1 Instituto de VirologíaAMEVEA Aspectos de la interacción virus-hospedador a tener en cuenta en el diagnóstico y control de la Laringotraqueítis Infecciosa Ariel Vagnozzi Instituto de Virología INTA Castelar. Bogotá, 17 de abril de 2012 Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones en Ciencias Veterinarias
2 Reseña 1925 Primer reporte de la enfermedad (May & Tittsler. Tracheolaryngitis in Poultry. J. Am. Vet. Assoc. 67: ). 1931 El comité de enfermedades de las aves de la AVMA adoptó la denominación de Laringotraqueítis Infecciosa (Infectious Laryngotracheitis) 1934 Primera inmunización contra LT(Brandly & Bushnell (A report of some investigations of Infectious Laryngotracheitis. Poult. Sci. 13: ). 1937 El agente etiológico de LT fue reconocido como un agente filtrable (virus) (Beudette. Infectious Laryngotracheitis. Poult. Sci. 16: ).
3 Infectious Laryngotracheitis Virus (ILTV)Infectious Laryngotracheitis Virus (ILTV). También Gallid Herpesvirus 1 (GaHV-1). α-Herpesvirus Rango de hospedador Pollos (Gallus gallus domesticus) y faisanes (Phasianidae) son los únicos hospedadores naturales reconocidos. ILTV replica en la parte alta del tracto respiratorio. Inmunología El título de anticuerpos neutralizantes no correlaciona bien con protección (Fahey et al, 1983) Respuesta mediada por células parece jugar el rol principal en la inmunidad (Fahey et al, 1984) Gransow et al, 2001
4 Laringotraqueítis Período de incubación Signos Clínicos LesionesInfección experimental (intratraqueal): 2 a 4 días Signos Clínicos Tos, estornudos, expectoración de mucus fibrina y sangre, y marcada disnea. Conjuntivitis. Lesiones Conjuntiva, laringe, y tráquea (ocasionalmente pulmones).
5 Entre Ríos, 2010
6 Lesiones: Diversos grados de conjuntivitis
7 Lesiones: Diversos grados de traqueítisImágenes provistas por Dr. G. Zavala
8 Epidemiología ILTV tiene distribución mundial.Mortalidad entre 0 y 70% (dependiendo de la virulencia de la cepa). Latencia Luego de la fase aguda Reactivación generalmente inaparente Aves muy jóvenes presentan menor susceptibilidad
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10 Latencia Replicación viral Diseminación viral Ganglio del trigéminoLuego de la fase aguda de la infección Stress Latencia Ganglio del trigémino Virus de campo y vacunas vivas atenuadas Replicación viral Tráquea Reactivación desde latencia es generalmente inaparente Diseminación viral
11 Diagnóstico de ILTV Signos clínicos y lesionesDetección de anticuerpos Pueden ser muy característicos Virus neutralización Aislamiento viral EP CEK Aves (mayores de 14 días) AGID Embrión de pollo ELISA Cultivo primario de células Histopatología Inmunofluorescencia Inmunohistoquímica PCR PCR en tiempo real
12 Muestras para el diagnóstico etiológicoAve con signos incipientes Mucosa de la conjuntiva. Hisopado Parpado incluyendo conjuntiva Tracto respiratorio alto. Tráquea Raspado de tráquea (con bisturí) Hisopado de tráquea
13 Hisopado de tráquea
14 Hospedador susceptibleControl de ILTV: Evitar que el virus contacte al hospedador susceptible Bioseguridad Bioseguridad Vacunación Fuente de infección Hospedador susceptible Transmisión Vacunación
15 Vacunas Vacunas vivas atenuadas:CEO: Embrión de pollo (Chicken Embryo Origin). TCO: Cultivo celular (Tissue Culture Origin). Vacunas vectorizadas en virus (recombinantes): FPV-LT: Expresa gB (UL-27) y MAP (UL-34) de ILTV. HVT-LT: Expresa gI (US-7) y gD (US-6) de ILTV.
16 Evaluación de la protección inducida (bajo condiciones experimentales) por vacunas recombinantes y atenuadas.
17 + Diseño general del estudio Se evaluó: Signos clínicosTratamientos Vacunación Desafío (cepa 63140) vía edad 35 DO 1 NVx-NCh - 2 CEO Gota en ojo 14 DO + 3 TCO 4 HVT-LTio in ovo 18 ED 5 HVT-LTsc subcutánea 1 DO 6 FPV-LTio 7 FPV-LTsc 8 NVx-Ch Se evaluó: Signos clínicos Carga viral en tráquea
18 Materiales and métodos
19 Materiales and métodos
20 Desafío a los 35 días de edadResultados
21 Desafío a los 35 días de edadResultados
22 Para el desafío a 35 días de edadSignos clínicos: NVx-NCh CEO TCO HVT-LT io HVT-LT sc < FPV-LT io FPV-LT sc NVh-Ch (P < 0.05) Carga viral: < < < FPV-LT sc FPV-LT io NVx-Ch NVx-NCh CEO HVT-LT io HVT-LT sc TCO
23 Conclusiones del experimentoVacunas atenuadas mayor protección ante el desafío Basado en los signos clínicos, la protección inducida por: HVT-LT fue similar a la conferida por las vacunas atenuadas. FPV-LT resultó menor que la conferida por las vacunas atenuadas. . La dificultad de las vacunas vectorizadas para generar el clearence de virus en la tráquea sugiere que cierta diseminación viral podría estar ocurriendo en los planteles vacunados con este tipo de vacuna.
24 Estudio preliminar de los mecanismos de la vacuna CEOPollos SPF vacunados (Vx) Pollos SPF Naïve (NVx) Vx-Ch Vx-NCh NVx-Ch NVx-NCh Muestras fueron tomadas a las 6 y 12 horas post-desafío (hpch)
25 Carga viral en tráquea a las 6 y 12 HsCarga viral en tráquea a las 6 y 12 Hs. post desafío con una cepa virulenta de ILTV de aves vacunadas (CEO) y no vacunadas.
26 ¿Por qué no es conveniente utilizar CEO?Virulencia residual Latencia Aves vacunadas pueden convertirse en fuente de virus para aves susceptibles Posibilidad de reversión Caracterización de muestras de campo (Oldomi et al, 2007; 2008). Mayoría (cerca del 70 %) de las muestras de campo presentaron patrón de RFLP idénticas o muy cercano a CEO.
27 Vacunas atenuadas Wild-type Vacuna Atenuación Virulencia VirulenciaPasajes en serie Cultivo celular / embrión Atenuación Atenuación Atenuación
28 Pasajes en serie Wild-type Vacuna Atenuación Reversión VirulenciaCultivo celular / embrión Wild-type Atenuación Vacuna Virulencia Virulencia Atenuación Atenuación Hospedador Reversión
29 Importancia de la dosis inicial en la infección con ILTVDiseño del ensayo Título (TCID50/ave) Número de aves (broilers) NCh 12 2 x 101 2 x 102 2 x 103 2 x 104
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31 Carga viral de las aves infectadas con baja dosis (10 TCID50/ave)
32 Caracterización de aislamientos de ILTV de Argentina (2006-2012).
33 Caracterización genotípica de aislamientos Argentinos de ILTV (2006-2012)
34 Se resolvió prohibir el uso de vacuna CEO en ArgentinaDatos de muestras procesadas en el laboratorio de Sanidad Aviar de INTA EEA Concepción del Uruguay (Entre Ríos) Se resolvió prohibir el uso de vacuna CEO en Argentina
35 Estos interrogantes abrirán nuevas líneas de investigaciónCierta replicación viral (en ausencia de manifestaciones clínicas severas), podría estar ocurriendo en el campo en aves vacunadas (TCO o vectorizadas). No se observan signos de enfermedad ¿Es posible que luego de sucesivos ciclos productivos con animales inmunizados con HVT-LT o con TCO, la carga viral ambiental se reduzca hasta desaparecer? ¿Qué tan factible sería dejar de vacunar planteles alojados en zonas donde hubo brotes de ILTV? ¿Cuántos ciclos productivos son necesarios para tomar la decisión de suspender la vacunación con cierto grado de seguridad? Una compañía dejó una granja sin vacunar ¿Qué variables deberían evaluarse antes de decidir la suspensión de la vacunación? ILTV! ¿Evaluación de anticuerpos séricos por ELISA? ¿Uso de aves centinela? Estos interrogantes abrirán nuevas líneas de investigación
36 Agradecimientos University of Georgia (PDRC) Dra. Maricarmen GarcíaDr. Guillermo Zavala Dr.Andrés Rodríguez Ávila Dr. Taylor Barbosa Ms. Sylva Riblet Dra. Alice Mundt INTA Instituto de Virología Dr. Ariel Pereda Dra. María Isabel Craig INTA EEA Concepción del Uruguay Dr. Federico Vera Lic. Florencia Rojas
37 Muchas gracias!