1 Evaluación de la Inmunidad INMUNODEFICIENCIAS HIPERSENSIBILIDAD AUTOINMUNIDAD

2 Evaluación Inmunidad humoralMedición de la concentración Ig en suero Linfocitos B CD19 y CD20

3 Inmunidad celular (CMI)Pruebas cutanéas de hipersensibilidad Paperas, PPD, candida, toxoide tetánico, toxoide diftérico Estimulación in vitro de linfocitos PHA, PWM, Con A, antígenos, superantígenos, células alogénicas, anticuerpos anti CD3, CD2, CD43, (CD11a,CD18). Linfocitos activados con PMA, ionomicina, CD40L Fagocitos Ingestión de partículas Prueba de reducción del NBT

4 Sangre: leucocitos totales Médula ósea: biopsia OTROS Sangre: leucocitos totales Médula ósea: biopsia Biopsia: intestinal, piel, timo Complemento

5 TÉCNICAS (FUNDAMENTOS)

6 EIA Aplicaciones Ig, CD, CitocinasAg Ab E S P desarrollo color 2oAb S S PP 2oAb antiCD CD antiCD4 -E S P desarrollo color SS PP anti1L IL antiIL-12 -E S P desarrollo color SS PP

7 Hemólisis Localizada en GelLa Técnica de Jerne demuestra la funcionalidad de las células plasmáticas antígeno específicas

8 SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES

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10 SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTEDiluir 1:2 con BSS 5 mL + Heparina Estratificar 1500 rpm x 45 min 2.5 mL sangre + 3 mL Ficoll-Hypaque Plasma Células mononucleares Ficoll-Hypaque GR y Granulocitos

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12 EVALUACIÓN DE LA INMUNIDADEl sistema inmunológico se evalúa mediante pruebas que permiten su identificación, cuantificación y caracterización funcional

13 INMUNIDAD CELULAR Pruebas cutáneas Cuantificación de linfocitos T y BRespuesta proliferativa a mitógenos (fitohemaglutinina, concanavalina A) Pruebas para macrófagos y neutrófilos (Fagocitosis : movilidad, quimiotaxis, reconocimiento, ingestión, digestión, muerte intracelular) Expresión y producción de citocinas

14 OBSERVAR LA FORMACIÓN DE ROSETAS3 ml BSS 1500 rpm x 10 min resuspender con 3 mL BSS resuspender en 0.5 mL BSS Se cuenta y se ajusta 4 x 106 cel/ml desechar sobrenadante 0.25 mL de células 4x mL GRC al 1% 500 rpm x 3 min 37 C x 3 min 4 C, 4 horas OBSERVAR LA FORMACIÓN DE ROSETAS

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17 INMUNOFLUORESCENCIA CITOMETRÍA DE FLUJO FACS APLICACIONES: CD, MHC, CITOCINAS INTRACELULARESPermite identificar células individuales por sus Ag superficiales Marcaje flujo laser detección CPU histograma continuo desviación luz # emisión eventos fluorescencia

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20 SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTE DE DENSIDAD Y ENSAYOS DE PROLIFERACIÓNC mononucleares microplaca PHA 3HTdr

21 FAGOCITOS

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24 Fagocitosis

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35 PRUEBA DE REDUCCIÓN DEL NBTPrueba funcional. Capacidad para producir anión superóxido NBT compuesto amarillo Formazan oxidado reducido hidrosoluble PMA LPS Partículas O2 + NBT Formazan

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38 Where are macrophages found in the human body?What cells carry out phagocytosis? What is a phagosome? What is in a lysosome? How is a phagolysosome formed? What happens during an “oxygen burst”? What are the end products of phagocytosis? What happens to the products of phagocytosis?