1 Patrycja Chworak Grupa 4Real time PCR Patrycja Chworak Grupa 4

2 Real time PCR ≠ RT PCR Reakcja łańcuchowa polimerazy DNA z analizą ilości produktu w czasie rzeczywistym.

3 SYBR GreenI, jodek propidyny FAM, NED, ROX, TET (5’) Sondy TaqMan HybPRobes HyBeacon Molecular beacons Startery sunrise PNA Detekcja niespecyficzna specyficzna Barwnik Bromek etydyny, SYBR GreenI, jodek propidyny FAM, NED, ROX, TET (5’) 2x barwnik (3’ i 5’) 5’ Wygaszacz FRET - TAMRA, NFQ, DABCYL (3’) FQ, DABCYL (3’) NFQ, DABCYL (3’) Budowa Cząsteczki fluorochromu Krótkie oligonukleotydy Dwie krótkie sondy Oligonukleotydowa oligonukleotydowa Syntetyczny analog DNA Rodzaj liniowe Pojedyńcza liniowa Spinka do włosów Pojedyńcze, hairpines Długość 14-40 pz 40-50pz G+C 40-60% Tm +5oC od primerów Jzmiany jej wskazują na polimorfizm sekwencji

4

5 Modyfikacje RT real time PCR Multiplex real time PCR

6 Zastosowanie Diagnostyka bakteriologiczna i wirusologiczna onkologiaTerapia genowa Badanie ekspresji genów genotypowanie

7 Otrzymane dane