1 Enzimas de restricción tipo IILas enzimas de restricción son generadas naturalmente por muchas especies bacterianas Protegen a las bacterias de invasión de DNA extraño, especialmente por bacteriofagos. Muchos cientos de enzimas están disponibles comercialmente. Enzimas de restricción tipo II
2 Estas enzimas se unen a secuencias específicasEstas son típicamente palindrómicas Por ejemplo , el reconocimiento de EcoRI es 5’ GAATTC 3’ 3’ CTTAAG 5’ Algunas enzimas digieren el DNA en “fragmentos pegajosos” Otras generan extremos romos.
3 Figure 19-2 Some common restriction enzymes, with their recognition sequences, cleavage patterns, and sources.
4 DNA Recombinante Add DNA ligase which covalently links the DNA backbones
5 Pasos para la clonación de un Gen 1. seleccionar el vectorFigure 19-6 A diagram of the plasmid pUC18 showing the polylinker region, located within a lacZ gene. DNA inserted into the polylinker region disrupts the lacZ gene, resulting in white colonies that allow direct identification of bacterial colonies carrying cloned DNA inserts.
6 2. Digerir el vector y el DNA blanco con la misma enzima de restricción DNA recombinante
7 Transformación Bacteriana.3. Transformar células bacterianas Transformación Bacteriana. Células competentes
8 DNA copia (cDNA) Cola de poli A
9 Electroforesis en gel La electroforesis de ácidos nucleicos separa a los fragmentos de acuerdo a su tamaño. Fragmentos pequeños migran más rápido que fragmentos grandes.
10 Figure Electrophoretic separation of a mixture of DNA fragments that vary in length. The photograph shows an agarose gel with DNA bands corresponding to the diagram.
11 Hibridación y reconocimiento de secuencias con alta homología
12 Marcaje de un fragmento de ADN
13 Southern y Northern blot
14 Western blot
15 Bibliotecas genómicas
16 Bibliotecas de cDNA
17 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
18 La amplificación es exponencial
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20 Usos del PCR
21 Para poder amplificar este segmento de ADN, diseñar los primers o cebadoresque son necesarios para la amplificación
22 Secuenciación del DNA
23 Microarreglos
24 Proteómica
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