1 Interferencias en el análisis de orina con tiras multirreactivas Sociedad española de Bioquimica Clínica y Patologia Molecular Química clínica 2000;19 (1) Ana Santo Quiles
2 URIANÁLISIS ANORMALES Y SEDIMENTO ¿Cuando realizar urianálisis? - En pacientes con evidencia o sospecha de transtornos renales, urinarios, hepáticos y metábólicos - Por protocolos de hipertensión, DM… - Sospecha de infección de orina
3 CARACTERISTICAS MUESTRA DE ORINA - Composición sometida a múltiples variaciones (ppal vehículo de excreción) - Eliminación productos del metabolismo y sustancias extrañas (fcos y sus metabolitos) - Gran influencia de condiciones preanalíticas - Recogida (1ª hora, >4horas en vejiga) - Almacenamiento (
4 CARACTERISTICAS MUESTRA DE ORINA - Composición sometida a múltiples variaciones (ppal vehículo de excreción) - Eliminación productos del metabolismo y sustancias extrañas (fcos y sus metabolitos) - Gran influencia de condiciones preanalíticas - Recogida (>4horas en vejiga) - Almacenamiento (
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6 LA ORINA EN EL LABORATORIO DE RUTINA ORINA RECIENTE Cobas u 601UF-1000MICROSCOPIO ALARMA
7 TIRA MULTIREACTIVA PH LEUCOCITOS NITRITO PROTEINAS GLUCOSA CUERPOS CETONICOS UROBILINOGENO BILIRRUBINA SANGRE AREA DE COMPENSACION Cuadrados de material poroso con reactivos desecados para la determinación cualitativa o semicuantitativa
8 ESPECTROFOTOMETRIA DE REFLECTANCIA Se usa para medir la intensidad de un espectro determinado en comparación con la intensidad de la luz procedente de una fuente patrón. Un LED proyecta luz a una longitud de onda definida, desde el ángulo pertinente, sobre la superficie de una almohadilla. La luz se proyecta en la almohadilla y se refleja con una intensidad que depende del color de dicha almohadilla. Un detector de fotodiodos recoge la luz reflejada y transmite una señal eléctrica que se transformara en valores relativos usando una escala estándar de calib. LED(diodos emisores de luz): 470, 555,620 nm
9 AREA DE COMPENSACION Almohadilla blanca, sin reactivos, de las tiras reactivas usada para determinar el color de la orina y así intentar evitar falsos positivos a causa de que la muestra de orina tenga un color muy fuerte. Permite la compensación instrumental para el color intrínseco de la orina durante el análisis. Una interferencia importante será la sustancias que den color a la orina o que adquieran color al entrar en contacto con las zonas reactivas y enmascaren la coloración de la propia reacción
10 pH Rango (4,5-9) Reacción ( dos indicadores) Directa con los iones H + rojo de metilo (de rojo a amarillo en rango de 4-6) azul de bromotimol (de amarillo a azul de rango 6-9) Significación clínica Interferencias Orina acida: Acidosis metabolica Diarrea cronica Insuficiencia respiratoria Dieta proteinas Orina alcalina: Acidosis tubular renal Alcalosis respir. ITU Dieta vegetal y citricos Proliferación Bacteriana (urea amoníaco) Excesivamente mojada sol. Amortiguadora acida de zona prot
11 DENSIDAD RELATIVA Depende de la masa de solutos por unidad de volumen VN: 1.003-1.035 El riñón varía el vol de orina y su [solutos] para mantener homeostasis de los líquidos corporales y electrolítos Reacción: Liberación de protones por un polielectrolito, en presencia de cationes, vira el color del indicador (azul de bromotimol) Interferencias Positivas ↑ []cationes como Ca ↑ [] proteinas Negativas Orinas alcalinas
12 PROTEINA Rango ( NEG- 25-75-150-500 mg/dl) Sensibilidad 12 mg/dl Composición: Fisiológica excreción
13 INTERFERENCIAS NEGATIVAS POSITIVAS Orinas muy diluidas Farmacos Bacterias Desinfectantes con amonio cuaternario Orinas coloreadas ( hematuria, bilirrubina...) ORINA ALCALINA Capaces de desequilibrar la acción de la solución amortiguadora que impregna la tira. Con las tiras actuales, un pH elevado (hasta 9) no afecta al test
14 LEUCOCITOS Rango ( NEG-25-100-500 /µl) Sensibilidad 20 leucocitos / µl Significacion clínica ( fisiológico 0-3/campo, 10µL ) Actividad enzimática de Esterasa de granulocitos Reacción Reacción Interferencias Infeccion Inflamación.
15 Ester de ácido indoxilocarbónico Indoxilo Hidrólisis por la Esterasa leucocitaria Sal de diazonio Compuesto púrpura REACCIÓN LEUCOCITARIA
16 INTERFERENCIAS Ascorbato Proteínas Glucosa Densidad Antibióticos Oxalato Formaldehído Agentes oxidantes Orinas coloreadas (bilirrubina,hematuria...) NEGATIVAS reac. cromatica POSITIVAS reac. cromatica Malla impregnada con yodato que oxida al Ác.ascórbico y elimina la interferencia
17 NITRITO Sensibilidad 0,07 mg/dl Significación clínica (gram- reducen nitrato a nitrito: E.coli, Kleb, Enterobacter, Citrobacter, Proteus ) Consideraciones Reacción de Griess Interferencias Infección bacteriana Dieta rica en hortalizas y legumbres (nitratos) Excluir antibióticos Orina primera hora (>4h en vejiga) No vale para gram+, enterococos, levaduras..
18 nitrato nitrito Amina aromática sal de diazonio (Sulfanilamida) quinolina Rosa rojizo BACTERIAS REACCIÓN DE GRIESS
19 INTERFERNECIAS Ascorbato Urobilinógeno pH bajo Micciones frecuentes Reposo Medicamento (color orina rojo) NEGATIVAS POSITIVAS
20 GLUCOSA Glu filtrada es reabsorbida en túbulo proximal hasta un máximo. Rango ( NORM- 50-100-300-1000 mg/dl) Sensibilidad 40 mg/dl Significación clínica Reacción enzimática especifica Interferencias Diabetes Mellitus Alteraciones endocrinas Enfermedad pancreática Fármacos Alteraciones metabólicas
21 REACCION Glucosa Gluconato O2 aire H2O2 + Cromóforo incoloro Glucosa oxidasa Glucosa peroxidasa Compuesto coloreado No detecta lactosa, galactosa ni fructosa 2 etapas
22 INTERFERENCIAS Ascorbato Cetonas Salicilatos y derivados Acido nalidixico Densidad elevada Cefalosporinas Bacterias ( metabolizan la glu) Temperatura ( orinas refrigeradas pueden inhibir la reacción ya q es una reacción enzimática) Oxidantes potentes NEGATIVAS POSITIVAS El uso de tetrametilbenzidina como cromóforo ha solucionado la mayoría de estas interferencias
23 CUERPOS CETÓNICOS Rango ( NEG-5-15-50-150 mg/dl) Sensibilidad 5 mg/dl Significación clínica: metab ác. grasos Reacción de Legal Causa Metabólica, DM Factores dietéticos, inanición, malabsorción Aumento de requerimientos Vómitos, diarreas pulmones Ac Acetoacético (grupo metilcetona) Nitroprusiato Na Ph >7 Compuesto colorado
24 INTERFERENCIAS Acetilsalicílico (oxida al ac.acetoacético) Bacterias (metabolizan el ac.acetoacético) Humedad (nitroprusiato pierde actividad) Ftaleinas ( uso en pruebas funcionales hepáticas y renales) Fcos con grupos sulfhídricos ( IECA, levodopa, acetlcisteína) Orinas coloreadas NEGATIVAS POSITIVAS ACETOACETATO
25 BILIRRUBINA Producto metab grupo hemo (no conjugada unida a alb, en hígado es conjugada con ác. glucurónico y excretada con la bilis al intestino) Rango ( NEG- 1-3-6 mg/dl) Sensibilidad 0.6 mg/ dl Significación clínica Reacción Interferencias Ictericia obstructiva Cirrosis Hepatitis Sind. Rotor y Dubin Johnson.
26 DIAZOREACCIÓN Sal de diazonio + medio ácido Compuesto azoico UROBILINOGENO Compuesto azoico rosa-violeta BILIRRUBINA
27 INTERFERENCIAS Ascorbato Nitritos Fcos Tiempo y temperatura (inestable y sensible a la luz) Fcos q colorean orina NEGATIVAS POSITIVAS
28 UROBILINOGENO Rango (NORM-1-4-8-12 mg/ dl) Sensibilidad 1.4 mg/dl Significación clínica Reacción mejor que R. Erlich Reacción Interferencias Anemias hemolíticas Insuficiencia hepática Extravasación sanguínea.
29 DIAZORREACCIÓN Sal de diazonio + ph< 7 Compuesto azoico rojo UROBILINOGENO
30 INTERFERENCIAS Nitritos Tiempo (fotooxidación) Fcos q colorean orina NEGATIVAS POSITIVAS
31 SANGRE Rango (NEG -10-25-50-100-150-250 /µl) Sensibilidad 7 eritrocitos/µl. (Detecta eritrocitos intactos, lisados, hemoglobina, mioglobina y cilindros hemáticos) Significación clínica Reacción Interferencias Enfermedades glomerulares Litiasis Neoplasias Infecciones (cistitis...) Fármacos (anticoagulantes) Traumatismo.
32 REACCIÓN Actividad Peroxidasa grupo Hemo Peróxido de hidrógeno Oxigeno (presente en la zona reactiva) Cromóforo Cromóforo reducido oxidado (coloración azulverdosa)
33 INTERFERENCIAS Ascorbato (propiedades reductoras) Nitritos Proteínas Aceptores no específicos del oxigeno (ácido úrico...) Presencia de oxidantes Peroxidasas microbianas NEGATIVAS POSITIVAS
34 UF-100 CITOMETRIA DE FLUJO Citómetro de flujo con enfoque hidrodinámico que a través de 2 canales, uno para bacterias y otro para el resto de células, y previa tinción fluorescente, cuenta las partículas de la muestra integrando 3 señales de medición: tamaño, estructura y fluorescencia Analizan células en suspensión que interfieren de forma individual con una fuente de luz provocando la emisión de señales luminosas que permite diferenciar poblaciones celulares dentro de la muestra analizada. Dos tinciones con colorantes fluorescentes Canal exclusivo de bacterias
35 Eritrocitos (0-4269/µl) Leucocitos (0-3724 /µl) Células escamosas (0-147 /µl) Cilindros (0-50 /µl) Bacterias (199-12762 /µl) Levaduras Cilindros patológicos Células redondas pequeñas Cristales Espermatozoides PARAMETROS ANALISISALARMA
36 COMPARACIÓN CON EL MICROSCOPIO UFCMICROSCOPIOOBSERVACION Cast positivoNo se observan cilindrosLa centrifugación los rompe. Mucus Si no hay proteínas, clasif errónea LevadurasEritrocitosClasificación errónea WBCLeucocitos y trichomonasNo detecta trichomonas Cristales negativosCristales Alta concentración de hematíes Abundantes bacterias o cristales de oxalato cálcico Clasificación errónea Los WBC,cuerpos grasos o cristales de fosfato pueden ser erróneamente clasificados como SRC. (Alarma SRC Microscopio)
37 muchas gracias por vuestra atención!!
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39 pH VN: 4,5-8 Valorar con el resto de parámetros
40 pH pH: Refleja la capacidad renal para mantener una concentración adecuada de hidrogeniones En los adultos sanos varía entre 4.5 y 8. – ↓: Tras ayuno nocturno Acidosis Dieta proteica Deshidratación Diarrea Bacterias productoras de ácido – ↑: Tras comidas Alcalosis Dieta vegetariana Vómitos Bacterias que degradan urea (p.e. Proteus )
41 PROTEÍNAS – Los individuos sanos excretan aproximadamente 100 mg/dia de proteínas. – El glomérulo normal solamente es permeable a proteínas con peso molecular
42 GLUCOSA – Hiperglucemia. – Umbral 180 mg/dL – Existe en: DM, glucosuria renal, intolerancia a la glucosa, hipertiroidismo, hiperpitituarismo, sdme Cushing....
43 CUERPOS CETÓNICOS – DM – Precozmente en niños en ayunas – Adultos con inanición – Ayuno prolongado (dietas extremas, anorexia nerviosa). - Si vómitos y diarrea. - Fiebre
44 LEUCOCITOS (PIURIA) Recomendable el cultivo microbiológico Si negativo: inflamación no infecciosa Si positivo infección aguda. – Sugestivo de infección los acúmulos leucocitarios. – En mujeres pueden aparecer por contaminación vaginal
45 NITRITOS Presencia de bacterias que reducen nitratos a nitritos. Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Staphylococcus, Pseudomonas… Bacterias que no dan positiva la reacción: (cocos gram positivos) Enterococci, Streptococci, o Staphylococci Puede haber infección y ser los leucos positivos y los nitritos negativos.
46 UROBILINOGENO- BILIRRUBINA Urobilinogeno: Aumenta cuando existe un recambio excesivo de bilirrubina en los procesos hemolíticos y en una eritropoyésis ineficaz. Ausente en la obstrucción biliar completa. Bilirrubina: Aumenta en enfermedades caracterizadas por un excesivo recambio de Hb debido a una disminución de la vida media de los hematíes. Bb positiva y Ubg ausente característico de ictericia obstructiva.
47 SANGRE Causas urológicas: traumatismos, litiasis, neoplasias, hiperplasia benigna de próstata, angiomas... Enfermedades generalizadas con predisposición a hemorragias: púrpuras, leucemias... Causas nefrológicas: glomerulonefritis, riñón poliquístico, vasculítis, infecciones...
48 ANALISIS DEL SEDIMENTO URINARIO Microscopía óptica Centrifugación 1500-2000 rpm de un volumen de orina de aproximadamente 10 mL de orina durante 5 min. Decantación del sobrenadante y agitación del sedimento. Gota entre porta y cubre. De menos a más aumentos.
49 Bacterias: Con forma de cocos o de bacilos. Trichomonas vaginalis: Movilidad. Estructuras redondeadas u ovaladas con flagelos. Hongos y esporas: Son incoloras de forma ovalada, algo más pequeños que los eritrocitos. Espermatozoides
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