1 Laboratorio de Microbiología Aplicada Dra. Esther Z. Vega BermúdezSalmonella Laboratorio de Microbiología Aplicada Dra. Esther Z. Vega Bermúdez
2 Salmonella sp.
3 Salmonella Salmonella enterica Salmonella bongori Subs. enterica Subs.salamae Subs. arizonae Subs. diarizonae Subs. indica Subs. houtenae From: Porwollik, S., et al., Characterization of Salmonella enterica subspecies I genovars by Use Of Microarrays. J. of Bacteriol. 186:
4 Incidencia de Salmonella
5 Características Enterobacterias Bacilos Gram (-) Mótiles conflagelación perítrica No esporulan No fermentan lactosa 2, 300 especies Crece entre oC
6 Variantes Genéticas Mediada por PlasmidiosUtilización de lactosa y sucrosa Microorganismos atípicos pueden “escapar”a la detección en situaciones clínicas Las especies de Salmonella no son un grupo homogéneo de organismos
7 Reservorios / Alimentos RelacionadosCarnes crudas Aves Huevos Leche y productos lácteos Pescado Camarones Salsas Mezclas para bizcocho Postres de crema otros
8 Patogénesis Dosis infecciosa tan bajo como células (depediendo de hospedero) Antígenos estructurales (pared celular o antígeno O, H- flagelar y el IV-antígeno capsular termolábil -poder frente a los ácidos) Sustancias tóxicas Endotoxinas Exotoxinas (efecto irritante y citotóxico para el tracto intestinal) Ruta oral-fecal
9 Sintomatología y EnfermedadesSepticemias Bacteremias Cistitis, endocarditis y osteomilitis Síndrome de Reiters que puede terminar en artritis crónica Fiebre tifoidea ó paratifoidea Período de incubación de 6-48hrs Diarreas Dolor abdominal Fiebre entre 8-72hrs Dolor de cabeza y en el cuerpo Escalofríos Naúseas Vómitos
10 Diagnóstico y TratamientoPruebas de serología y de heces fecales Aislar el paciente Tratamiento para todos en el hogar Antibíoticos
11 Muestreo en Alimentos Métodos convencionales de aislación que requieren de cinco días para confirmar resultados. Cultivo C o en nevera.
12 Salmonella
13 Metodología Pre-Enriquecimiento Dilución 1:10 24 horas a 35 oCCaldo de lactosa Permite la recuperación de células “heridas” Aumenta la razón Salmonella:Non-Salmonella Agua de dilución peptonada Productos Animales Dilución 1:10 I.e g muesra a 225 ml de caldo 24 horas a 35 oC Salmonella does NOT ferment lactose, but other flora do. The produce acid to inhibit themselves while Salmonella repairs and others die from low pH. More or less broth/sample can be used.
14 Enriquecimiento Selectivo1 ml de caldo de Lactosa 10 ml Selenite Cystine 10 ml tetrathionate broth Permite el crecimiento de Salmonella No hay resultados despúes de este paso 24 horas a 35oC
15 Placas Selectivas Tres tipos de medio selectivoBismuth Sulfite Marrón, gris, negro con “metallic sheen” Hektoen Enteric Agar Azul-verdoso con o sin centro negro o “glossy black” Xylose Lysine Desoxycholate Rosado con o sin centro negro Estriado de “Selective Enrichments” Incubación de h a 35oC Resultados – PRESUMPTIVE POSITIVE
16 Medio Diferencial – Discernimiento bioquímicoTriple Sugar Iron Agar Streak Slant and Stab Butt 1% Lactosa 0.1% Glucosa Sulfato Ferroso Indicador de H2S Tiosulfato Producción de H2S Rojo fenol Alkalina – Rojo, Acido – Amarillo Incubación a 35 oC por 24 horas If lactose utilized then a lot of acid produced and all yellow.
17 Triple Sugar Iron Agar Reacción de Salmonella Red Slant (Alkalino)Acid Butt (Amarillo) Precipitado Negro
18 Lysine Iron Agar- Discernimiento bioquímicoStab Butt and Streak Slant Se quiere condiciones anaeróbicas en el fondo para que ocurra la decarboxilación Decarboxilación a partir de L-Lysina Sulfato Ferroso Bromo Cresol Purple Violeta – Alkalino, Amarillo - Acido Glucosa Tiosulfato
19 Lysine Iron Agar Reacción de SalmonellaAlkaline Butt – Purple Precipitado Negro Sólo es negativo si hay condiciones ácidicas, pueden obtenerse otras reacciones no típicas
20 Confirmación BioquímicaAglutinación de antígenos superficiales con anticuerpos específicos para Salmonella Antígenos de Salmonella O – Somático – Lipopolisacárido H – Flagellar – Proteína K – Capsular - Polisacáridos
21 Aglutinación Mezcle anticuerpos con un poco de cultivoAglutinación es un resultado positivo
22 Aislamiento vs. EnumeraciónUsualmente sólo se aisla Se enumera para propósitos de investigación Método MPN Método de filtración por membranas No “Accurate”
23 Otros métodos- kits bioquímicosTable 1. Partial list of miniaturized biochemical kits and automated systems for identifying foodborne bacteria* ( 5, 8, 15, 16, 21, 35, 36 ). System Format Manufacturer Organisms APIb biochemical bioMerieux Enterobacteriaceae, Listeria, Staphylococcus, Campylobacter, Non-fermenters, anaerobes Cobas IDA Hoffmann LaRoche Enterobacteriaceae Micro-IDb REMEL Enterobacteriaceae, Listeria EnterotubeII Roche Spectrum 10 Austin Biological RapID Innovative Diag. BBL Crystal Becton Dickinson Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Non-fermenters, anaerobes Minitek Microbact Microgen Enterobacteriaceae, Gram negatives, Non-fermenters, Listeria Vitekb biochemicala Enterobacteriaceae, Gram negatives, Gram positives Microlog C oxidationa Biolog MISb Fatty acida Microbial-ID Enterobacteriaceae, Listeria, Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter Walk/Away MicroScan Replianalyzer Oxoid Riboprinter nucleic acida Qualicon Salmonella, Staphylococcus, Listeria, Escherichia coli Cobas Micro-ID Enterobacteriaceae, Gram negatives, Non-fermenters Malthusb conductancea Malthus Salmonella, Listeria, Campylobacter, E. coli, Pseudomonas, coliforms Bactometer impedancea Salmonella * Table modified from: Feng, P., App.I., FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed. a Automated systems b Selected systems adopted AOAC Official First or Final Action. NOTE: This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this list does not indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
24 Identificación basada DNA-DNATable 2. Partial list of commercially-available, nucleic acid-based assays used in the detection of foodborne bacterial pathogens* (2, 5, 8, 12, 14, 22, 25, 36, 37). Organism Trade Name Format Manufacturer Salmonella GENE-TRAKc probe GENE-TRAK BAX PCR Qualicon BINDb phage BioControl Probelia * Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed. a Polymerase chain reaction b Bacterial Ice Nucleation Diagnostics c Adopted AOAC Official First or Final Action NOTE: This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this list does not indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
25 Identificación basada en detección de antígenosTable 3. Partial list of commercially-available, antibody-based assays for the detection of foodborne pathogens and toxins* (3, 5, 8, 12, 33, 36). Organism/toxin Trade Name Assay Formata Manufacturer Salmonella Bactigen LA Wampole Labs Spectate Rhone-Poulenc Microscreen Mercia Wellcolex Laboratoire Wellcome Serobact REMEL RAPIDTEST Unipath Dynabeads Ab-beads Dynal Screen VICAM CHECKPOINT Ab-blot KPL 1-2 Teste diffusion BioControl SalmonellaTEKe ELISA Organon Teknika TECRAe TECRA EQUATE Binax BacTrace LOCATE Assurancee GEM Biomedical Transia Bioline VIDASe ELFAb bioMerieux OPUS ELISAb PATH-STIK Ab-ppt LUMAC Reveal Neogen Clearview UNIQUEe Capture-EIA * Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed. a Abbreviations: ELISA, enzyme linked immunosorbent assay; ELFA, enzyme linked fluorescent assay; RPLA, reverse passive latex agglutination; LA, latex agglutination; Ab-ppt, immunoprecipitation. b Automated ELISA c EHEC - Enterohemorrhagic E. coli; ETEC - enterotoxigenic E. coli d Also detects E. coli LT enterotoxin e Adopted AOAC Official First or Final Action ** CAUTION: unless the assays claim that they are specific for the O157:H7 serotype, most of these tests detect only the O157 antigen; hence will also react with O157 strains that are not of H7 serotype. These O157, non-H7 strains, generally do not produce Shiga toxins and are regarded as not pathogenic for humans. Furthermore, some antibodies to O157 can also cross react with Citrobacter, E. hermanii and other enteric organisms. NOTE: This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this list does not indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
26 Identificación basada en la utilización de sustratosTable 4. Partial list of other commercially available rapid methods and specialty substrate media for detection of foodborne bacteria* (4, 8, 13, 20, 27, 36). Organism Trade Name Formata Assay Manufacturer Salmonella Isogridb HGMF QA Labs OSRT Medium/ motility Unipath (Oxoid) Rambach Medium CHROMagar MUCAP C8esterase Biolife XLT-4 Difco MSRVb * Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed. a Abbreviations: APC, aerobic plate count; HGMF, hydrophobic grid membrane filter; ATP, adenosine triphosphate; MUG, 4-methylumbelliferyl-ß-D-glucuronide; ONPG, O-nitrophenyl ß-D-galactoside; MPN, most probable number. b Adopted AOAC Official First or Final Action. c Application for water analysis d EHEC - enterohemorrhagic Escherichia coli NOTE: This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this list does not indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.