1 La replicación del DNA y el ciclo celular

2 Otra pregunta con respuesta abierta: ¿Cómo se regula la actividad de los orígenes de replicación de modo de obtener una sóla replicación por ciclo celular? “Once, and only once”

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6 Experimentos de fusión celular

7 Entender la naturaleza del estado competente (G1) Cual es la naturaleza del activador de S Caracterizar el estado de incompetencia (G2) Caracterizar el desbloqueo y regreso a la competencia

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9 Sperm DNA Extractos Xenopus (+) o (-) cicloheximida Incubación 5 horas Observación microscopio +CH -CH Hoechts contraste

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11 Sperm DNA + ATP  P32 + BrdU + extracto Xenopus (+) o (-) cicloheximida Incubación 5 horas Extracción DNA Gradiente CsCl Análisis 32P en fracciones

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14 Sperm DNA + ATP  P32 + BrdUTP + extracto Xenopus (+) CH (-)CH Núcleos replicaban Núcleos replicaban Separación de núcleos a distintos tiempos post-extracto (1, 2, 3, 4, 5 h) Núcleos + ATP-3H + BrdU + extracto Xenopus fresco (+)CH (-)CH (+)CH (-)CH Incubación durante 4 horas Miden si hay segunda ronda de replicación por extracción del DNA, gradiente de CsCl y análisis de 3H

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19 Teoría del licenciamiento de la replicación

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44 Letters to Nature Nature 430, 913-917 (19 August 2004) | doi: 10.1038/nature02813 Structural basis for inhibition of the replication licensing factor Cdt1 by geminin Changwook Lee 1, BumSoo Hong 1,5, Jung Min Choi 1,5, Yugene Kim 1, Saori Watanabe 2, Yukio Ishimi 3, Takemi Enomoto 2, Shusuke Tada 2, Youngchang Kim 4 and Yunje Cho 1 1 5 15 1 2 3 2 4 1

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