1 Importancia de los marcadores moleculares en un programa de mejoramiento
2 Marcadores Moleculares :• No son afectados por el medio ambiente. • No son afectados por las condiciones de manejo. • Detectables en todos los estados de crecimiento. Importante entender: Localización de los genes Su contribución al fenotipo Interacción con otros genes Identificación genes de interés Nuevo escenario: mapas moleculares Varios tipos de marcadores moleculares Paquetes estadísticos disponibles
3 Selección Asistida Marcadores (MAS)Oportunidades ofrecen marcadores moleculares Selección basada en genotipos • Análisis de individuos en estado juvenil. • Screening ó tamizado de varios caracteres • Minimiza el linkage drag ( caracteres negativos) • Rápida recuperación del padre recurrente Requisitos Esenciales ( MAS) • Deben cosegregar o estar muy ligados al carácter • Screening eficiente de poblaciones segregantes. PCR-tecnol. • Técnica de evaluación debe ser: muy reproducible, económica, sencilla y de fácil uso ó amigable • Tecnología MAS debe estar integrada a programas mejoramiento.
4 Tipos de Marcadores Morfológicos: Asociados con caracteres morfológicos de fácil identificación visual(análisis de ligamiento y primeras versiones mapas genéticos) Bioquímicos (Isoenzimáticos;esterasa,fosfatasa,peroxidasa,) y Proteinas. disponinibles y se extendió a casi todas especies. Marcadores moleculares: Surgieron a raíz de los avances en biología molecular. Se definen como alteraciones en la secuencia de ADN ocasionadas por mutaciones, deleciones, duplicaciones ó inserciones. Pueden visualizarse como polimorfismos en el ADN y son heredables. Tipos de marcadores moleculares: RFLP, RAPDs, AFLPs, SCARS, SSRs ó microsatélites.
5 Características más Importantes
6 Ventajas Marcadores MolecularesFacilitan la construcción de mapas genéticos debido al alto nivel de polimorfismo. Son neutros, con relación a los efectos fenotípicos con efecto epistático o pleiotrópico mínimo ó nulo. En su mayoría son codominates y contienen mayor información genética por locus que los morfológicos (son dominantes ó recesivos). Pueden utilizarse en cualquier fase de desarrollo
7 Caracteres Seleccionados para MASA corto plazo • Importante para la industria ó mercado • Herencia sencilla y altamente heredable • Selección difícil o poco confiable con marcadores no DNA • Selección posible en generaciones tempranas • Información disponible: genética, herencia y localización Mapa. A largo plazo • Importancia alta para industria ó mercado • Puede ser mas complejo • Puede ser carácter cuantitativo (QTL) • Interacción GxE
8 Eficiencia de MAS Debemos considerar que:• Tecnología MAS es reciente (1986); más tiempo. • Mayoría de artículos publicados no estuvieron necesariamente enfocados a liberación de variedades o razas. • Caracteres de interés mal escogidos ó poco importantes. • La metodología MAS no estaba bien integrada al programa de mejoramiento.
9 Empleo de los Marcadores Moleculares• Identificación ó marcaje de alelos; herramientas que facilitan la selección del alelo de interés (MAS). • Estudios de variabilidad genética y selección de progenitores. • Identificación de cultivares o razas (fingerprinting). • Protección derechos propiedad intelectual u obtentor • Evaluación pureza genética • Mapeamiento genético y organización genomas
10 Mejoramiento Genético Asistido por MarcadoresConstrucción de mapas moleculares: Se diferencian de los mapas genéticos convencionales (caracteres cualitativos). Estan muy saturados con marcadores próximos. • Cruzar progenitores contrastantes. • Construcción del mapa; calcular la distancia (recombinación) entre marcadores y los ubica en el mapa. • Herencia simple: bulks segregantes contrastantes. • Herencia cuantitativa(QTLs) regiones genómicas que contienen loci genéticos asociados con caracteres interés. Pruebas asociación entre marcadores y datos fenotípicos. Se utilizan métodos estadísticos como regresión lineal y ANOVA. Analiza la distribución de valores fenotípicos para cada marcador.
11 Perspectivas Futuras • Tecnologia MAS creó muchas expectativas• Algunas lecciones aprendidas • Desarrollar mejores métodos/sistemas evaluación • Tamaño apropiado y selección poblaciones • Evaluación en muchos sitios y repeticiones • Análisis estadístico apropiado/datos molecular • Diferentes background y generaciones apropiadas • Buena caracterización y selección del carácter • Biotecnologia es una rama con desarrollo rápido de nuevas técnicas/aplicaciones
12 Estrategias para el desarrollo de plantas transgénicasGenética de la Producción Estrategias para el desarrollo de plantas transgénicas
13 Biotecnología Moderna
14 Aplicaciones de la Ingeniería Genética en las plantas.
15 Cultivos transgénicos de primera generaciónEl aumento de la productividad de los cultivos. La reducción en el uso de agroquímicos. La conservación de la tierra arable, el agua y la energía, la reducción de la contaminación del ambiente y los beneficios para la salud humana derivados de estos aspectos.
16 Cultivos transgénicos de Segunda Generación:Estos comprenden el mejoramiento de la calidad nutricional (proteínas, aceite, vitaminas y minerales). La eliminación de alérgenos. La fitoremediación (es decir la recuperación de ambientes contaminados mediante el uso de plantas).
17 Cultivos transgénicos de Tercera Generación:La utilización de plantas como bioreactores para la expresión de proteínas recombinantes : Producción de vacunas comestibles, anticuerpos y otras proteínas de uso terapéutico o industrial. Esta aplicación se conoce como «molecular farming» (producción de moléculas en la granja) y presenta numerosas ventajas para la producción en gran escala de estas proteínas en particularen lo que respecta a costos, practicidad y seguridad.
18 Plantas Biofábrica -Proteínas -Vacunas -Biofármacos -Polímeros-Enzimas Agricultura Molecular Plantas Biofábrica Introducción de Genes Biotecnología Completar una ruta metab. -Todas las enzimas de una ruta metab. que no posee la planta Ingeniería Metabólica Modif.de las Rutas metabólicas
19 Agricultura molecularConsiste en introducir en una planta genes que codifican para proteínas con interés biomédico o industrial, como vacunas, anticuerpos, biofármacos, polímeros o enzimas, de modo que la planta sea capaz de producirlos. Ingeniería metabólica Consiste en la modificación de las rutas metabólicas de la planta para incrementar la síntesis de moléculas deseables, bien mediante la introducción de genes que codifican para enzimas que completan una ruta metabólica existente en la planta, o genes que codifican para todas las enzimas de una ruta metabólica que no posee la planta.
20 Transformación genética estable de las plantasPermite obtener plantas modificadas genéticamente en las que el material genético introducido aparece en todas las células de la planta y se transmite a la descendencia. Son lo que se denomina “plantas transgénicas”
21 VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LA TRANSFORMACIÓN NUCLEAR• Existen protocolos de transformación y regeneración para muchos vegetales, entre los que se incluyen muchas especies comestibles. Inconvenientes • La inserción del material genético ocurre al azar, existiendo fenómenos que disminuyen la producción como el efecto de posición o el silenciamiento. • La acumulación de las proteínas recombinantes en el citoplasma puede tener efectos tóxicos para la planta o interferir en el desarrollo. • Es necesario utilizar marcadores para seleccionar las plantas transformadas. • La modificación genética puede transmitirse a través del polen, lo que da lugar a riesgos de escape.
22 VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LA TRANSFORMACIÓN DE CLOROPLASTOS• Integración del ADN transformante mediante recombinación homóloga, lo que previene el efecto de posición. • Ausencia de efectos epigenéticos como silenciamiento, cosupresión, etc. • Elevados niveles de expresión debido a que cada cloroplasto presenta un gran número de copias de su cromosoma, y cada célula presenta un número elevado de cloroplastos. El número copias del ADN del cloroplasto por célula puede ser hasta , lo que puede dar como resultado una acumulación de hasta el 47% de las proteínas totales solubles.
23 • Las proteínas recombinantes se acumulan en el interior del cloroplasto previniendo problemas de toxicidad o interferencia en el desarrollo de la planta. • Permite la expresión de operones policistrónicos, por lo que se pueden introducir varios genes en un solo evento de transformación bajo el control de un solo promotor. Esto puede ser muy interesante en la ingeniería metabólica donde en ocasiones es necesario introducir varios genes que codifican para enzimas distintas de una ruta metabólica y se desea que se sinteticen de manera coordinada. • Los cloroplastos no se transmiten a través del polen ya que su herencia es materna en la mayor parte de las plantas, disminuyendo el riesgo de contaminación cruzada debido al aislamiento del transgén en el cloroplasto.
24 Inconvenientes • Riesgo de transferencia horizontal de los transgenes a bacterias debido a la homología que presentan el genoma bacteriano y el de los cloroplastos. • La transformación de cloroplastos sólo se hace de manera rutinaria en tabaco y en el alga C. reinhardii y aunque se ha logrado transformar cloroplastos en algunas especies comestibles como zanahoria y tomate, todavía es necesario optimizar el proceso. • Los cloroplastos no son capaces de llevar a cabo algunas modificaciones postraduccionales como la glicosilación. • No se produce la exportación de las proteínas sintetizadas hacia otros orgánulos o compartimentos celulares.
25 Algunos ejemplos exitososExisten algunos ejemplos de productos obtenidos de plantas de tabaco en las que se han transformado los cloroplastos y se han conseguido rendimientos elevados como la producción de hormona del crecimiento humana (8% de la proteína soluble total o PST), albúmina sérica humana (11% PST), fragmentos de las toxinas colérica y tetánica (25% PST), y producción de una xilanasa termoestable (6% PST).
26 Expresión transitoriaImplica la expresión de proteínas recombinantes sin necesidad de transformación de la planta. El ADN recombinante no se inserta en el genoma o plastoma de la planta, sino que mediante distintos métodos se consigue producir grandes cantidades de ARN mensajero, que se traduce a proteínas en el citoplasma de parte de las células de la planta. Una vez que el ARNm es traducido la planta lo degrada, de modo que no se transmite a la descendencia. Normalmente no da rendimientos muy elevados y requiere un procesado rápido del tejido vegetal para evitar la degradación de la proteína recombinante.
27 La expresión transitoria de genes generalmente se utiliza para evaluar la funcionalidad de construcciones que se usan para transformar plantas de manera estable, y evaluar la calidad del producto obtenido. Debido a los inconvenientes que presenta la transformación nuclear estable, principalmente en cuanto a tiempo, la expresión transitoria ha ido tomando mayor importancia para su utilización como sistema de producción de proteínas recombinantes. Puede llevarse a cabo mediante la utilización de vectores virales o mediante agroinfiltración.
28 VENTAJAS DE LA EXPRESIÓN TRANSITORIA• Expresión rápida y flexible. • No está influida por efectos de posición. • Puede inducirse en plantas adultas, previniendo cualquier efecto negativo que la proteína recombinante pudiese tener en el desarrollo de la planta. • No es una modificación genética permanente, lo que desde el punto de vista de la seguridad es una ventaja. • Ideal para obtener pequeñas cantidades de proteínas “a medida” en pocas semanas.
29 Agroinfiltración Consiste en la infiltración mediante vacío de cepas de A. tumefaciens recombinante que contengan los genes que se desean expresar en la planta. Como en el caso de la transformación estable mediada por Agrobacterium, las proteínas de la bacteria facilitan la transferencia de los genes de interés a algunas de las células de la hoja. El transgén se introduce en el núcleo celular, pero no se integra en el material genético de la planta.
30 No es necesario incluir marcadores para seleccionar las células transformadas, ya que no es preciso regenerar una planta, lo que permite utilizar plásmidos de menor tamaño. La utilización de plásmidos permite introducir construcciones de mayor tamaño que utilizando vectores virales. Permite producir elevados niveles de proteína recombinante pero durante períodos de tiempo muy cortos, que generalmente son insuficientes para la producción a escala comercial. Este hecho se debe a que se producen fenómenos de silenciamiento postranscripcional.
31 Vectores Virales Consiste en la inoculación de la planta con virus recombinantes, que contienen las secuencias a expresar en la planta bajo el control de promotores fuertes. La secuencia que se desea expresar, nunca se integra en el genoma de la planta y se expresa sólo en la planta infectada, sin que se transmita a la descendencia por polen o semillas. Puede elegirse el momento del desarrollo en el que se desea infectar la planta. Pueden usarse distintos tipos de virus vegetales para la construcción de los vectores, aunque lo más frecuente es utilizar virus de cadena sencilla de ARN, como el virus del mosaico del tabaco.
32 VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS VECTORES VIRALES• Presentan genomas pequeños fácilmente manipulables. • Elevado nivel de multiplicación que permite altos rendimientos. • Algunos tienen un rango de hospedadores elevado, lo que permite usar un mismo vector con distintas especies. • Puede realizarse una infección simultánea con varios vectores, consiguiendo la producción de distintas proteínas en una misma planta. • Al ser virus vegetales, no existe riesgo de infección. Inconvenientes • Es necesario inocular cada generación de plantas. • Algunas construcciones son inestables, existiendo el riesgo de que se pierdan los transgenes de un tamaño superior a 1 kb.
33 ESTRATEGIAS DE “HUMANIZACIÓN” DE PROTEÍNAS EN PLANTAS• Almacenamiento de las proteínas en el retículo endoplásmico, evitando que pasen al aparato de Golgi donde se añaden este tipo de residuos. Se consigue mediante la adición de secuencias H/KDEL, como se ha explicado en el apartado de protección contra la degradación. • Inhibición de las enzimas glicosiltransferasas de plantas, que son las enzimas que catalizan la unión de los residuos de N-glicanos. Se han clonado los genes de varias enzimas de este tipo y se ha comprobado en el musgo Physcomitrella patens, que el bloqueo de los genes de dos de estas enzimas previene la producción de los epítopos específicos de plantas sin afectar a la secreción de la proteína. • Expresión de glicosiltransferasas de mamíferos en las plantas. La expresión de estas enzimas en plantas permitiría completar la maquinaria del aparato de Golgi para la maduración de proteínas y podría competir con la maquinaria que realiza las modificaciones específicas de las plantas. • Eliminación de las secuencias de reconocimiento para la N-glicosilación. Esta estrategia se utiliza en aquellos casos en los que no se requiere la glicosilación de la proteína para que sea funcional.
34 Factores Críticos Ambientales: Escape de PolenContaminación cruzada por mezcla de semillas Ingestión por los animales Permanencia en el suelo de restos Permanencia y acumulación en el medio de proteínas transgénicas potencialmente peligrosas
35 Factores Críticos Salud humana y animal:Riesgo de pasar a la cadena alimentaria Contaminación con herbicidas o insecticidas Contaminación con micotoxinas
36 Factores Críticos Técnicos: Mayor tiempo para la primer cosechaExpresión baja para algunas proteínas Diferencias en las modificaciones postraduccionales Dificultad para la dosificación en las vacunas comestibles
37 Estrategias Tecnológicas para Optimizar la Obtención de Proteínas Recombinantes en Plantas-Aumento de la Síntesis -Protección contra la degradación (Aumento de la estabilidad) -Aumento del rendimiento de la purificación Aumento del Rendimiento de Producción Autenticidad estructural
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40 Primera Generación
41 Resistencia a hongos fitopatógenos
42 Problemas que causan los hongos en los cultivosDesde la domesticación de las plantas los hongos han causado grandes pérdidas en la producción. Las causas principales son los monocultivos (baja diversidad genética e incremento de la agresividad de algunos patógenos) Algunos patógenos reducen, además la calidad de los alimentos. Ej: Fusarium y Aspergillus
43 Estrategias de patogeniaHongos necrotróficos: Invaden agresivamente los tejidos de la planta. Matan a las células para obtener nutrientes mediante toxinas o enzimas. Foto Fusarium en papa
44 Estrategias de patogeniaHongos biotróficos: parásitos obligados que se nutren de células vivas. Crecen en el espacio intercelular, invadiendo sólo unas pocas células con estructuras de absorción llamadas haustorios. Las royas, oídios y mildius están dentro de este grupo de hongos.
45 Estrategias de patogeniaHongos hemibiotróficos: Se comportan como parásitos biotróficos durante los primeros estadios de la infección. Al avanzar la colonización, el tejido muere y continúan su ciclo como necrotróficos. Phytophtora infestans es el de mayor importancia agronómica.
46 Algunas estructuras fúngicas desarrolladas para invadir tejidos vegetales
47 Daños causados por hongos patógenosFig.B Gibberella en cebada Fig.A Puccinia (roya) y Ustilago en maíz
48 Daños causados por hongos patógenosLesiones concéntricas causadas por Colletotricum gloeosporioides Manchas necróticas en mamón causadas por Stemphyliun lycopersici. Pudrición en pepinos causada por Rhizoctonia solani
49 Prácticas tradicionales de prevenciónUso de condiciones de almacenamiento controladas Selección de variedades naturalmente resistentes Empleo de técnicas de mejoramiento tradicional (introducción de genes de resistencia) Rotación de cultivos Uso intensivo de fungicidas: Introduce costos de producción. Afecta el medio ambiente. Es riesgoso para los operarios. Puede ser neutralizado por el riego o la lluvia. Puede originar fungoresistencia. Resistencia genética: Inconvenientes para su aplicación ( falta de genes de resistencia, rápida evolución de las nuevas razas virulentas del patógeno, etc.).
50 Nuevas herramientas biotecnológicasEl cultivo in vitro es una estrategia para la búsqueda e incorporación de resistencia. A través del mismo es posible: sortear barreras a la hibridización seleccionar rápida y de manera eficiente materiales resistentes a enfermedades Se basa en exponer plantas, órganos, tejidos o células vegetales a patógenos o sus metabolitos simulando la interacción hospedador-patógeno que se da en la naturaleza.
51 Estrategias para obtener resistencia mediante ingeniería genéticaTransformación con genes de resistencia. Modulación de la respuesta oxidativa. Inducción de respuestas defensivas. Sobrexpresión de genes que regulan respuestas defensivas. Expresión de proteínas de defensa de origen vegetal. Combinación de proteínas antifúngicas. Interferencia con el proceso de infección. Expresión de proteínas antifúngicas de otros organismos.
52 Transferencia de genes de resistenciaEstrategias más utilizadas: Expresión de compuestos antimicrobianos (enzimas hidrolíticas, proteínas antimicrobianas) Expresión de enzimas o compuestos que neutralizan componentes de ataques a patógenos (inhibidores de poligalacturonasas, inactivadores de toxinas) Fortalecimiento de las defensas estructurales (aumento en los niveles de ligninas o peroxidasas) Modificación de las vías de señales que regulan las defensas por la producción de elicitores específicos (peróxido de hidrogeno, ácido salicílico o etileno) Expresión de productos de genes de resistencia (R)
53 Modelo simplificado de la interacción entre productos de genes R y AvrLos productos de los genes R y Avr desencadenan las respuestas defensivas de las plantas.
54 Aparición de resistenciaEl uso continuado de cultivos portadores de genes R puede originar la aparición de patógenos resistentes
55 ¿Cómo evitar la aparición de resistencia?
56 Actualmente no existen en el mercado plantas transgénicas que expresen resistencia a enfermedades fúngicas.
57 ESTRATEGIAS PARA LA OBTENCIÓN DE RESISTENCIA AL ATAQUE DE INSECTOS
58 Permite a una planta evitar, tolerar o recuperarse de los daños provocados por las poblaciones de insectos u otros organismos dañinos. Puede provenir de aspectos morfológicos y/o bioquímicos que afectan el comportamiento y metabolismo de las plagas, en general provenientes de cultivares comerciales y de plantas silvestres vinculadas al cultivo. Se encuentran plantas con factores que causan “no preferencia”, “tolerancia al daño” o provocan “antibiosis”.
59 Antibiosis Implica un efecto fisiológico adverso al desarrollo de un insecto, de tipo transitorio o permanente que puede ser provocado por la presencia de sustancias como metabolitos tóxicos (glucósidos, quinonas), plantas que presentan un desbalance de nutrientes para el organismo plaga y la presencia de enzimas inhibidoras de la digestión. Efectos en los insectos: Muerte de insectos pequeños. Disminución de la tasa de crecimiento. Fallas en la metamorfosis. Alteración de la diapausa. Reducción de la fertilidad.
60 Ostrinia nubilalis. Piral del maízDécada ´60: se identificó la estructura química de los factores antibióticos presentes principalmente en maíz joven que provocaban la muerte de las larvas de una plaga de gran importancia como es el barrenador europeo Ostrinia nubilalis. Estos estudios abrieron una importante línea de investigación sobre los mecanismos de la resistencia genética a insectos. Ostrinia nubilalis. Piral del maíz
61 Enfermedades bacterianas en insectosEn 1870, Pasteur reporta las primeras enfermedades bacterianas en insectos. En 1911 d"Herelle: Coccobacillus acridiorium en locústidos en México. Serratia marcenses en varios grupos de insectos. Serratia marcenses Popilia japonica Bacillus popilliae y B. lentimorbus en Popillia japonica “escarabajo japonés”.
62 Bacillus thuringiensisBerliner en Thuringia, Alemania, determinó que un bacilo esporulante y cristalífero, al cual denominó Bacillus thuringiensis (Bt), era el causante de la muerte de larvas de Anagasta kuehniella Bacillus thuringiensis Anagasta kuehniella Esporas de Bacillus thuringiensis
63 Bacillus thuringiensis Familia: BacillaceaePresenta células vegetativas en forma de bastoncillos más o menos largos, agrupados en cadenas de 2 a 3 células. Gram+, aerobias y esporógenas, durante su cultivo y asociadas a la formación de esporas, se forman cuerpos parasporales. Los cuerpos parasporales están compuestos de uno ó más tipos de delta proteína (endotoxinas). Entre éstas se encuentran las proteínas cristal (Cry) (pesticidas) en la ingeniería genética de plantas. Las proteínas Cry se liberan solo bajo lisis celular y son selectivamente tóxicas a algunos invertebrados (lepidópteros, coleópteros y dípteros). En B. thuringiensis se ha encontrado un plásmido de 137 Kb que contiene los genes que codifican para algunas proteínas Cry.
64 Clasificación Se han usado varios métodos.Caracterización morfológica y bioquímica: utilizando técnicas convencionales. Análisis serológico de antígenos flagelares (antígeno H) de células vegetativas: 55 serotipos. (Esta clasificación no permite correlacionar la cepa con la actividad patogénica, que está determinada por el tipo de delta endotoxina). Patrones electroforéticos de esterasas Análisis de ácidos grasos: separación de cepas. Patrones plasmódicos dada la presencia de plásmidos como portadores de los genes que codifican para las toxinas cristalíferas. Genética molecular: los genes que codifican para la toxina cristal que están localizados en plásmidos y tienen una correlación estrecha con la toxicidad fenotípica. La clasificación basada en los genes que codifican estas toxinas, a los cuales se denominan genes CRY, están basados en cinco grupos fundamentales. Estos genes codifican las siguientes proteínas: 1. proteínas tóxicas a lepidópteros grupos Cry1, Cry2 y Cry9; 2. toxinas activas contra coleópteros grupos Cry3, Cry7 y Cry8 3. proteínas con actividad dual grupos Cry1B y Cry1I; 4. proteínas con actividad nematicida, grupos Cry5, Cry12, Cry13 y Cry14; 5. proteínas toxicas a dípteros, grupos Cry2, Cry4, Cry10, Cry11, Cry16, Cry17, Cry19 y las Cyt.
65 Modo de acción de la d-endotoxinaLa proteína cristalina es altamente insoluble en condiciones neutras y se solubiliza en condiciones de pH alto. Activación: ocurre por una discreta proteolisis causada por las enzimas estomacales del insecto. Una vez solubilizado en el tubo digestivo, la protoxina se rompe por una proteasa para producir una toxina activa. Esta toxina se une a las células epiteliales del tubo digestivo creando poros en la membrana celular y propicia un desequilibrio de iones resultando en la pérdida de iones K+, alterando la presión osmótica. El animal muere debido a una entrada masiva de agua, el sistema digestivo se paraliza, las células epiteliales se lisan y el pH estomacal se baja por compensación con el pH sanguíneo. Esta bajada de pH hace posible que las esporas bacteriales germinen y la bacteria pueda invadir el huésped causando una septicemia letal y daños en los tejidos. Generalmente los insectos intoxicados mueren por ayuno y posterior detención del crecimiento que puede durar algunos días. Las larvas afectadas por las toxinas de B. thuringiensis se vuelven inactivas, y podrían devolver la comida o tener diarrea. La cápsula de la cabeza podría aparecer más larga que el cuerpo (deformada). La larva se vuelve flácida y muere, generalmente en unos días o semanas. El contenido del cuerpo se vuelve marrón-negruzco según se va descomponiendo.
66 Estrategias para introducir genes Bt a diferentes especies vegetalesAgrobacterium tumefaciens. Pistola genética o método biolístico.
67 Estrategias para introducir genes Bt a diferentes especies vegetales: Agrobacterium tumefaciens: se ha introducido un gen de Bacillus thuringiensis (cry1Ab) a la mandioca.
68 Pistola genética o método biolístico.
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