membrana. Dominios extracelulares para: Citoquinas. Factores de Crecimiento. Proteínas de Adhesión. Ejemplo: TACE (TNF-Converting Enzyme) ADAM 17. Liberación de TNF. TACE Zn/ Zn Defecto en liberación del TNF Defectos maduración epitelial de múltiples órganos. Similares a efectos encontrados en EGFR-/- (Epidermal Growth-Factor Receptor). TNF uno de los ligandos de EGRF. TACE como responsable del procesamiento otros receptores. L-Selectina y p75 TNFR. (Schlöndorff, 1999).

35 Metaloproteasa Dominio Metaloproteasa de las ADAM´sLa especificidad de la interacción con sustrato depende de: La secuencia primaria del sitio de hidrólisis en sustrato. Secuencia desplegada de 8-10 aa cercana a sitio blanco y su distancia al dominio transmembrana. Proyecciones dentro del sitio catalítico. Papel como reconocedoras de estructuras específicas en sustrato. Otros Dominios responsables: Desintegrina y Rico en Cys. Interacción: Directa sobre sitio de hidrólisis Indirecta a través de otras proteínas diferentes a la blanco. Sustrato y proteasa expresados en la misma célula (cis) Sustrato y proteasa expresados en diferentes células (trans) (Schlöndorff, 1999).

36 Dominio Metaloproteasa de las ADAM´sRegulación del sitio catalítico: Depende de estímulo adecuado. Mecanismos de acción todavía por se elucidados. Propuesta de varios modelos. Activadores PKC, ionóforos de Ca+2, inhibidores de Tyr -P Remoción del Pro-dominio. Procesamiento constitutivo en trans-golgi. (Schlöndorff, 1999).

37 Dominio Metaloproteasa de las ADAM´sRegulación del sitio catalítico: Inhibición mediada: Zn+2 sobre residuo de Cys. Otras proteínas inhibidoras TIMP´s (Tissue Inhibitor of Metalloproteinase) sobre sitio catalítico de TACE. Dominio citoplasmático. Regula actividad en la Proteasa. Sustrato. TGF: Secuencia juxtamembrana extracelular L-Selectina: Dominio citoplasmático (Black y White, 1998; Schlöndorff, 1999).

38 Metaloproteasas de Venenos de Serpiente (SVMP´s)

39 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s (Snake Venom MetalloProtease´s). Proteínas solubles de venenos de serpiente. Codifican para dominio metaloproteasa similar al de ADAM´s. Sólo algunos de los dominios metaloproteasa de ADAM´s son activos. ADAM´s 1,8,9 y 10 son catalíticas. ADAM´s 2, 7 y 11 NO CATALÍTICAS, diferente secuencia del sitio activo. SVMP´s poseen dominio unión Zn+2. Dominios metaloproteasa de SVMP´s son activos Dominio Metaloproteasa. Secuencia consenso en su sitio activo HEXGHNLGXXHD H: unión del Zn+2 G: Giro del lazo E: (Glutámico): sitio catalítico. (Wolfsberg y cols, 1995; Yamamoto y cols, 1999)

40 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s: Representadas por hemorraginas: Relacionadas con las ADAM´s o MDC de mamíferos. Proteínas solubles y no ancladas a membrana. Clasificadas en: P-I: Sólo contienen dominio metaloproteasa. P-II: Dominio Metaloproteasa + Dominio tipo Desintegrina. P-III: Dominio Metaloproteasa + Dominio tipo Desintegrina + Dominio rico en Cys. P-IV: P-III + Dominio tipo Lectina en posición C-Terminal. (McLane y cols, 1998, Gutiérrez, 2000)

41 Desintegrinas-MetaloproteasaDominio Metaloproteasa Extremo N-Terminal Dominio Rico en Cys NH (a) (b) (c) (d) COOH Dominio Desintegrina RGD Extremo C-Terminal Pro-péptido (Huang, 1988, Andrews, 2000)

42 Estructura de una DesintegrinaDesintegrinas-Metaloproteasa Estructura de una Desintegrina (SVMP´s ) NH (a) (b) COOH SVMP´s PI NH (a) (b) (c) COOH SVMP´s PII NH (a) (b) (c) (d) COOH SVMP´s PIII (White y cols, 2001)

43 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s – Desintegrinas Monoméricas: Primera desintegrina reportada: Tigramina Trimeresusrus gramineus (Huang, 1987). Más de 30 identificadas. Originalmente definidas como proteínas:  PM (49-84 aa). Dominio RGD/KGD Estructura de lazo mantenida por puente disulfuro. Potente inhibidor plaquetario. Pueden encontrarse secuencias TDE, EDE, RDE y otras. Originadas por procesamiento proteolítico de SVMP´s tipo P-II. T: Thr (-OH); E: Glu (-(CH2)2COO-); D: Asp (-CH2COO-) (McLane y cols, 1998)

44 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s: – Desintegrinas Monoméricas: Originalmente clasificadas en: Desintegrinas cortas: (59-51 aa) y 8 Cys. Echistatina (Echis carnatus), Eristostatina (Eristocophis macmahoni) y Eristocophina. Desintegrinas Medianas: Cerca de 70 aa y 12 Cys. Albolabrina (Trimeresurus albolabris), Tigramina (T.gramineus), Batroxostatina (Bothrops atrox). Desintegrinas Largas: 84 aa y 14 Cys. Bitistatina (Bitis arietans). Alto grado de homología en arreglo de Cys, excepto: Cys extra en C-Terminal de desintegrinas cortas. Puente disulfuro extra en bitistatina. (McLane y cols, 1998)

45 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s - Desintegrinas Monoméricas: Secuencia RGD: Parte de un lazo de 13 residuos: Proyecta Estructura mantenida por puente disulfuro. Dominio RGD en ápice del lazo entre dos hojas  plegadas. Conformación es vital para su actividad biológica. Otros residuos en flancos pueden estar involucrados. Eristostatina  IIb3. Echistatina  IIb3, v3, 51 (fibronectina). (McLane y cols, 1998)

46 Desintegrinas-Metaloproteasa (McLane y cols, 1998)

47 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s - Desintegrinas Medianas: Secuencia aminoacídica similar a desintegrinas cortas. Plegamiento difiere de desintegrinas cortas. Comparten 7 residuos Cys conservados. Patrones de enlace de Cys-Cys difiere. Kistrina: fibrinógeno/IIb3 > fibronectina/IIb3 Flavoridina: IIb3, v3, 51. Mambina (Dendroaspis viridis, D. jamesonii): Neurotoxina análoga tipo Desintegrina. Similar Kistrina en secuencia lazo RGD y habilidad para unirse a IIb3. (McLane y cols, 1998)

48 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s - Desintegrinas Largas: Bitistatina: Mayor grado de homología dominio desintegrina con ADAM´s. Casi selectiva para IIb3. Cys5 – Cys24 específico de bitistatina. No inhibe adhesión de HUVEC (Human Umbilical Vein Endoteliel Cells) a vitronectina (v3). HUVEC adhiere a bitistatina inmovilizada. Propone extremo N-terminal. Estimula proliferación en células endoteliales aórticas de bovino. (McLane y cols, 1998)

49 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s - Desintegrinas Diméricas: PM entre 13 – 15 kDa. Subunidades heterodiméricas u homodiméricas. Contortrostatina (Agkistrodon contortrix c): Dos dominios RGD. Dímero: Bloquea 51. EMF10 (Eristocophis macmahoni): Heterodimérica (PM 14,576 kDa). Subunidades EMF10A y EMF10B Muestran homología con otras desintegrinas de venenos. Ligando para 41 (fibronectina) y 51. Actividad inhibidora en ambas subunidades. (McLane y cols, 1998)

50 Desintegrinas-Metaloproteasa S NH (b) (c) (d) COOH Jararhagina NH (c) (d) COOH Jaracetina Botrocetina de una Cadena (Andrews, 2000,)

51 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s - Significado en Trombosis: Bitistatina (Shebuski, 1989): Inhibición dosis dependiente de agregación plaquetaria ex vivo. Integrelina (Tcheng 1995): Modelada a partir de la barobuorina Péptido sintético antitrombotico en intervención coronaria selectiva. Triflavina (Sheu 1997): Reduce adhesión plaquetaria al subendotelio de aorta de rata. Posible mecanismo a través de inhibición de activación y no por inhibición de adhesión. (Mclane y cols, 1998)

52 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s - Significado en Cáncer: Células cancerosas únicas en utilizar interacción integrina-ligando para: Evadir su destrucción. Promover vascularización del tumor. Crecimiento metastásico. Inhiben adhesión de células tumorales: In vitro como in vivo. Flavoridina (Sheu, 1994): Inhibe adhesión de células de hepatoma a fibronectina, colágeno, laminina y vitronectina. Células melanoma + Eristostatina, Bitistatina, Echistatina (Beviglia, 1995): Inhiben metástasis en pulmón en ratones experimentales. (Mclane y cols, 1998)

53 Desintegrinas-MetaloproteasaSVMP´s - Significado en Hemorragia: Inhiben formación de tapón hemostático. Hidrólisis de membrana basal y matriz extracelular. Dominio desintegrina fija la proteína a receptor. Dominio Metaloproteasa destruye proteínas de matriz. Inhibe adhesión de plaqueta  HEMORRAGIA. Proteólisis (Metaloproteasa) Colágeno y Laminina (Lámina Basal) Hemorragia SINERGIA Inhibición Plaquetaria Receptores Integrina (Mclane y cols, 1998) (Huang, 1988,)

54 ADAM-TS

55 ADAM-TS ADAM-TS: Metaloproteasas que presentan motivos Trombospondina.Asociada a inflamación aguda. Trombospondina: Familia de glicoproteínas secretadas (TSP1-5) Presente en gránulos  de plaquetas y matriz subendotelial (TSP- 1): Abundantes en gránulos  de plaquetas. Importantes modulación de interacción célula – matriz. Induce activación plaquetaria mediada por IIbIII a través de interacción con (IAP). (Tang y Hong, 1999, Tang, 2001)

56 ADAM-TS ADAM-TS: No presentan dominio transmembrana. ADAMTS-1:Secretadas a la ECM ADAMTS-1: Inducida por IL-1 in vitro. Producida por fagocitos c/mecanismo de inmunidad innata. Induce expresión de moléculas de adhesión a célula endotelial. Inducida por LPS in vivo. Motivos TSP importantes en incorporación de ADAMTS a la ECM. (Tang y Hong, 1999)

57 Muchas gracias por su amable atención.

58 Trombospondina “Proteína Sensitiva a Trombina”Familia de glicoproteínas secretadas (TSP1-5) (TSP1 y 2): trímeros de 145 kDa cada cadena. (TSP3 y 5): Pentámeros de aprox.100 kDa cada cadena. Presente plaquetas y matriz subendotelial : (TSP- 1): Abundantes en gránulos  de plaquetas. Importantes modulación de interacción célula – matriz. Factor quemotáctico en células de músculo liso, neutrófilos y monocitos, fibroblastos. Induce proliferación y “spreadinig” Liberada como respuesta a activación plaquetaria por trombina. (Bornstein, 2001; Parise y cols, 2001)

59 Trombospondina Expresada durante: Desarrollo. Crecimiento.Respuesta a daño. No abundante en tejido animal adulto. Abundante en tejido de recambio constante Hueso. Delección del gen produce animales aparentemente normales. Observaciones detalladas muestran defectos tardíos. (Bornstein, 2001; Parise y cols, 2001)

60 Trombospondina Receptores:IIbIII; v3; IAP (Integrin-Associated Protein); GPIV; fibrinógeno y fibronectina unidos a integrina. Interacción con superficie plaquetaria es Ca+2 dependiente. Induce activación plaquetaria mediada por IIbIII a través de interacción con (IAP). (IAP): Dominio simple tipo inmunoglobulina extracelular, región de cinco segmentos transmembrana y pequeña cola intracelular. (IAP) se encuentra acoplado con receptor de siete segmentos transmembrana acoplados a Gi. (Bornstein, 2001; Parise y cols, 2001)

61 Dominio EF-HAND Integrinas: Subunidades  y : Subunidad :Sitios de unión de cationes divalentes. Indispensables para funcionamiento de la integrina. Subunidad : Región N-Terminal implicada en unión de catión divalente y ligando. Subunidad : Siete regiones repetitivas N-Terminales 3 ó 4 simulan secuencia consenso Dominio EF-HAND Responsable de la unión de cationes divalentes. También implicada en unión a secuencia RGD (Banères y cols, 1998)

62 Dominio EF-HAND Integrinas: Subunidad :Ligan 4 Ca+2 / molécula proteica. La sub unidad posee dos dominios de unión, cada uno capaz de unir dos Ca+2. Estructura secundaria del dominio es independiente del ión. (Banères y cols, 1998)