1 INTERFERÓN B LINNET JOSELIN LÓPEZ ROMERO AMAURY LÓPEZ RUÍZDIANA LAURA RODRÍGUEZ SANDOVAL RUTH ABRIL VELA SÁNCHEZ
2 ¿QUÉ ES UN INTERFERÓN? LOS INTERFERONES (IFN) SON UNA FAMILIA DE PROTEÍNAS ESPECÍFICAS DE ESPECIE SINTETIZADAS POR CÉLULAS EUCARIOTAS EN RESPUESTA A VIRUS Y OTROS ESTÍMULOS ANTIGÉNICOS Originalmente, identificadas como una sustancia capaz de inhibir la replicación de un amplio espectro de virus glicoproteínas que pertenecen a la gran clase de proteínas conocidas como citocinas Se unen a receptores en la superficie de las células infectadas, activando diferentes vías de señalización en las que participan diversas proteínas antivirales para impedir la replicación de una amplia variedad de virus de ARN y ADN.
3 ES UN INTERFERÓN DE TIPO I PRODUCIDO POR FIBROBLASTOSINTERFERÓN B 1a Actividad antiviral, antiprofiferativa e inmunoreguladora 1b Modificador de la respuesta biológica
4 PRODUCCIÓN DE INTERFERÓN BEL Interferón beta es un preparado producido mediante tecnología de ADN recombinante. Se trata de una glicoproteína de 166 aminoácidos que se produce en células de mamífero (células ováricas de hámster chino) en las cuales se ha introducido el gen del interferón beta humanos. Hay tres productos autorizados con IFN b como principio activo: betaferón®, a base de ifnb-1b, y avonex® y rebif®
5 FORMA FARMACÉUTICA La diferencia estriba en que en la producción de IFNb-1b se emplean bacterias como célula hospedadora y el IFNb-1a se produce en células de mamífero, concretamente en células de ovario de hámster chino Rebif Betaferón Avonex
6 Diferencias - IFNb-1b carece de azúcares en su estructura-IFNb-1b carece de la metionina N- terminal del IFN -IFNb-1a es una glicoproteína idéntica a la producida por cultivos de fibroblastos humanos DIFERENCIAS
7 Unión a receptores de membrana específicos (receptor para IFN tipo i)MECANISMO DE ACCIÓN Unión a receptores de membrana específicos (receptor para IFN tipo i) Activan factores de transcripción y la expresión de distintas proteínas Modulan la activación de células inmunitarias, disminuyendo la actividad de las células efectoras y aumentando la actividad de las células t supresoras. El efecto sobre la respuesta inmune puede estar mediado por sus acciones sobre células presentadoras de antígeno y células t supresoras.
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10 SÍNTESIS DE INTERFERÓN BE.coli k12 Células transformadas con el plásmido pl474 vector derivado de puc19 promotor pl de fago lambda gen ifnalfa2b ampicilina
11 Selección de la cepa hospedera Inoculo en tubo de 5mL de medio LB con ampicilina 50μg/mL. 12 h, 30°C, 250 rpm Cultivo en zaranda se realizo en erlenmeyer (1/5 volumen) agitación a 240 rpm Selección de la cepa hospedera Medio mínimo M9 (hidrolizado de caseina al 2%) .4% de glucosa 100μg/mL de ampicilina
12 Sumergiendo los matraces en un baño termostato 6 h a 42°CDO = 0.6 inducción se realizo por cambio de temperatura de 30° a 42° C por conducción Sumergiendo los matraces en un baño termostato 6 h a 42°C Matriz Experimental Determinar las variables significativas del proceso de fermentación 2^3 x1= DO de inducción del cultivo X2= fuente de carbono x3= Ausencia o presencia de Levadura Fermentadores 7.5 51 volumen efectivo 1 vvm aireación, 500 rpm, inducción por cambio de temperatura de 30 a 42° C, DO inicial 0.1 (530 nm)
13 50 l DO= 2 200 l Fermentadores de 75 l Agitación 150 rpm0.4 vvm de aeración pH (NaOH Y H3PO4 al 40%) 50 l 6 horas luego de la inducción por cambio de temperatura de 32 a 42 °C DO= 2 200 rpm de agitación Condiciones de fermentación e inducción iguales. 200 l
14 IFN presente fue extraído en 1% por SDS a 90°C durante 2 minutosSuspensión de biomasa 5 veces Resuspendio en solución TRIS-HCl 50mM ,pH 8, NaCl 30mM Ruptura celular (Ultrasonido) Concentración celular 200g/l 2 ciclos de ruptura x 2 min Cuantificación método ELISA la actividad biológica del IFN fue determinada a través de la técnica de inhibición del efecto citopatogénico del virus mengo en células hep-2 de tumor laríngeo humano, comparándose con el estándar internacional del ifn-alfa.
15 VÍA DE ADMINISTRACIÓN Principio activo Nombre comercialLaboratorio titular Año de aprobación (FDA) Vía de administración Frecuencia de administración Interferón beta-1a Avonex ® Biogen Idec Limited 1997 Intramuscular Una vez a la semana Rebif® Merck Serono Europe Ltd 1998 Subcutáneo 3 veces a la semana Interferón beta-1b Betaseron® Bayer Pharma Ag 1995 Cada dos días Extavia® Novartis Europharm Ltd 2008 Interferón beta-1ª pegilado Plegridy® 2014 Cada 2 semanas
16 FARMACOCINÉTICA Y FARMACODINAMIAEl IFN-b actúa a través de distintas proteínas, como enzimas o citoquinas IFNb-1a, neopterina y b2 -globulina alcanzaron sus niveles máximos 48 horas . La concentración plasmática máxima se alcanzaba al cabo de unas 8 horas, y a las 24 horas de la inyección La biodisponibilidad calculada es aproximadamente del 40%. administración intravenosa única, la distribución del IFNb-1a sigue una cinética triexponencial (t1/2 de 3, 42 minutos y 22 horas).
17 PRODUCCIÓN DEL INTERFERÓN BTEA-1BProducción en fibroblastos (NB1-RGB) CULTIVADAS EN FIBRAS DE SEDA la unión y comunicación celular favorecían la producción
18 Preparación de membranas Langmiur-Blodgedpreparar membranas Laminina, fibrofectina y vitronectina; mezclado de proteìnas Preparación de membranas Langmiur-Blodged Adición de colágeno/ 37 grados Líneas celulares Mantenido con MEM y sulfato de estriptomicina y 10% de suero fetal bovino
19 Concentración del interferónCrecimiento celular y producción células inoculadas e incubadas Concentración del interferón Medida por prueba ELISA. IU ml-1
20 PURIFICACIÓN Las células bacterianas se rompen inmediatamente después de la fermentación con un proceso combinado enzimático-mecánico extracción con 2-butanol. El interferón-b hidrófobo se mueve hacia arriba en la fase orgánica superior a fase acuosa inferior contiene las sustancias hidrófilas de las células tales como sales y ADN / ARN realización de cromatografía de afinidad y cromatografía líquida de alta eficacia de fase inversa (RP-HPLC)
21 Lavado con una solución tampón de equilibrado de propileno glicollavado de la columna con una segunda solución tampón de lavado C de pH 6,5-7,5 que contiene NaCl 1-2 M con una tercera solución tampón de lavado B de pH 6,5-7,5 que contiene 10-30% de propileno glicol y NaCl 1-2 M elución de una fracción que contiene interferón beta humano con una solución tampón de pH 6,5-7,5 que contiene 40-60% de propileno glicol y NaCl 1-2 M. 2.
22 USOS La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad crónica del sistema nervioso central (SNC) que se caracteriza por la existencia de inflamación, desmielinización, La enfermedad tiene un alto impacto personal, social y sanitario por su frecuencia, su tendencia a producir discapacidad en el adulto joven Los interferones beta han demostrado superioridad frente a otros medicamentos que retrasan el siguiente episodio desmielinizante.
23 CONCLUSIÓN El IFNb ha demostrado su eficacia en el tratamiento de la EM, en la reducción del número de recidivas, así como la gravedad de las mismas, y es capaz de retrasar la aparición de la enfermedad en tratamiento precoz. también A pesar de las diferencias farmacocinéticas entre la administración IM o SC, las diferencias farmacodinámicas entre ambas vías son muy pequeñas. a las dosis y frecuencias de administración autorizadas, las tres especialidades autorizadas para el tratamiento de la EM con IFN b como principio activo tienen una eficacia muy similar,
24 REFERENCIAS HTTPS://WWW.SEFH.ES/FH/2002/N5/6.PDF INTERFERÓN BETA (IFNB) COMO TRATAMIENTO DE LA ESCLEROSIS MÚLTIPLE F. ZARAGOZÁ GARCÍA, M. IBARRA LORENTE VOL. 26. N.° 5, PP , 2002 VOCES DE LA EM. (2017). TRATAMIENTOS MÉDICOS. 20 JUNIO 2017, DE ESCLEROSIS MÚLTIPLE ESPAÑA SITIO WEB: SOCIEDAD NACIONAL DE ESCLEROSIS MÚLTIPLE. (2016). LOS MEDICAMENTOS MODIFICADORES DE LA ESCLEROSIS MÚLTIPLE. 20 JUNIO 2017, DE SOCIEDAD NACIONAL DE ESCLEROSIS MÚLTIPLE SITIO WEB: HTTPS://WWW.NATIONALMSSOCIETY.ORG/NATIONALMSSOCIETY/MEDIA/MSNATIONALFILES/BROCHURES/BROCHUR E-LOS-MEDICAMENTOS-MODIFICADORES-DE-LA-ESCLEROSIS-MULTIPLE.PDF
25 ISAACS, A. , LINDENMANN, J. (1957). VIRUS INTERFERENCE. IISAACS, A., LINDENMANN, J. (1957). VIRUS INTERFERENCE. I. THE INTERFERON. PROCEEDINGS OF THE ROYAL SOCIETY OF LONDON SERIES B, CONTAINING PAPERS OF A BIOLOGICAL CHARACTER ROYAL SOCIETY, 147(927), 258–267. GRESSER, I. (2007). INTERFERON: AN UNFOLDING TALE. JOURNAL OF INTERFERON & CYTOKINE RESEARCH: THE OFFICIAL JOURNAL OF THE INTERNATIONAL SOCIETY FOR INTERFERON AND CYTOKINE RESEARCH, 27(6), 447–452. D. VELAZQUEZ-VILLORIAA,∗, C. MACIA-BADIAA, A. SEGURA-GARCÍAA, S. PASTOR IDOATE A, G. ARCOS-ALGABAA, L. VELEZ- ESCOLAA, J. GARCÍA-ARUMÍ A,. (29 NOVEMBER 2016). EFFICACY OF IMMUNOMODULATORY THERAPY WITH INTERFERON- OR GLATIRAMER ACETATE ON MULTIPLE SCLEROSIS-ASSOCIATED UVEITIS. 14 SEPTEMBER 2016, DE Y ELSEVIER ESPANA, ˜ S.L.U SITIO WEB: FILE:///C:/USERS/DAVID/DOWNLOADS/INTERFERON-DOS.PDF PRISMS STUDY GROUP AND THE UNIVERSITY OF BRITISH COLUMBIA MS/MRI ANALYSIS GROUP. PRISMS-4: LONG- TERM EFFICACY OF INTERFERON-BETA-1A IN RELAPSING MS. NEUROLOGY. 2001;56:1628–36 JACOBS LD, BECK RW, SIMON JH, KINKEL RP, BROWNSCHEIDLE CM, MURRAY TJ, ET AL. INTRAMUSCULAR INTERFERON BETA-1A THERAPY INITIATED DURING A FIRST DEMYELINATING EVENT IN MULTIPLE SCLEROSIS. CHAMPS STUDY GROUP. N ENGL J MED. 2000;343:898–904.