1 W CZASIE WYKŁADU TELEFONY KOMÓRKOWE POWINNY BYĆ WYŁĄCZONE LUB WYCISZONE

2 POLIMERAZY RNA Biorą udział w syntezie RNA na matrycy DNA- transkrypcji Początek i koniec transkrypcji regulują sekwencje DNA i wiążące się do nich białka Wymagają obecności dUTP Synteza RNA zachodzi od końca 5’ do 3’ Główne etapy przebiegu transkrypcji: niespecyficzne wiązanie z DNA poszukiwanie promotora genu związanie z promotorem genu rozplecenie DNA (transcription bubble) synteza RNA (na nici antysensownej) Terminacja syntezy „naturalnie” przez utworzenie się struktury spinki do włosów lub przy pomocy faktora rho

3

4

5 POLIMERAZY RNA-ProcaryotaRNA polimeraza E.coli Holoenzym złożony z 4 podjednostek (gwarantujących elongację) i 1 podjednostki niezbędnej do inicjacji transkrypcji: α-składanie enzymu (części białkowej- apoenzymu i niebiałkowej- kofaktora) β-podjednostka katalityczna β’- wiązanie z DNA ω-utrzymywanie aktywności enzymu σ- rozpoznawanie promotora ρ- (rho)faktor odpowiedzialny za rozpoznanie terminacji (opcjonalnie) Po rozpoznaniu promotora genu syntetyzuje ssRNA do sekwencji terminatorowej; wymaga Mg2+

6 POLIMERAZY RNA-ProcaryotaRNA polimeraza Faga SP6 produkowana przez Salmonella typhimurium LT2 zakażoną fagiem SP6 pojedynczy polipeptyd 96kDa polimeraza rozpoznaje tylko promotor SP6 „produkuje” ośmiokrotną ilość RNA w stosunku do DNA nie przerywa transkrypcji przy nacięciach matrycy wymaga Mg2+ 10nm

7 POLIMERAZY RNA-Procaryota

8 POLIMERAZY RNA-ProcaryotaRNA polimeraza faga T3 produkowana przez zrekombinowane plazmidem pCM56 E. coli zawierające gen polimerazy T3 pojedynczy polipeptyd 100kDa polimeraza rozpoznaje specyficznie promotor T3 (plazmidowy) wymaga Mg2+

9 POLIMERAZY RNA-ProcaryotaRNA polimeraza faga T7 produkowana przez zrekombinowane plazmidem pAR1219 E. coli zawierające gen polimerazy T7 pojedynczy polipeptyd 98kDa polimeraza rozpoznaje specyficznie promotor T7 (plazmidowy) „produkuje” trzydziestokrotną ilość RNA w stosunku do DNA wymaga Mg2+

10 POLIMERAZY RNA-ProcaryotaRNA polimeraza faga T7

11 POLIMERAZY RNA-EucaryotaZbudowane są z minimum 12 podjednostek! RNA polimeraza I geny kodujący rybosomalny RNA RNA polimeraza II geny kodujące białka RNA polimeraza III geny tRNA i 5sRNA Polimeraza mtRNA produkowana jest w jądrze komórkowym i transportowana do mitochondriów składa się tylko z dwóch podjednostek: σ oraz podjednostki identycznej z RNA polimerazą T7

12 POLIMERAZY RNA-EucaryotaRNA polimeraza I strukturalne składniki rybosomów kodowane przez zespoły genów tworzące jąderka potrzebne w bardzo dużych ilościach

13 POLIMERAZY RNA-EucaryotaRNA polimeraza II syntetyzuje RNA na matrycy genów kodujących białka aktywność regulowana przez sekwencje TATA box, elementy regulacyjne i enhancery (aktywatory transkrypcji) mRNA powstaje z transkryptu w wyniku dojrzewania

14 POLIMERAZY RNA-EucaryotaWyspa CpG

15 POLIMERAZY RNA-EucaryotaTylko 24% promotorów w ludzkich genach zawiera kasetę TATA; 46% promotorów zawiera sekwencję INR a wśród nich 35% zawiera również kasetę TATA większość genów bez kasety TATA to geny homeostatyczne minimalnym inicjatorem jest YR (pirymidyna a następnie puryna jako pierwszy nukleotyd ulegający transkrypcji)

16 POLIMERAZY RNA-EucaryotaRNA polimeraza III (jest obecna tylko u zwierząt) 5S rRNA produkowana jest niezależnie poza jąderkiem promotory dla tej polimerazy znajdują się w obrębie sekwencji kodującej (a więc w obrębie samego transkryptu) Odpowiedzialna również za syntezę interferencyjnego RNA (RNAi)

17 WIDIZMY SIĘ ZA TYDZIEŃ!