1 EXPRESION DE MOLECULAS PROAPOPTOTICAS Y ANTIAPOPTOTICAS EN LINFOCITOS DE PACIENTES CON DIABETES TIPO 1 DE DIAGNOSTICO RECIENTE Pérez-Bravo F1, Valencia E1, Salas-Pérez F1, Codner E2, Arredondo M3, Carrasco E1.. 1Laboratorio de Genómica Nutricional. Departamento de Nutrición. Facultad de Medicina. Universidad de Chile. 2IDIMI.Hospital San Borja Arriarán, Universidad de Chile 3 Laboratorio de Micronutrientes. INTA, Universidad de Chile (Fondecyt ).

2 ESCENARIOS GENETICOS EN LA DM1

3 ACTOR UNICO EN LA AGRESIONACCION AGRESORA CONCERTADA EFECTO RESPUESTA INNATA-ADAPTADA MECANISMOS DE EVASION DE LA AGRESION

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8 NECROSIS-APOPTOSIS EN LA DECLINACION DE LA CELULA BETA ?RESPUESTA INMUNE INNATA ? ADAPTATIVA? MECANISMOS APOPTOTICOS INTRINSECOS EN LA CELULA BETA MECANISMOS NECROSIS AMBIENTE FAVORABLE PARA LA APOPTOSIS Y LA NECROSIS EN CELULAS INVOLUCRADAS EN EL PROCESO

9 DM1 Y SISTEMA INMUNE: UNA RELACION HISTORICAPD-1 L PD-1

10 LYP: TIROSINA FOSTATASA LINFOIDE (1p13)PTPN22 Arg 620 (R) Trp 620 (W) El alelo predisponente codifica para una fosfatasa más activa, que suprime la señalización a través de TCR

11 Modelo para la variante del gen PTPN22PTPN22*R620 PTPN22*W620 CELULAS TIMO AUTOANTÍGENOS AUTOANTÍGENOS LYP TIMOCITOS LYP LYP LYP TIMOCITOS A A A A LYP LYP LYP APOPTOSIS SELECCION POSITIVA DE CELULAS T CON BAJA AFINIDAD MHC SELECCION POSITIVA DE CELULAS T CON BAJA AFINIDAD MHC SELECCIÓN POSITIVA DE CELULAS T CON MODERADA AFINIDAD POR MHC

12 PAPEL DE LA INMUNO-MODULACION NEGATIVA

13 AGOTAMIENTO CELULAR HIPERACTIVACION PERDIDA DE REGULACION NEGATIVAALTERACION APOPTOTICA DE LA CELULA T ACTIVADA

14 AGRESORES EN DM1 MUERTE CELULAR “Timing Apoptótico” CD4+ CD8+IL-2 IL-1 TNF INF CELULAS DENDRITICAS IL-1 TNF INF MACROFAGOS IL-1 TNF INF CD4+ CD8+ Fas-L O· NO Fas ACTIVACION DE CASPASAS PERFORINA TNF TNF-R APOPTOSIS GRANZYMA B MUERTE CELULAR “Timing Apoptótico”

15 APOPTOSIS Y DIABETES TIPO 1INTERACCION DE LOS GENES DE REGULACION NEGATIVA DEL LINFOCITO T: CTLA-4 Y PD-1 EN LOS EVENTOS APOPTOTICOS ASOCIADOS A LA PREDISPOSICION A LA DIABETES TIPO 1 (FONDECYT ) Francisco Pérez Bravo Ethel Codner Dujovne Miguel Arredondo Olguín Elena Carrasco Piña

16 CELULA BETA PANCREATICA LINFOCITO T (CD4+) (CD8+)

17 PAPEL DE LA INMUNO-MODULACION NEGATIVAREGULADOR NEGATIVO 2 LINFOCITO CELULA DEL PANCREAS REGULADOR NEGATIVO 1

18 CELULAS MONONUCLEARESESTUDIO GENETICO DE CTLA-4 Y PDCD1 ADN ESTUDIO DE ANTICUERPOS CONSENTIMIENTO 1 SUERO 5 ml de sangre Todos los niños CELULAS MONONUCLEARES (LINFOCITOS CD4+) CONSENTIMIENTO 2 10 ml de sangre Niños > 10 años ARN mensajero que codifica para proteínas de muerte celular CULTIVO POR 36 HORAS EN PRESENCIA Y AUSENCIA DE GLUCOSA

19 Es distinta la expresiónde moléculas de apoptosis en el diabético ? Existe asociación entre la genética que controla la regulación negativa con estas moléculas?

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22 PRO-APOPTOTICO DOWNREGULATED

23 PRO-APOPTOTICO

24 PRO-APOPTOTICO

25 ANTI-APOPTOTICO

26 ANTI-APOPTOTICO

27 ANTI-APOPTOTICO UP-REGULATED

28 Sobrevivencia de célula ß↓ APOPTOSIS  Producción NO  Señalización  Generación de energía  Reparación  Producción de insulina/función ß  Defensa CITOQUINAS CASPASAS NECROSIS NECROSIS Sobrevivencia de célula ß Figure 2: The functional effect on cytokine-induced pathways changes the balance between the destructive and the protective mechanisms in favor of the destructive. Here illustrated by a decrease in energy generation, insulin production/b-cell function and cellular defense and an increase in NO production, cytokine-signaling, apoptosis and cellular repair. Destrucción de célula ß  APOPTOSIS

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