1 EL PERFIL DEL ADN Dr. José Antonio Nastasi CatanesePhD en Genética Humana Director (E) Centro de Microscopía Electrónica Profesor Agregado UDO-Núcleo Bolívar

2 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADADN: Acido Desoxirribonicleico. Molécula de de la Vida. Se encuentra en todas las células nucleadas.

3 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADTipos de ADN Tipos de Proporción Características ADN del Genoma De copia Incluye la mayor parte de los UNICA genes. Se localiza a lo largo de todo el genoma. Disperso o Está mezclado en los genes y Repetitivo otros tipos de ADN de copia simple. Se localiza a lo largo de Satélite 15 Secuencias muy repetidas. Muy localizadas en lugares específicos (centrómeros y telómeros).

4 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADTipos de ADN Tipos Unidades de Repetición ADN satélite > 100 ADN minisatélite 7 – 100 (VNTR) * ADN microsatélite (STR) * * Con gran variabilidad alélica que los hace marcadores genéticos ideales.

5 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADPOLIMORFISMO Dícese de los cuerpos que se presentan bajo diversas formas, sin cambiar la naturaleza del mismo. En otras palabras, son las cosas que pueden tener formas alternativas sin modificar la función para la cual fueron diseñados. Grupo sanguíneo ABO. POLIMORFISMO GENETICO Cuando en un locus el alelo más frecuente no alcanza el 99% de frecuencia. Estos polimorfismo son empleados como herramientas genéticas moleculares en la identificación de individuos. Fenotipo, Genotipo, Diploides, Locus, Alelo.

6 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADHISTORIA Grupos sanguíneos ( ) Proteínas séricas ( ) HLA 1970- ADN RFLP (Jeffreys) Sondas multilocus Vs sondas unilocus ADN VNTR (Nakamura) Minisatélites. ADN STR (PCR Mullis) Microsatélites.

7 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADPERFIL GENÉTICO Grupo de marcadores polimórficos (STR, SNP, u otro) que combinados dan una unitariedad tan buena como las huellas dactilares. PERFIL GENETICO DE UN INDIVIDUO Combinación de genotipos de un individuo en un grupo de marcadores polimórficos donde la ocurrencia de esa combinación de genotipos pueda ser casi única o única.

8 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADCaracterísticas de un marcador: Polimórficos. Estables. Tasa de mutación muy baja. Validez. Fácil aplicación e interpretación objetiva Polimorfismos estudiados y reconocidos mundialmente. Reproducibles mundialmente.. El ADN puede aislarse a partir de casi todas las células del organismo; se obtiene de cualquier tejidos del cuerpo: Sangre. Semen. Cabello. Saliva , etc...

9 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADSangre: es la más sencilla y útil. Se conserva congelada. puede ser extraída de superficies lisas (vidrio, metal, plastico). Cuando se extrae de alfombras y otras fibras densas, requiere pasos adicionales, por contener sustancias que inhiben el proceso. Semen: Es la evidencia más común. Las células espermáticas pueden ser lavadas y guardadas en forma de coágulos y conservadas durante años. Se evidencian al microscopio mediante tinción. Tejidos: Se obtienen de visceras, múculos, huesos , píezas dentarias, estas últimas presentan mejor estado de conservación. Raíz del Cabello: contiene sólo un trazo de ADN Y por lo general no son suceptibles a pruebas de rutina forense.

10 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADSaliva: Se extrae de cualquier superficie donde se encuentra depositada (vasos, colillas de cigarro) Orina: Son menos comunes ya que los individuos sanos no expulsan células nucleados. Producto de la Concepción: Generalmente usados para alegación de paternidad criminal. CADENA DE CUSTODIA Procedimiento a través del cual se establece una relación directa de la muestra con la escena de los hechos, cuyo procedimiento debe asegurar que la muestra tomada salió del sitio del origen.

11 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADRequisitos de la Cadena de Custodia : Identificación de la persona que realiza la extracción. Método de conservación de la muestra hasta su envío. Identificación de la persona que presenta el paquete con las muestras y su firma. Medio de envío y su identificación PRUEBAS PARA EL ANALISIS DEL ADN : Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Secuenciación del ADN.

12 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADPCR ADN Molde Taq. Polimerasa DNTPs Primers + 1er Paso: Desnaturalización. 2do. Paso: Alineación. 3er. Paso: Extensión.

13 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADPCR Al cabo de 1 ciclo

14 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADREACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR): Es precisa Se pude realizar con muy poca cantidad de ADN. Puede ser visualizada a simple vista, no necesita de sondas ni pasos adicionales. Se puede realizar en pocas horas. Es específica.

15 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADMÉTODO DE SANGER A T G G Más grande Más pequeño G A T C Secuencia T A G C A T C A G C G T C A A T A C C 1 ddGTP ADN Polimerasa 4 dNTP (dTTP, dCTP, dATP, dGTP 2 ddATP 3 ddTTP 4 ddCTP Se colocan en el termociclador, luego se separan con una electroforesis de ácidos nucleicos.

16 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADDESCRIPCIÓN DEL MÉTODO Extracción de ADN: Elección de locus a estudiar: TH01,vWA, F13A01, FESFPS, TPOX, CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317, LPL, F13B, HPRTB. Realizar PCR según protocolo. Electroforesis y revelado. Análisis.

17 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADESTUDIO DE LOCUS STR. Regiones constantes 110 Alelo 5 Alelo 4 106 Alelo 3 102 98 Alelo 2 30pb 4pb por unidad 60pb

18 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADInterpretación de la prueba Madre Padre Hijo Madre Padre Hijo 23 23 20 20 18 18 15 Exclusión Inclusión

19 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADVíctima Semen Sangre Piel Victimario Víctima Semen Sangre Piel Victimario 13 13 16 16 21 21 23 23 28 Inclusión Exclusión

20 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADANALISIS PATRILINEAL Cromosoma Y Regiones pseudoautosomicas Regiones hipervariables. Se heredan en bloque. Se transmiten de padres a hijos varones. Yq13 a Yqter. Región pseudoautosómica Región heterocromática polimorfica Región pseudoautosómica

21 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADANALISIS MATRILINEAL ADN Mitocondrial. Tiene pb. Región Dloop. Se compara con la secuencia de Anderson Se hereda de madres a hijos, lo cual indica que: Región Dloop 1

22 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADComponente del loci Rango de tamaño de las escaleras alélicas Alelos de la escalera alélica Otros alelos conocidos CTT CSF1PO 7-15 6 TPOX 6-15 No TH01 5-11 9.3 FFv F13A01 4-9 y 11-16 3.2 y 10 FESFPS 7-14 vWA 13-20 11-21 SilverSTR III D15S539 5 y 8-15 D7S820 6-14 D13S317

23 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADINTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA:

24 PERFILES GENÉTICOS EN FORÉNSICA Y PATERNIDADSe realiza en forma pública en sólo 3 ciudades de Venezuela Maracaibo, Caracas y Ciudad Bolívar. En Ciudad Bolívar se realiza desde finales del año 1999. Se han realizado más de 200 pruebas de ADN.