1 Motilidade de bactériasMICROBIOLOGIA Coloração de Gram Motilidade de bactérias

2 Classificação de bactériasAnálise do ácido nucléico: sequência do DNA do rRNA (conservado entre espécies) Análise de propriedades bioquímicas e metabólicas Características morfológicas (forma, flagelos, parede celular...)

3 Classificação de bactériasTestes bioquímicos e fisiológicos Gram Motilidade Produção de ácidos a partir de carboidratos Oxidação/fermentação de glicose Asparagina como única fonte de carbono e nitrogênio Produção de pigmento verde-fluorescente Teste de oxidase Produção de 3-cetolactose Produção de inclusões de poli-β-hidroxibutirato

4 Coloração de BactériasDireta ou positiva - A bactéria fica colorida Simples Gram (ou diferencial) Corantes: Safranina ou Fucsina Indireta ou negativa - A lâmina fica colorida Corantes: Nankin ou Nigrosina

5 Coloração de Gram sequência de corantesProfessor Hans Christian Gram Bacteriologista Dinamarquês Desenvolveu o método de coloração em Berlin, 1884 Após fixação do esfregaço: Cristal violeta (1 min) Lavar com água Solução lugol (1 min) Lavar com álcool absoluto por 30 seg Safranina (30 seg) Secar Observar (até aumento 1000x c/ óleo imersão)

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8 O resultado da coloração de Gram depende do tipo de parede celular

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10 A parede celular e a inserção do flagelo

11 Exemplos de arranjos de flagelos

12 Exemplos de arranjos de flagelos

13 Motilidade de bactérias técnica da gota pendentefocalizar a margem da gota para observar bactérias em movimento use aumentos 100x e 400x

14 Focalização ao microscópio de luzIniciar sempre com a objetiva de menor aumento Objeto no centro da mesa e sob incidência da luz Ajustar a iluminação (maior quantidade de luz através do objeto) Elevar a mesa até a altura máxima utilizando o macrométrico Iniciar o processo de focalização, abaixando vagarosamente a mesa com o macrométrico Fazer a focalização fina com micrométrico Mudar para objetivas de maiores aumentos gradativamente Na mudança da objetiva de 40x para 100x utilizar apenas o micrométrico para focalização final (objetiva de 100x somente para bactérias, sempre com óleo de imersão) Acertar a quantidade de luz para melhor observação e conforto visual Condensador deve permanecer sempre em posição elevada (ou aberta)