1 Herramientas de la Biología MolecularMaterial gráfico Secc.Genética Fac. de Ciencias

2 Técnicas de manipulación genéticaAislamiento Amplificación Secuenciación Expresión DE GENES

3 Los primeros avances 1965 - Arber y col. Enzimas de restricciónBerg. Trabajo con el virus SV40: posibilidad de integrar un fragmento de ADN al genoma de una bacteria (ADN recombinante!) Cohen y Boyer. Primer plásmido recombinante (un gen de anfibio) Moratoria. Conferencia de Asilomar

4 BASES FÍSICAS DE LA HERENCIA: CROMATINA Y CROMOSOMASREPLICARSE CONTROLAR LA EXPRESIÓN DEL RASGO DE CAMBIAR (POR MUTACIÓN

5 ENZIMAS DE RESTRICCIONArber y col. Smith y Nathan . Premio Nobel Enzima de tipo II. Ej: Eco RI (E.coli cepa RY13) Reconocimiento y corte: GAATTC CTTAAG ----G AATTC--- ----CTTAA G---

6

7 Los vectores Llevan un ADN foráneoson capaces de ingresar a una célula y replicarse dentro de ella

8 Plásmidos * ADN circular extracromosómico* Se replican autónomamente, utilizando enzimas de la bacteria * No.copias/bacteria: 1 a 3000 * Tamaño pequeño (3 kb) * Inmóviles

9 Como vectores * Marcadores * sitio de policlonaje* segmento del operón lac para una región de la beta glactosidasa * Capacidad 15 kb

10 Obtención de ADN en cantidad

11 Tipos de ADN a clonar ADN complementario ADN sintético ADN genómico

12 GENOTECA: clonado de un juego completo delgenoma de una especie SONDA: ácido nucleico marcado cuya complementariedad localiza una secuencia determinada

13 Biblioteca genómica

14

15 Otros vectores en procariotas* Bacteriófagos. Fago lambda ADN doble cadena de 48,5 kb, con extremos que le permiten circularizarse permiten insertos más grandes * Cósmidos: plásmidos con regiones cos de fagos insertos de kb

16 CROMOSOMAS Y CARIOTIPOS2n = 46 (XX/XY) Cromosomas de tipo metacéntricos submetacéntricos y acrocéntricos. Metafase mitótica humana. Técnica standard, tinción con giemsa

17 Podemos conocer la secuencia

18 Electroforesis

19 Cómo se observa tras la electroforesis

20 Ensayo de Southern blot

21

22 PCR Reacción en cadena de la polimerasa Emplea cebadores específicosUtiliza una polimerasa resistente al calor (Taq) Amplifica exponencialmente una secuencia determinada

23 Los glóbulos rojos

24 ANEMIA FALCIFORME

25 El fenotipo a nivel molecular Resultado de la electroforesis

26 La molécula de hemoglobina

27 La base molecular de la anemia falciformeCROMOSOMA 11 GGTCTCCTC El gen ocupa un lugar (LOCUS) en el cromosoma. G G T C T C C C C A G A G G CAC GTG

28