1 Integración de DNA en microorganismos: herramientas genéticas II

2 Uso de sistemas de recombinación sitio- específica Preparación de GMOs Integración en el cromosoma Expresión de genes tóxicos

3 Ab Liberación de GMOs: el problema de las resistencias

4 Ab Resolvasa Ab GMOs sin resistencias

5 Integrasa Ab Integrando en el cromosoma de un modo específico

6 ++ + + - Camino de ida pero no de vuelta

7 Invertasa Expresión de genes tóxicos: una solución...

8 Resolvasa Txt STOP...y otra

9 Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano Recombinación homóloga Recombinación sitio-específica Recombinación ilegítima –Transposición

10 Integración ilegitima: transposición Transposones: via intermediario de ADN –Secuencias de inserción Tipo I: IS50 Tipo II: IS3 –Transposones TipoI (IS tipoI, Tn5) TipoII (IS tipo II, Tn3) TipoIII (fago Mu) Retrotransposones: via intermediario de ARN

11 tnpAIR Clase I tnpAtnpRresIR Clase II Secuencias de inserción

12 tnpA OE IE IS50 5’CTGACTCTTATACACAAGT3’ DnaA 5’CTGTCTCTTGATCAGATCT3’ Tnp Inh

13 5’ 3’ 5’ 3’ H-O-H 5’ 3’ 5’ 3’ O H 5’ 3’ 5’ 3’ IS50: cortar y pegar

14 H-O-H 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ O H 5’ 3’ O H IS50: cortar y pegar

15 Dimerización Papel de Inh Acción en cis Acoplamiento con replicación IS50: mucho es malo

16 DNA bindingdimerization 476 aa Papel de la dimerización

17 476 aa dimerization 421 aa Inh y la dimerización

18 Acción en cis tnpAIR en cis tnpAIR en trans tnpAIR tnpAIR

19 Acoplamiento con replicación

20 tnpA OE IE OE tiene un sitio dnaA (OE y OI son suboptimos) 5’CTGACTCTTATACACAAGT3’ DnaA P2 se activa por metilación dam GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG

21 Tn5 OE IE OE IE IS50L IS50R kan bleostr Mutación stop Sitios dnaA