1 Dr. FÉLIX DANIEL ANDUEZA LEAL ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL CHIMBORAZO RIOBAMBA, MAYO 2015

2 DEFINICIÓN AGUA MINEROMEDICINAL “ Aquella que recibe de los minerales alguna virtud extraña y se utiliza como medicamento” (Limón Montero, 1697) “Aquellas que procediendo de un manantial o fuente pueden ser utilizadas directamente con fines terapéuticos por haber sido reconocido por los organismos competentes, siendo por lo tanto verdaderos medicamentos”. (Armijo, 1968)

3 CLASIFICACIÓN DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES EN BASE A SU TEMPERATURA –HIPOTERMALES ‹ 20 0 C –MESOTERMALES ENTRE 30 0 Y 40 0 C –HIPERTERMALES › 40 0 C EN BASE A SU COMPOSICIÓN QUÍMICA –CLORURADAS SULFATADAS SULFURADAS –BICARBONATADAS FERRUGINOSAS CARBOGASEOSAS EN BASE A SU CONTENIDO MINERAL –OLIGOMINERALES ‹ 0,2 g/l DE RESIDUO SÉCO –MEDIOMINERALES ENTRE 0,2 Y 1,0 g/l DE RESIDUO SÉCO –MINERALES › 1,0 g/l DE RESIDIO SÉCO

4 CICLO HIDROLÓGICO Recarga= parte del agua infiltrada que alcanza la zona saturada Escorrentía subterránea Zona no saturada Zona saturada Escorrentía superficial Escorrentía subsuperficial o hipodérmica infiltración percolación Aguas subterráneas Zona impermeable Tiempo de tránsito= tiempo que tarda una particula de agua desde que alcanza la zona saurada hasta una captacion o sale a la superficie. Nivel freático Captación

5 BALNEARIOS DE AGUAS MINEROMEDICINALES

6 USOS TERAPEUTICOS DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES Afecciones del aparato locomotor. En todos estos procesos la vía tópica es la principal vía utilizada. Enfermedades renales para los que se utiliza la vía tópica. Afecciones de vías respiratorias. Entre ellas se utilizan distintas técnicas por vía inhalatoria. Afecciones vasculares periféricas Afecciones psicosomáticas Afecciones gastrointestinales. En estos casos se utiliza la vía oral Enfermedades dérmicas (San Martín y Valero, 2004)

7 ASPECTOS DEL ESTUDIO MICROBIOLÓGICO SANITARIOS –PATÓGENOS –MICROBIOTA AUTÓCTONA LEGALES –NORMATIVA MICROBIOLÓGICO –VIABLES NO CULTIVABLES ECOLÓGICOS –COMUNIDADES –PROPIEDADES EVOLUTIVO –ORIGEN DE LA VIDA

8 MICROBIOTA DEL AGUA MINERAL NATURAL MICROORGANISMOS VIABLES CULTIVABLES –Microorganismos totales –Microorganismos heterótrofos –Indicadores de calidad sanitaria –Microorganismos indicadores ecológicos MICROORGANISMOS VIABLES NO CULTIVABLES MICROORGANISMOS ENDOLÍTICOS TAPETES MICROBIANOS

9 MICROBIOLOGÍA DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES. N o son estériles.Poseen una Microbiota escasa.La microbiota depende de sus condiciones fisicoquímicas, ambientales y ecológicas. ( Chapelle, 2000; De la Rosa y Mosso, 2000; Leclerc y Da Costa, 2004).

10 MICROBIOLOGÍA DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES La Microbiota del agua mineral natural esta constituida por dos tipos de microorganismos:. Autóctonos. Alóctonos (Schmidt-Lorenz, 1976)

11 BAÑOS DE GUAYLLBABMBA RIOBAMBA. CHIMBORAZO. ECUADOR

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15 RECUENTO DE MICROORGANISMOS TOTALES Y VIVOS 10 ml 1 ml de naranja de acridina o 0,2 ml del kit Baclight live/dead 5 min en la oscuridad filtrar Microscopio de epifluorescencia Bacterias vivas: Bacterias muertas:

16 MICROORGANISMOS TOTALES Y VIVOS

17 INCUBAR A 22º C POR 5 DÍASINCUBAR A 37º C POR 2 DÍAS AGAR PCA 50 mL RECUENTO DE BACTERIAS HETERÓTROFAS

18 250 mL RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES AGAR CHAPMAN-LACTOSA- TRIFENIL-TETRAZOLIO INCUBAR A 30º C POR 24 - 48 hINCUBAR A 44,5º C POR 24 - 48 h

19 AGAR BAIRD PARKER 250 mL INVESTIGACIÓN DE Staphylococcus aureus CALDO CASEINA- SOJA INCUBAR A 37º C POR 24 HORAS INCUBAR A 37º C POR 48 HORAS AISLAR E IDENTIFICAR

20 AGAR CETRIMIDA 250 mL INVESTIGACIÓN DE Pseudomonas aeruginosa INCUBAR A 42º C POR 24 HORAS AISLAR E IDENTIFICAR

21 RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS FILTRAR 100 ml FILTRAR 10 ml IDENTIFICACIÓN AGAR SABOURAUD

22 GÉNEROS Y ESPECIES MANANTIALES MINEROMEDICINALES Piscina 1 Piscina 2 Ralastonia pickettii ++ Bacillus spp.++ Brevibacterium spp. ++ Methylobacterium spp. + - Corynebacterium aquaticum+ + Staphylococcus spp. -+ Pseudomonas aeruginosa++ Moraxella spp.+ GÉNEROS Y ESPECIES DE BACTERIAS HETERÓTROFAS AISLADAS EN LOS MANANTIALES MINEROMEDICINALES DE GUAYLLABAMBA

23 COLONIAS DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS AZULES

24 BACILOS GRAM POSITVOS IRREGULARES - Aerobio; Inmóvil - Oxidasa +; Catalasa (d) - No fermenta azúcares - Reducción nitratos + - Fosfatasa +; Gelatina - - Esculina +; Urea +...

25 ESPECIES DE MOHOS ENCONTRADAS EN AGUAS MINERALES NATURALES Penicillium spp.Cladosporium spp. Curvularia spp. Fusarium spp. Aspergillus spp. Chrysosporium spp. Cladosporium spp.Acremonium spp.

26 ASPECTOS A DESARROLLAR EN PROXIMAS INVESTIGACIONES. ESTUDIOS METAGENOMICOS. BIOPRPSPECCION BIOLOGICA. ESTUDIOS Y CARACTERIZACION DE RESISTOMAS. VADEMECUM DE LAS AGUAS MINEROMEDICINALES DEL ECUADOR

27 Bacterias: estado “starvation survival ”= “estado viable no cultivable” (SVNC)* Aguas minerales subterráneas: sistemas con bajo nivel de materia orgánica y biodisponibilidad limitada = oligotróficos (DOC= 0,1-0,7 mg/L) VIABLES NO CULTIVABLES responden a la limitación de nutrientes y estrés: sistemas de transporte,  afinidad por nutrientes rutas metabólicas alternativas,  cap asimilación otras fuentes de N, P, Fe y C formas de resistencia (esporas, cistos, f. latencia…) nanobacterias, ultramicrobacterias (  0,3 μm) “microcélulas” formación de biofilmes * metabólicamente activas, incapaces de dividirse: Enterobacteriaceae, Vibrio, Aeromonas, Campylobacter, Helicobacter, Legionella

28 Ecosistemas de las aguas minerales muestran elevada diversidad microbiana fenotípica y genotípica DIVERSIDAD MICROBIANA Y ESPECIFICIDAD 16S rRNA RFLP Restriction Fragment Length Polimorphism Microbiota autóctona de aguas minerales

29 MICROORGANISMOS ENDOLÍTICOS Lyngbya Chroococcus Synechocystis Anabaena Micrografías electrónicas (LTSEM-BSE) de los microorganismos endolíticos en las rocas carbonatadas Micrografías ópticas del cultivo de algas y cianobacterias: Contraste de fases y autofluorescencia roja

30 TIPOS DE TAPETES Superficie Epilíticos

31 50μm TAPETE DE SUPERFICIE LT-SEM M. confocal, naranja acridina FILTRO Contraste de fases 20x Oscillatoria

32 Zona superior Zona inferior/media

33 MUCHAS GRACIAS EQUIPO DE TRABAJO DRA. SANDRA ESCOBAR. ESPOCH. ECUADOR MSc. JUDITH ARAQUE. ULA. VENEZUELA BACHILLER ANA VANESA VEINTIMILLA. ESPOCH. ECUADOR DR. GERARDO MEDINA. ESPOCH. VENEZUELA DR. FELIX ANDUEZA. PROMETEO ESPOCH.VENEZUELA