1 Por: Angélica Aquino María garriga Meraris Soto Luis e. OquendoTinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para identificar bacilos Gram-positivos Por: Angélica Aquino María garriga Meraris Soto Luis e. Oquendo

2 Catalasa -, no formadores de esporasBacilos Gram + Catalasa -, no formadores de esporas

3 Hay tres especies de Erysipelothrix:Erysipelothrix rhusiopathiae Erysipelothrix tonsillarum Erysipelothrix inopinata Erysipelothrix rhusiopathiae es la única que causa enfermedades en humanos

4 No formadora de esporas Tiende a formar largos filamentos No motiles Gram-positiva Catalasa negativa No formadora de esporas Tiende a formar largos filamentos No motiles Ureasa negativo Erisipeloide Produce H2S

5 Sensible a: Resistente a: Penicilina Cefalosporinas EritromicinaClindamicina Resistente a: vancomicina

6 Deben ser cultivadas en caldo nutriente con:1% de glucosa 5% de CO2 A 35 ˚C También crece en agar chocolate y agar sangre En agar sangre las colonias son no hemolíticas

7 Después de 48h de incubación se ven dos diferentes tipos de coloniasPequeña, forma lisa transparente, reluciente y bordes enteros Grande, colonias ásperas, estructura curvea, bordes irregulares

8 Aracnobacterium, 9 especiesAracnobacterium haemolyticum Aracnobacterium pyogenes Aracnobacterium bernardiae Catalasa negativa Agar Sangre Beta-hemólisis

9 Tinción de Flagelos

10 Tinción de flagelos Los flagelos son órganos de locomociónLos flagelos están compuestos por cerca de 20 proteínas, con aproximadamente otras 30 proteínas para su regulación y coordinación La flagelina es la principal del flagelo Tiene su origen en el protoplasma de la célula bacteriana

11 Tipos de flagelos

12 Métodos Kodak Método LeifsonCubrir la preparación durante 5 a 10 minutos Lavarlo por 2 ó 3 minutos Observar la placa de la periferia hacia el centro Método Leifson Fuscina básica en alcohol etílico Acido tánico en agua destilada Cloruro de sodio en agua destilada

13 Tinte RYU Se utiliza en el borde del cubreobjetosDespués de 5 a 10 minutos se examina la muestra

14 No formadores de espora, actinomicetos aeróbicos filamentososBacilos Gram + No formadores de espora, actinomicetos aeróbicos filamentosos

15 Actinomicetos Grupo heterogéneo Bacterias filamentosas ramificadasSimilar al crecimiento de hongos Aerobios / Anaerobios facultativos Crecimiento lento No motil

16 “Acid-fast stain”

17 “Acid-fast Stain”

18 Nococardia spp. Presente en suelo y en material vegetativo No motilParcialmente ácido-resistentes Se utiliza prueba modificada Utiliza ácido débil (0.5% a 1% H2SO4) En humanos causa infecciones pulmonares y subcutáneas sistémica afección al Sistema Nervioso Central La infección progresa rápidamente

19 Otros Actinomicetos A. madurae se diferencia por ser Xilosa positivoActinomadura spp. Gordonia spp. A. madurae se diferencia por ser Xilosa positivo Reduce nitrato No tiene micelio No motil Parcialmente ácido-resistente

20 Rhodococcus spp. R. equis Parcialmente ácido-resistente.Se diferencia por exhibir colonias rosa-salmón en Agar Sangre Parecido a Klebsiella

21 Identificación Actinomicetos

22 Formadores de esporas, no filamentosos, catalasa +Bacilos Gram + Formadores de esporas, no filamentosos, catalasa +

23 Esporas Resistentes a condiciones ambientales adversas.Organismos que producen esporas: Hongos Plantas Bacterias Clostridium difficile Permiten que el organismop sobreviva al ambiente.

24 Formación de esporas

25 Tinción de Esporas Fijar la bacteria en la laminilla.Colocar un pedazo de papel toalla en la laminilla. Echar verde malaquita sobre el papel toalla.

26 Tinción de Esporas Calentar la laminilla por 5 minutos.Lavar el frotis con agua destilada. Cubrir el frotis con safranina por 30 segundos. 5. Remover el papel y lavar el frotis

27 Tinción de Esporas Lavar con agua destilada y secar. B. anthracis B. anthracis

28 Bacilos formadores de esporasGram positivos Catalasa positivos Aeróbicos / Anaeróbicos facultativos Muchas de las especies crecen en Agar de Sangre Bacillus spp. & Clostridium spp.

29 Bacillus spp. B. anthracis B. cereus B. thuringienses B. subtillisNo motil No fermenta lactosa Infecciones humanas B. cereus Motiles Beta hemolítico B. thuringienses Insectos Beta hemolítico B. subtillis Aspecto liso, mucoide o rugoso insecticida

30 B. anthracis Son grandes, grises y planas.En Agar Sangre no son hemolíticas. Son halófilas y crecen en medios alcalinos. Susceptibles a penicilina, fluroquinolinas, entre otros. Simples o en cadenas.

31 “Medusa head” B. anthracis “Medusa head”

32 B. cereus Tiene dos enterotoxinas Crece a 37˚C en Agar Sangre.Emética Diarrea Crece a 37˚C en Agar Sangre. Resistentes a penicilina. Susceptible a vancomicina y clindamicina. Figura Bacillus cereus en Agar de Sangre

33 Identificación de Bacilos Gram + AeróbicosBacilos Catalasa +, no formadores de esporas y no filamentosos

34 Características GeneralesSe encuentran en el ambiente (agua y suelo) con facilidad. No se consideran altamente patogénicos, mas sin embargo se están aislando en infecciones clínicas con mayor frecuencia. Unos pocos son menos comunes, mas causan enfermedades severas.

35 Diagrama de Identificación

36 Corynebacteria C. (ulcerans, diphtheriae, pseudotuberculosis)Catalasa + No motil CTBA (medio) forman “halo” marrón C. diphtheria No produce ureasa Fermenta glucosa y maltosa Reduce nitrato a nitrito Prueba de Elek para detectar toxina

37 Elek’s Test Corta papel de filtro de 75% diámetro de plato de agar y 2 cm de ancho. Saturar con antitoxina C. diphtheria y esperar que seque. Añadir suero de conejo y “potassium tellurite” al agar caliente.

38 Elek’s Test Coloca los papeles en el plato de agar caliente y deja que llegue al fondo. Luego de sólido, añade el organismo y pon paralelo a este, controles negativos y positivos. Incubar de horas.

39 Identificación de C. diphtheria

40 Rothia and Listeria Cocos Gram + Disimulan ser BacilosRothia spp. Listeria monocytogenes Cocos Gram + Disimulan ser Bacilos Familia Micrococcacea Nitrato + No motil Hidrolizan esculina Ureasa Negativa 2/3 catalasa + Bacilos Gram + Familia Listericea Catalasa + Hidrolizan esculina Motiles B-hemolíticos Crece en 6.5% NaCl

41 Resultados de Pruebas BioquímicasIdentificación y diferenciación de bacilos gram positivos

42 Pruebas de Identificación

43 Pruebas de Identificaciónhttps://www.scribd.com/doc/ /Bacteriologia-diagnostica

44 Pruebas de IdentificaciónTabla 1 – Identificación y Diferenciación de géneros relacionados Pruebas Listeria Lactobacillus Erysipelothrix Microscopia Cocobacilos Bacilos Catalasa + - Vancomicina S R Motilidad (flagelos) H2S Bilis Esculina NaCl 6.5% B hemólisis V S – Susceptible, R – Resistente, V - Variable

45 Pruebas de Identificación

46 Pruebas de IdentificaciónDiferenciación de especies del género Bacillus Pruebas B. firmus B. subtillis B. sphaericus Catalasa + Espora + (central) Oxidasa - Licuefacción de gelatina Hidrólisis de almidón Citrato Crecimiento NaCl 7% d Reducción Nitrato Crecimiento anaeróbico Fermentación Glucosa L-arabinosa D-xilosa D-manitol Ureasa -  Motilidad VP Indol d – Reacción débil