1 Microbiologia – aula práticasPrimeira parte (Caracterização de microrganismos) Preparo e observação de lâminas Microscopia de luz e eletrônica Morfologia de bactérias e fungos 1ª. Prova Prática – 13, 14 e 15 de Abril 2016 Segunda parte (Microbiologia aplicada) Isolamento, cultivo e controle de microrganismos Análise e tratamento de água 2ª. Prova Prática – 15, 16 e 17 de Junho 2016

2 Microbiologia – aula práticasPrograma completo, slides, frequência e notas – Stoa Média das provas práticas tem peso um na média final Apostila de aulas práticas Cuidado no uso dos equipamentos e materiais laboratoriais Normas de segurança

3 Normas de segurança a serem seguidas dentro do laboratórioJamais acenda uma lamparina na chama de outra lamparina 2) Pessoas com cabelos longos devem mantê-los presos 3) Fique atento às operações quando for necessário realizar aquecimento 4) Use sempre luvas de isolamento térmico ao manipular material quente 5) Cuidado no manuseio de estiletes, lâminas e lamínulas de vidro 6) Nunca pipete líquidos com a boca 7) Não coma ou beba na sala de aula prática 8) Mantenha o celular sempre desligado durante a aula 9) A Sala de aulas práticas não é lugar para brincadeiras! Concentre-se no que estiver fazendo 10) Em caso de dúvida consulte o professor ou o monitor da disciplina

4 Bactérias: Microrganismos procariotosNão apresentam vacúolos e organelas membranosas (mitocôndria, cloroplasto) Não apresentam membranas internas Unicelulares Multiplicação por fissão binária (cissiparidade)

5 estruturas típicas de uma bactéria micrografia de um corte transversal

6 Dimensões de uma célula bacterianaComparação dos tamanhos de procariotos (Brock et al., 2004)

7 Classificação de bactériasAnálises genéticas: hibridização DNA- DNA, comparação de sequências rRNA e de genes housekeeping (conservados entre espécies) Análise de propriedades bioquímicas e metabólicas Características morfológicas (forma, flagelos, parede celular...)

8 Classificação de bactériasTestes bioquímicos e fisiológicos Gram Motilidade Produção de ácidos a partir de carboidratos Oxidação/fermentação de glicose Asparagina como única fonte de carbono e nitrogênio Produção de pigmento verde-fluorescente Teste de oxidase Produção de 3-cetolactose Produção de inclusões de poli-β-hidroxibutirato

9 Características utilizadas para diferenciar gêneros de bactérias fitopatogênicas

10 Bactérias: Formas básicasformas celulares (morfologia) representativas de procariotos

11 Coloração de BactériasObservação das características morfológicas Facilita (permite) a visualização Evidencia diferenças entre células (Método de Gram)

12 Coloração de BactériasDireta ou positiva - A bactéria fica colorida Simples Gram (ou diferencial) Corantes: Safranina ou Fucsina Indireta ou negativa - A lâmina fica colorida Corantes: Nankin ou Nigrosina

13 Coloração direta Esfregaço Fixação Coloração (1 min) Lavagem SecagemObservação

14 Coloração indireta 1. Esfregaço 2. Fixação

15 Coloração indireta 3. Coloração

16 Coloração indireta 4. Secagem 5.Observação Secar no calor ou no arBacillus subtilis

17 Partes do microscópio de luzOculares Revólver Objetivas Presilha do Charriot Mesa Diafragma Condensador Fonte de luz Macrométrico Charriot Micrométrico Base

18 Focalização ao microscópio de luzIniciar sempre com a objetiva de menor aumento Objeto no centro da mesa e sob incidência da luz Ajustar a iluminação (maior quantidade de luz através do objeto) Elevar a mesa até a altura máxima utilizando o macrométrico Iniciar o processo de focalização, abaixando vagarosamente a mesa com o macrométrico Fazer a focalização fina com micrométrico Mudar para objetivas de maiores aumentos gradativamente Na mudança da objetiva de 40x para 100x utilizar apenas o micrométrico para focalização final (objetiva de 100x somente para bactérias, sempre com óleo de imersão) Acertar a quantidade de luz para melhor observação e conforto visual Condensador deve permanecer sempre em posição elevada (ou aberta)

19 Efeito do óleo de imersão

20 Motilidade de bactérias técnica da gota pendentefocalizar a margem da gota para observar bactérias em movimento use aumentos 100x e 400x

21 Exemplos de arranjos de flagelos

22 Exemplos de arranjos de flagelos