1 Diagnóstico General de las Enfermedades Infecciosas

2 ¿Qué debe esperar un clínico del laboratorio de Microbiología?Información para una decisión clínica. Normas de recogida y transporte de muestras. Identificación de microorganismos. Sensibilidad a los antimicrobianos. Control de antibioterapia. Procesamiento y respuesta rápida. Información actualizada.

3 Diagnóstico MicrobiológicoConfirmar o excluir un diagnóstico clínico Falso positivo: ITU Falso negativo: Meningitis Relevancia: Actividades a ejercer en el paciente en función del resultado Clínica: Tratamiento antimicrobiano precoz y adecuado Gravedad del proceso Epidemiologica: Declaración obligatoria Quimioprofilaxis

4 Diagnóstico Microbiológico: FasesRecogida de muestras clínicas (Prácticas): Importancia. Normas generales. Transporte de muestras clínicas (Prácticas): Viales. Condiciones de transporte. Medios de transporte. Diagnóstico: Directo. Indirecto.

5 Diagnóstico Directo/IndirectoDirecto. Implica la demostración del agente o componentes en los fluidos orgánicos. Indirecto. Implica la demostración de la huella que el agente ha dejado en su contacto con el sistema inmune (RI adquirida celular o humoral).

6 Diagnóstico Directo Visualización de microorganismos. Cultivo. Identificación y antibiograma. Detección de antígenos microbianos. Técnicas moleculares.

7 Diagnóstico Directo 1. Visualización de microorganismosExamen Directo Examen en fresco. Microscopía de campo oscuro. Microscopía electrónica. Tinciones: Gram. Ziehl: micobacterias. Tinciones fluorescentes. Giemsa: parásitos.

8 Microscopía óptica Examen en FrescoHifas

9 Microscopía de campo oscuro.Treponema pallidum

10 Microscopía Electrónica Herpes simplex

11 Tinción de Gram Uretritis gonocócica Streptococcus mitis

12 Tinción de Gram Bacillus anthracis

13 Tinción de Ziehl Neelsen B.A.A.R

14 Tinciones fluorescentes Auramina rodamina (MTB)

15 Tinción de Giemsa Filarias

16 Diagnóstico Directo 2. CultivoMedios artificiales Tipos. Condiciones de incubación. Cultivos celulares: Efecto citopático. Huevos embrionados. Animales de experimentación.

17 Medios de Cultivo Medios sólidos

18 Jarra para bacterias anaerobias

19 Cultivos Celulares Herpes Simplex

20 Diagnóstico Directo 3. Identificación y antibiograma

21 Diagnóstico Directo 4. Detección de antígenosAglutinación con partículas de látex (Ag capsular de Cryptococcus neoformans)

22 Diagnóstico Directo 4. Detección de antígenosInmunofluorescencia directa (IFD) Pneumocystis jiroveci Legionella pneumophila

23 Diagnóstico Directo 4. Detección de antígenosInmunocromatografía Otros ejemplos: Ag de Legionella y S.pneumoniae en orina, toxinas de Clostridium difficile en muestras de heces

24 D. Directo. 5. Técnicas molecularesAnálisis de material genético microbiano Técnicas de hibridación (sondas de ADN). (Identificación) Técnicas de amplificación (PCR). (Diagnóstico e identificación) Técnicas de tipado epidemiológico molecular (PFGE, RFLP,...). (Identificación) 2. Análisis de proteínas microbianas: MALDI-TOF (identificación)

25 Diagnóstico Directo 5. Técnicas molecularesPCR

26 Diagnóstico IndirectoDetección de RI específica humoral (Anticuerpos): Aglutinación ELISA IFI Detección de RI específica celular: Mantoux IGRAs Fijación del complemento. Inmuno blot y Western blot

27 Fundamento. D.indirecto-IgM -Baja avidez -IgG -Alta avidez

28 Fundamento. D. indirectoSuero sin anticuerpos Suero con anticuerpos Antígeno libre Antígeno se une a los anticuerpos Complemento se une al complejo Ag/Ac Sistema indicador: hematíes/ hemolisina Los hematíes intactos se depositan en el fondo del pocillo (punto rojo) Los hematíes se lisan (ausencia de punto) Reactivo No reactivo