1 Información general Clases teóricas y practicas semanales.Cambios de comisión: sólo en las dos primeras semanas de clases con el correspondiente trámite en despacho de alumnos (presentar constancia en la cátedra). Tendrán 2 exámenes parciales escritos teórico-prácticos.

2 Promoción: Asistir al 80 % de las clases prácticas. DOS FALTAS. Aprobar al menos con 7 puntos los 2 exámenes parciales. NO SE PROMEDIAN LAS NOTAS. Tener aprobadas las asignaturas correlativas. No se pueden recuperar parciales para promocionar. Regularización: Asistir al 80% de las clases prácticas. DOS FALTAS. Aprobar al menos con 4 puntos los 2 exámenes parciales. NO SE PROMEDAN LAS NOTAS. Se puede recuperar un examen parcial por ausencia o aplazo.

3 Técnicas para el estudio de microorganismos del sueloPRÁCTICO N° 1 Técnicas para el estudio de microorganismos del suelo Objetivo: Conocer las técnicas básicas para el análisis microbiológico del suelo Normas prácticas para el muestreo de suelo Técnicas para el cultivo de microorganismos Técnicas de observación al microscopio Métodos de aislamiento y conservación

4 Normas prácticas para el muestreo de sueloDiseño de muestreo: Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza Profundidad: 0 – 20 cm Acondicionamiento de las muestras Preparación de las muestras en laboratorio

5 Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del loteLoma 15 Submuestras = 1 Muestra Medialoma Bajo Agricultura de Precisión Imagen Satelital Mapa de Rendimiento Mapa de Ambientes

6 Elementos de muestreo Pala Barreno Manual Barreno Hidráulico

7 Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranzaSiembra directa Labranza convencional Rastrojo de maíz Rastrojo de soja Suelo laboreado

8 Forma de muestreo: profundidad0 cm. 20 cm.

9 Acondicionamiento de las submuestras~200 g.

10 Preparación de las muestras en laboratorioOreado Mínimo 24 hs. Tamizado Embolsado y Rotulado Conservación

11 Portaobjeto enterradoVisualización de microorganismos: porta objeto enterrado Suelo en estudio Riego Portaobjeto enterrado Incubación

12 Actividades Preparación de muestras de suelo en laboratorio: tamizar, embolsar y rotular. Visualización de microorganismos de suelo: enterrar un portaobjeto.

13 Técnicas para el cultivo de microorganismosRequerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio: Condiciones de asepsia: esterilización Medios de cultivos Condiciones ambientales

14 Condiciones de asepsia: esterilizaciónEsterilización: eliminar todos los organismos vivos Métodos de esterilización: Calor: húmedo y seco Radiación Filtración Productos químicos

15 Calor húmedo: AutoclaveCombinación de calor, presión y humedad Para sustancias acuosas Temperatura de esterilización: 121°C - 20 minutos A gas con regulación manual Eléctrica con regulación automática

16 Calor seco: Horno de esterilizaciónPara materiales estables al calor (vidrio, metal, porcelana etc.) Vista exterior Temperatura de esterilización: 160 °C Tiempo: 2 hs Vista interior

17 Otros métodos de esterilizaciónRadiación UV: superficies, aire y agua Filtración: soluciones lábiles Filtro Agua Oxigenada Alcohol etílico Hipoclorito Formol Bicloruro de mercurio Productos químicos: mesada, manos, tapones, etc.

18 Medios de cultivos Definición: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el crecimiento de microorganismos Tipos: Generales Selectivos Composición química: fuente de carbono, fuente de nitrógeno, fuente de energía, base mineral y factores de crecimiento Características: líquidos o sólidos: agentes solidificantes

19 Composición de medios de cultivosMedio selectivo: Fijadores de Nitrógeno Medio general FUENTE COMPUESTO CANTIDAD Fuente de C y energía Sucrosa 20 g Base mineral Fosfato di potásico 0.05 g Fosfato monopotásico 0.15 g Cloruro de calcio 0.01 g Sulfato de magnesio 0.2 g Molibdato de sodio 0.002 g Cloruro férrico Carbonato de calcio 0.1 g Agua Agua destilada 1000 ml pH = 7 FUENTE COMPUESTO CANTIDAD Fuente de C y energía Almidón 12 g Fuente de N NO3 Na 0.5 g Base mineral PO4 HK2 1.0 g SO4 Mg 7 H2O Agente solidificante Agar 15 g Agua Agua destilada 1000 ml pH = 7

20 Preparación de medios de cultivo Pesar componentes sólidos:colocar recipiente para pesar tarar encender registrar la lectura colocar el componente a pesar

21 Disolver con agua destilada: hidratarcomponentes sólidos agregar agua disolver

22 Regular pH: pHmetro encendido y lavado lectura soluciones reguladorasprotección del electrodo lavado del electrodo

23 Preparación de medio sólidoagregar agar medio líquido fundir al calor medio agarizado

24 Fraccionar y acondicionar para esterilizarFraccionamiento de medio líquido Fraccionamiento de medio sólido (en caliente) Acondicionado para esterilizar

25 Esterilizar en autoclaveMedios en “Pico de flauta”

26 Cultivo de microorganismos del suelo en medio líquidoSiembra Dilución Incubación Actividad: colocar una alícuota de suelo en medios general y selectivo.

27 Preparación de muestras en laboratorioTamaño del lote Muestreo de suelo Cantidad de muestras 0-20 cm. con rastrojos Profundidad Topografía Composición n° submuestras Guardar en conservadora Una muestra Preparación de muestras en laboratorio Oreado Tamizado Envasado y Rotulado Conservación en heladera

28 Esterilización en autoclaveLaboratorio Práctico 3 Práctico 1 Esterilización Autoclave - horno Radiación Filtración Productos químicos Medio de cultivo Observación Aislamiento Composición química Base mineral Fuente de carbono Fuente de energía Agua Preparación de medios Líquidos Pesar drogas Disolver con agua destilada Regular pH Fraccionar Sólidos Pesar drogas Disolver con agua destilada Regular pH Agarizar Fundir Fraccionar Esterilización en autoclave * Visita al Laboratorio de Microbiología Agrícola F.C.A. Siembra de suelo Incubación