1 Estructura y función -Comportamiento en solución -Secuenciación de proteínas Proteínas

2 Solubilidad de las proteínas pH Constante dieléctrica del solvente Fuerza iónica Temperatura

3 Efecto del pH en la solubilidad de las proteínas

4 Constantes dieléctricas y momento dipolar de algunos solventes comunes

5 Solubilidad de la carboxi- Hb a diferentes fuerza iónicas Salting in Salting out Efecto de la fuerza iónica en la solubilidad de las proteínas

6 6 Desnaturación de proteínas Urea

7 Frederick Sanger fue el primero En 1953, secuenció las dos cadenas de la insulina Secuenciación de proteínas

8 1.Si hay más de una cadena, se deben separar 2.Romper los enlaces disúlfuro 3.Determinar la composición aminoacídica 4.Determinar el amino y carboxilo terminal 5.Romper la cadena en fragmentos chicos 6.Secuenciar Pasos a seguir para la secuenciación de una proteína

9 Hidrólisis ácida (6M HCl) Cromatografía Determinación composición aminoacídica

10 Uso de enzimas proteolíticas Bromuro de cianógeno Determinación de la secuencia aminoacídica Obtención de péptidos pequeños

11 Proteasas

12 Cyanogen Bromide Cleavage at Methionine Residues

13

14 Secuenciación de proteínas

15 Determinación de la sequencia primaria de una proteína

16 Estudio de proteínas utilizando la espectrometría de masas

17 Estudio de proteínas por espectrometría de masa/masa

18 Peptide Fragmentation Peptides tend to fragment along the backbone. Fragments can also loose neutral chemical groups like NH 3 and H 2 O. H...-HN-CH-CO... NH-CH-CO-NH-CH-CO-…OH R i-1 RiRi R i+1 H+H+ Prefix FragmentSuffix Fragment Collision Induced Dissociation

19 N- and C-terminal Peptides N-terminal peptides C-terminal peptides

20 Terminal peptides and ion types Peptide Mass (D) 57 + 97 + 147 + 114 = 415 Peptide Mass (D) 57 + 97 + 147 + 114 – 18 = 397 without

21 Theoretical Spectrum

22 Theoretical Spectrum (cont’d)

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