1 Estudio de la sensibilidad antimicrobiana: definición, metodología y criterios internacionales de interpretación I. López-Hernández UGC de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica Hospital Virgen Macarena

2 Microorganismo-----AntimicrobianoANTIBIOGRAMA Microorganismo-----Antimicrobiano

3 Microorganismo-----AntimicrobianoCATEGORÍAS CLÍNICAS SENSIBLE INTERMEDIO RESISTENTE

4 OBJETIVOS Antibioterapia empírica Antibioterapia dirigidaDetección de mecanismos de resistencia Mapas de resistencia

5 SELECCION DE ANTIMICROBIANOSInterés clínico Lectura interpretada de antibiograma Vigilancia epidemiológica de resistencia

6 CRITERIOS INTERNACIONALES DE INTERPRETACIONCLSI Clinical and Laboratory Standards Institute EUCAST European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing SFM Societe Française De Microbiologie COESANT Comité Español del Antibiograma

7 CRITERIOS INTERNACIONALES DE INTERPRETACIONMétodos estandarizados Cepas control ATCC (American Type Culture Collection)

8 METODOLOGIA METODOS DE DIFUSION EN AGAR Difusión con discoEpsilon test (E test) METODOS DE DILUCIÓN Dilución en agar Dilución en caldo

9 DIFUSION Difusión con disco Inóculo: Escala McFarland 0.5Siembra uniforme en medio sólido

10 DIFUSION Difusión con disco Inóculo: Escala McFarland 0.5Siembra uniforme en medio sólido Colocación discos de antibióticos (evitar superposición)

11 DIFUSION Difusión con disco Inóculo: Escala McFarland 0.5Siembra uniforme en medio sólido Colocación discos de antibióticos (evitar superposición) Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

12 DIFUSION Difusión con discoLectura de resultados: Medir diámetro del halo de inhibición

13 DIFUSION Difusión con disco Interpretación de resultados CUALITATIVO

14 DIFUSION Difusión con disco VENTAJAS Fácil Rápido BaratoINCONVENIENTES Método cualitativo

15 DIFUSION E test (Epsilon test)Gradiente exponencial de las concentraciones de antimicrobianos

16 DIFUSION E test (Epsilon test) Inóculo: Escala McFarland 0.5Siembra uniforme en medio sólido Colocación tiras (orientación tira) Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

17 DIFUSION E test (Epsilon test) Lectura de resultados

18 DIFUSION E test (Epsilon test)Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

19 DIFUSION E test (Epsilon test) VENTAJAS Fácil Rápido CuantitativoINCONVENIENTES Coste

20 DILUCION Dilución en caldo

21 DILUCION Dilución en caldo Solución de antibióticoInóculo: Escala McFarland 0.5 Dilución 1:100 Macrodilución/Microdilución Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

22 DILUCION Dilución en caldo Lectura macrodiluciónInterpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

23 DILUCION Dilución en caldo Lectura microdiluciónInterpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

24 DILUCION Dilución en caldo Sistemas semiautomatizados

25 DILUCION Dilución en caldo Sistemas semiautomatizados

26 DILUCION Dilución en caldo VENTAJAS Cuantitativo INCONVENIENTES CosteLaborioso

27 DILUCION Dilución en agar

28 DILUCION Dilución en agar Preparación de placas con antibióticosReplicador (múltiples microorganismos) Inóculo Escala McFarland 0.5 Dilución 1:10 Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

29 DILUCION Dilución en agar Lectura dilución en agar: crecimientoInterpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

30 DILUCION Dilución en agar VENTAJAS Cuantitativo INCONVENIENTESComplejo Coste

31 A. Capacidad bactericidaMETODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida CONCENTRACION MINIMA BACTERICIDA (CMB) CURVAS DE LETALIDAD ACTIVIDAD BACTERICIDA DEL SUERO Uso en investigación No existen técnicas normalizadas Baja reproducibilidad Fase de crecimiento del inóculo Dificultades con microorganismos exigentes

32 1. Concentración mínima bactericidaMETODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida 1. Concentración mínima bactericida

33 2. Curvas de letalidad METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericidaMétodo cinético de determinación del poder bactericida

34 3. Actividad bactericida del sueroMETODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida 3. Actividad bactericida del suero

35 B. Actividad combinada de antimicrobianosMETODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos METODO DE TABLERO (CHECKERBOARD) CURVAS DE LETALIDAD DIFUSION-DISCO (DISCOS DE APROXIMACION) EFECTOS DE COMBINACION Indiferencia Adición Sinergia Antagonismo

36 METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 1. Tablero (Checkerboard assay)

37 METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 2. Curvas de letalidad

38 METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 3. Difusión

39 METODOS BIOLOGIA MOLECULARDetección de mecanismos de resistencia

40 AREAS DE INVESTIGACION

41 AREAS DE INVESTIGACION

42 AREAS DE INVESTIGACION

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