1 Presentación Seminario I (BIOL 6971)Iván Ferrer Rodríguez, Ph.D. Catedrático

2 Artículo a presentar Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Patrícia Abrantes1, George Dimopoulos2, Ana Rita Grosso3,4, Virgílio E. do Rosário1, Henrique Silveira1. PLoS ONE. July 2008 | Volume 3 | Issue 7 | e2587. 1 Centro de Malária e Outras Doenças Tropicais- LA/ UEI de Malária, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, Universidade Nova de Lisboa, Lisboa, Portugal. 2 W. Harry Feinstone Department of Molecular Microbiology and Immunology, Bloomberg School of Public Health, Johns Hopkins University, Baltimore, Maryland, United States of America. 3 Instituto de Medicina Molecular, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal. 4 University of Cambridge, Department of Oncology, Hutchison-MRC Research Centre, Cambridge, United Kingdom. Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. La Cloroquina Actúa Modulando o Modificando la Expresión de Genes en Anopheles gambiae

3 Puntos a discutir Preámbulo al artículo Introducción ObjetivosMétodos y Resultados Resumen Agradecimientos Preguntas

4 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Preámbulo Cloroquina es un medicamento que se usa para tratar la malaria: En uso desde los años 40 Efectiva contra todas las formas de la malaria Pocos efectos secundarios Bajo costo Resistencia en P. falciparum y P. vivax Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. La Cloroquina Actúa Modulando o Modificando la Expresión de Genes en Anopheles gambiae

5 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Preámbulo Malaria es una enfermedad causada por un protozoario parasítico, Plasmodium, que habita en los glóbulos rojos y que es transmitida por mosquitos. Cuatro especies causan malaria en humanos: P. falciparum P. vivax P. malariae P. ovale Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.

6 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Preámbulo Anopheles gambiae en el principal vector de la malaria en África. Expresión de los genes es el proceso mediante el cual éstos son usados para generar proteínas: Transcripción Traducción Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. La cloroquina que se le administra a los pacientes actúa modulando, modificando la expresión de los genes en el mosquito Anopheles gambiae, cuando el mosquito pica para alimentarse.

7 Introducción del artículoLa Cloroquina Actúa Modulando la Expresión de Genes en Anopheles gambiae. Introducción del artículo El desarrollo del Plasmodium en el mosquito incluye varios pasos críticos para que el parásito complete su ciclo y sea transmitido al huésped vertebrado. El mosquito tiene barreras físicas y químicas que contribuyen a que se reduzca el número de parásitos: Epitelio del intestino Respuesta inmune Hay factores externos que contribuyen a que aumente la infectividad del parásito: Ingestión de una concentración baja de anticuerpos Segunda alimentación Presencia de cloroquina en la sangre La Cloroquina Actúa Modulando o Modificando la Expresión de Genes en Anopheles gambiae Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.

8 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Introducción Ingestión de cloroquina al momento del mosquito alimentarse ha sido asociada a un aumento en la infectividad del parásito. El aumento en infectividad NO se asocia a un aumento en el número de gametocitos. En este estudio se usa Real Time PCR para para demostrar por primera vez que la cloroquina baja la expresión en el mosquito de: Proteasas de serina relacionadas al sistema inmune. Péptidos antimicrobiales.

9 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Introducción También estudian el impacto de la cloroquina en aumentar la expresión de dos genes de P. yoelii durante la trasmisión del parásito. La cloroquina ya no se usa para tratar infecciones con P. falciparum debido al fenómeno de resistencia a drogas en mucha regiones, sin embargo se usa para tratar las otras especies de Plasmodium. Los marcadores de resistencia a cloroquina desaparecen cuando se descontinúa la terapia, por lo tanto, podría re-introducirse la droga para terapias en el futuro.

10 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Objetivos Expandir el conocimiento actual del impacto que tiene la cloroquina en la expresión genética del mosquito haciendo un análisis de transcriptos a nivel del genoma. Entender el nivel de interferencia que tiene la cloroquina con los mecanismos de defensa del mosquito para establecer estrategias de tratamiento en el futuro.

11 Métodos Material biológico e InfeccionesChloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Material biológico e Infecciones Síntesis de cDNA y Preparación de sondas Plataformas de DNA (Microarray) e Hibridación Análisis de Datos de Microarray Real Time PCR Cuantitativo

12 Métodos Material Biológico e Infecciones:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Material Biológico e Infecciones: Anopheles gambiae s.s. (cepa SUAKOKO) fueron cultivados a 25°C y 75% humedad con ciclos de 12 hrs de luz y oscuridad y mantenidos en una solución de glucosa al 10%.

13 Métodos Material Biológico e Infecciones:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Material Biológico e Infecciones: A los 5-6 días, los mosquitos se alimentaron en: Ratones BALB/c infectados con P. berghei ANKA Clone 2.34 tratados con cloroquina 50 mg/kg 17 horas antes. Ratones BALB/c no infectados tratados con cloroquina 50 mg/kg 17 horas antes. Ratones BALB/c infectados con P. berghei sin tratar con cloroquina (control negativo). Ratones BALB/c no infectados sin tratar con cloroquina (control negativo).

14 Métodos y resultados Material Biológico e Infecciones:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos y resultados Material Biológico e Infecciones: Los mosquitos se alimentaron en ratones y se recolectaron 24 hrs después, cuando invaden los ooquinetos y generan una respuesta inmune robusta. Se cortaron los intestinos de 50 mosquitos y se procesaron. Se extrajo el RNA con TRIzon (Invitrogen), siguiendo las instrucciones del manufacturero, para realizar los estudios de expresión genética. Se cortaron los intestinos de 50 mosquitos y se procesaron para preparar RNA.

15 Métodos y resultados Síntesis de cDNA y preparación de sondas:Para sintetizar el cDNA y amplificar el mRNA antisentido se usó MessageAmp aRNA kit (Ambion). Sondas de cDNA se sintetizaron y marcaron con Cy3-dUTP Cy5-dUTP durante una reacción de transcriptasa reversa. Generaron las sondas para los experimentos de Microarray.

16 Métodos Preparación de sondas:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Preparación de sondas: Muestras experimentales fueron marcadas con Cy5: Ratones BALB/c infectados con P. berghei tratados con cloroquina. Ratones BALB/c no infectados tratados con cloroquina. Muestras control fueron marcadas con Cy3: Ratones BALB/c infectados con P. berghei sin tratar con cloroquina (control negativo). Ratones BALB/c no infectados sin tratar con cloroquina (control negativo).

17 Métodos Plataformas de DNA (Microarray):Microarray de cDNA de Anopheles conteniendo 20,000 EST de varios tejidos y varios estadios de desarrollo se usaron para los análisis.

18 Métodos Hibridación de sondas:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Hibridación de sondas: Las sondas fueron suspendidas en amortiguador de hibridación y se pre-hibridizó a 42°C por 2 hrs. Se hibridizó a 42°C toda la noche en una cámara de hibrización. Se lavó dos veces en 2X SSC/SDS por 15 minutos y se secó. Todos los experimentos se realizaron en duplicado.

19 Métodos Análisis de datos del Microarray:Las laminillas fueron escaneadas usando un TECAN LS 300 Scanner (Tecan U.S., Inc., Durham, NC). Las imágenes se analizaron con Chipskipper software version 1.1. accessed October 2004. Las intensidades de las señales se estimaron, se eliminaron puntos con calidad pobre y se removieron la señales de trasfondo.

20 Métodos Análisis de datos del Microarray:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Análisis de datos del Microarray: Sólo los transcriptos que generaron resultados consistentes en los duplicados se consideraron. Se identificaron los genes con cambios en expresión mayor a 1.5. Se identificaron los ESTs y se les asignó una función usando: AnoEST database versio5 Mosquito Genome Database ENSEMBL v.36: Dec 2005 (http://www.ensembl.org/Anopheles_gambiae/index.html)

21 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Resultados El efecto de la cloroquina en la abundancia de los transcriptos se estudió comparando el nivel de expresión de lo siguiente: Mosquitos que se alimentaron en sangre conteniendo cloroquina y mosquitos alimentados en sangre normal (Chl 50). Mosquitos que se alimentaron en sangre infectada con P. berghei conteniendo cloroquina y mosquitos alimentados en sangre infectada con P. berghei sin droga (Chl 50Pb). El análisis de los Microarrays reveló que ~4.5% de los ESTs de A. gambiae estaban aumentados o disminuidos al menos 1.5-veces. The effect of chloroquine on A. gambiae midgut transcript abundance was assessed by comparing the gene expression levels of i) mosquitoes fed on a blood meal that contained chloroquine and those fed on a normal blood meal (Chl 50), and ii) mosquitoes fed a P. berghei-infected blood meal that contained chloroquine and those fed a normal P. berghei-infected blood meal (Chl 50Pb). The presence of P. berghei parasites committed to sporogonic development was assumed to be the same as in the previous work [6]. The analysis of the microarray data revealed that approximately 4.5% of the A. gambiae ESTs were up or down-regulated by at least 1.5-fold. The M-value and the average log-intensity (A) for the final datasets are shown in Figure 1 by means of an MA-plot [23]. Analyses revealed that 126 genes were regulated upon exposure to chloroquine in the absence of infection (Chl 50), with 94 genes being down-regulated and 32 genes up-regulated. P. bergheiinfected mosquitoes (Chl 50Pb) showed modulation of expression of 206 genes upon chloroquine exposure: 114 genes were downregulated and 92 were up-regulated. Complete lists of affected genes are available as supplementary material (Tables S2 and S3). The regulated genes represented a variety of functional classes, oxidative stress, digestion, immunity, apoptosis, the extracellular matrix, cytoskeleton, adhesion, the protein synthetic machinery, transcriptional regulation, signal transduction, metabolism and transport, as well as a number of genes of unknown function (Fig. 2, Tables 1 and S4).

22 Análisis de MicroarraysChloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Análisis de Microarrays Gráfica comprando mosquitos que se alimentaron en sangre conteniendo cloroquina y mosquitos alimentados en sangre normal (Chl 50). Encontraron 126 genes que se regularon con la exposición a cloroquina, 94 bajaron su expresión y 32 aumentaron su expresión, en comparación con el control. Valor promedio The effect of chloroquine on A. gambiae midgut transcript abundance was assessed by comparing the gene expression levels of i) mosquitoes fed on a blood meal that contained chloroquine and those fed on a normal blood meal (Chl 50), and ii) mosquitoes fed a P. berghei-infected blood meal that contained chloroquine and those fed a normal P. berghei-infected blood meal (Chl 50Pb). The presence of P. berghei parasites committed to sporogonic development was assumed to be the same as in the previous work [6]. The analysis of the microarray data revealed that approximately 4.5% of the A. gambiae ESTs were up or down-regulated by at least 1.5-fold. The M-value and the average log-intensity (A) for the final datasets are shown in Figure 1 by means of an MA-plot [23]. Analyses revealed that 126 genes were regulated upon exposure to chloroquine in the absence of infection (Chl 50), with 94 genes being down-regulated and 32 genes up-regulated. P. bergheiinfected mosquitoes (Chl 50Pb) showed modulation of expression of 206 genes upon chloroquine exposure: 114 genes were downregulated and 92 were up-regulated. Complete lists of affected genes are available as supplementary material (Tables S2 and S3). The regulated genes represented a variety of functional classes, oxidative stress, digestion, immunity, apoptosis, the extracellular matrix, cytoskeleton, adhesion, the protein synthetic machinery, transcriptional regulation, signal transduction, metabolism and transport, as well as a number of genes of unknown function (Fig. 2, Tables 1 and S4). Intensidad

23 Análisis de MicroarraysChloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Análisis de Microarrays Gráfica comprando mosquitos que se alimentaron en sangre infectada con P. berghei conteniendo cloroquina y mosquitos alimentados en sangre infectada con P. berghei sin droga (Chl 50Pb). Encontraron 206 genes se regularon con la exposición a cloroquina, 114 bajaron su expresión y 92 aumentaron su expresión, en comparación con el control. Valor promedio The effect of chloroquine on A. gambiae midgut transcript abundance was assessed by comparing the gene expression levels of i) mosquitoes fed on a blood meal that contained chloroquine and those fed on a normal blood meal (Chl 50), and ii) mosquitoes fed a P. berghei-infected blood meal that contained chloroquine and those fed a normal P. berghei-infected blood meal (Chl 50Pb). The presence of P. berghei parasites committed to sporogonic development was assumed to be the same as in the previous work [6]. The analysis of the microarray data revealed that approximately 4.5% of the A. gambiae ESTs were up or down-regulated by at least 1.5-fold. The M-value and the average log-intensity (A) for the final datasets are shown in Figure 1 by means of an MA-plot [23]. Analyses revealed that 126 genes were regulated upon exposure to chloroquine in the absence of infection (Chl 50), with 94 genes being down-regulated and 32 genes up-regulated. P. bergheiinfected mosquitoes (Chl 50Pb) showed modulation of expression of 206 genes upon chloroquine exposure: 114 genes were downregulated and 92 were up-regulated. Complete lists of affected genes are available as supplementary material (Tables S2 and S3). The regulated genes represented a variety of functional classes, oxidative stress, digestion, immunity, apoptosis, the extracellular matrix, cytoskeleton, adhesion, the protein synthetic machinery, transcriptional regulation, signal transduction, metabolism and transport, as well as a number of genes of unknown function (Fig. 2, Tables 1 and S4). Intensidad

24 Gráfica de proporciones relativas de los genes reguladosChloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Gráfica de proporciones relativas de los genes regulados Los genes regulados representan diferentes funciones: Estrés oxidativo Inmunidad Apoptosis Digestión Adhesión Citoesqueleto Matriz extracelular Maquinaria de síntesis de proteínas Regulación de transcripción Señales de traducción Metabolismo Transporte Funciones desconocidas The effect of chloroquine on A. gambiae midgut transcript abundance was assessed by comparing the gene expression levels of i) mosquitoes fed on a blood meal that contained chloroquine and those fed on a normal blood meal (Chl 50), and ii) mosquitoes fed a P. berghei-infected blood meal that contained chloroquine and those fed a normal P. berghei-infected blood meal (Chl 50Pb). The presence of P. berghei parasites committed to sporogonic development was assumed to be the same as in the previous work [6]. The analysis of the microarray data revealed that approximately 4.5% of the A. gambiae ESTs were up or down-regulated by at least 1.5-fold. The M-value and the average log-intensity (A) for the final datasets are shown in Figure 1 by means of an MA-plot [23]. Analyses revealed that 126 genes were regulated upon exposure to chloroquine in the absence of infection (Chl 50), with 94 genes being down-regulated and 32 genes up-regulated. P. bergheiinfected mosquitoes (Chl 50Pb) showed modulation of expression of 206 genes upon chloroquine exposure: 114 genes were downregulated and 92 were up-regulated. Complete lists of affected genes are available as supplementary material (Tables S2 and S3). The regulated genes represented a variety of functional classes, oxidative stress, digestion, immunity, apoptosis, the extracellular matrix, cytoskeleton, adhesion, the protein synthetic machinery, transcriptional regulation, signal transduction, metabolism and transport, as well as a number of genes of unknown function (Fig. 2, Tables 1 and S4).

25 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Análisis de Expresión A. gambiae NO infectados tratados con cloroquina: Se enfocaron en los genes involucrados en la respuesta inmune: Estrés oxidativo/detoxificación: Observaron 11 genes con disminución en expresión, incluyendo 4 enzimas asociadas a fosforilación oxidativa. Observaron 2 genes con aumento en expresión. Respuesta inmune y apoptosis: Observaron 6 genes que se expresaron diferencialmente. .

26 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Resultados

27 Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression.Resultados

28 Análisis de Expresión A. gambiae infectados tratados con cloroquina:Los principales grupos de genes regulados fueron: Estrés oxidativo Inmunidad Maquinaria de síntesis de proteínas Transporte Otros con función desconocida Estrés oxidativo/detoxificación: Observaron 7 genes con disminución en expresión. Observaron 5 genes con aumento en expresión. Sugiere que la droga afecta el sistema de detoxificación del mosquito. .

29 Resultados

30 Análisis de Expresión A. gambiae infectados tratados con cloroquina:Respuesta inmune: Observaron 11 genes que se expresaron diferencialmente. Apoya la data previa que sugiere que la cloroquina impacta la respuesta inmune del mosquito. La mayoría de estos genes se han asociados previamente a una respuesta inmune fuerte del mosquito en contra de la invasión del intestino por parte del parásito. .

31 Resultados

32 Resultados La evidencia obtenida sugiere que la cloroquina disminuye la apoptosis de las células del mosquito durante la invasión del intestino por parte del parasito 24 horas después de la ingestión de la sangre.

33 Resultados Se ha propuesto que la apoptosis es un mecanismo para reducir la infección, ya que las células dañadas por el parásito son eliminadas y por ende se elimina el parásito. Por lo tanto, si no hay apoptosis, no se elimina el parásito y esto resulta en un aumento en la infectividad como consecuencia del uso de la droga.

34 Resultados Los genes de los grupos del adhesión y citoesqueleto se regularon diferencialmente en los mosquitos infectados tratados con cloroquina, pero no en la ausencia de infección. Se puede deber a la reorganización esqueletal durante la infección, elemento que es clave para la invasión del intestino.

35 Resultados

36 Métodos Real Time PCR Cuantitativo:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Real Time PCR Cuantitativo: Para validar los resultados del Microarray, se analizó el mismo RNA mediante esta técnica. El RNA se trató con DNAse I y se transcribió al reverso usando M-MLV-RT (Invitrogen) en la presencia de un primer Oligo(dt)15 (Roche). Se usaron 5 genes para validar los datos de expresión, incluyendo: Dos genes del sistema inmune. Dos genes relacionados a estrés oxidativo. Un gen relacionados a la síntesis de proteínas. For validation of the microarray results, the same total RNA as that used in the microarray experiments was analyzed. The

37 Métodos Real Time PCR Cuantitativo:Se diseñaron primers usando Primer Express software (Applied Biosystems). El análisis cuantitativo de la expresión se hizo mediante Real-Time PCR qPCR core kit de SYBR Green (Eurogentec) usando un iCycler iQTM (Bio-Rad). Reacción de RT-PCR: 1X reaction buffer 200 mM dNTP’s 0.3 mM primer 0.025 U/ml Hot GoldStar enzyme 1:66000 SYBR Green Volumen final of 20 ml

38 Métodos Real Time PCR Cuantitativo:Chloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Métodos Real Time PCR Cuantitativo: Un micro litro de cDNA se usó como templado. El ciclo de amplificación: Denaturación inicial a 95°C por 10 minutes. 40 ciclos de 95°C por 30 segundos, annealing por 1 minuto. Los niveles de expresión fueron normalizados al nivel de expresión del gene Ribosomal protein S7 usando una curva de cuantificación estándar.

39 Real Time PCR CuantitativoChloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Real Time PCR Cuantitativo Se estudiaron 5 genes para confirmar cuán robusta es la data del Microarray: Cytochrome c oxidase Thioredoxin Elongation factor 1 alpha C-type lectin CTL4 Serpin sp121F Otro gen que confirmó los resultados del Microarray fue gambicin, cuya expresión disminuye en ambos ensayos. Microarrays validation with Quantitative Real-Ttime PCR analysis Five genes were subjected to QRT-PCR analysis to confirm the robustness of the microarray data (Fig. S1). These genes were selected based on their expression patterns and functions. The genes for cytochrome c oxidase (Ensembl, ENSANGG ), thioredoxin (TRX1) and elongation factor 1 alpha (ENSANGG ) were confirmed as being down-regulated in Chl 50 mosquitoes, while the genes for serpin sp121F and C-type lectin CTL4 were confirmed as being down-regulated in Chl 50Pb mosquitoes. Regulation of the elongation factor 1 alpha gene in Chl 50Pb mosquitoes was the only exception observed, since the decrease of expression observed by QRT-PCR results contrasted with the weak up-regulation observed in the microarray analysis. This discrepancy may be due to alternative spliced transcripts or cross-hybridization with similar genes. Although not shown in figure S1, another gene confirming microarray results by QRT-PCR was the antimicrobial peptide gambicin. As reported previously by our group [6], gambicin is down-regulated in infected and non-infected mosquitoes fed on a blood meal containing chloroquine. Validation of DNA Microarray results using Quantitative Real-Time PCR analysis. Effects of chloroquine on the transcript abundances of five genes, as assessed by microarray analysis (in black) and QRT-PCR (grey): cytochrome c oxidase (ENSANGG ), thioredoxin: (TRX1), and elongation factor 1-alpha (ENSANGG ) in non-infected treated mosquitoes (Chl 50); and serpin (spi21F), C-lectin (CTL4), and elongation factor 1-alpha in P. berghei-infected treated mosquitoes (Chl 50Pb). Data were normalized using the A. gambiae ribosomal protein S7 gene expression levels. The Y-axis values represent the mean fold-changes obtained for three independent experiments comparing the chloroquine-treated expression levels to the untreated expression levels.

40 Real Time PCR CuantitativoChloroquine Mediated Modulation of Anopheles gambiae Gene Expression. Real Time PCR Cuantitativo En cuatro de los cinco genes se confirmó la disminución en la expresión observada en el Microarray. En un gene hubo discrepancias en lo observado por los dos métodos, puede ser por: Hibridación cruzada con otros genes similares. Transcriptos con splicing alternativos. Microarrays validation with Quantitative Real-Ttime PCR Analysis The genes for cytochrome c oxidase (Ensembl, ENSANGG ), thioredoxin (TRX1) and elongation factor 1 alpha (ENSANGG ) were confirmed as being down-regulated in Chl 50 mosquitoes, while the genes for serpin sp121F and C-type lectin CTL4 were confirmed as being down-regulated in Chl 50Pb mosquitoes. Regulation of the elongation factor 1 alpha gene in Chl 50Pb mosquitoes was the only exception observed, since the decrease of expression observed by QRT-PCR results contrasted with the weak up-regulation observed in the microarray analysis. This discrepancy may be due to alternative spliced transcripts or cross-hybridization with similar genes. Validation of DNA Microarray results using Quantitative Real-Time PCR analysis. Effects of chloroquine on the transcript abundances of five genes, as assessed by microarray analysis (in black) and QRT-PCR (grey): cytochrome c oxidase (ENSANGG ), thioredoxin: (TRX1), and elongation factor 1-alpha (ENSANGG ) in non-infected treated mosquitoes (Chl 50); and serpin (spi21F), C-lectin (CTL4), and elongation factor 1-alpha in P. berghei-infected treated mosquitoes (Chl 50Pb). Data were normalized using the A. gambiae ribosomal protein S7 gene expression levels. The Y-axis values represent the mean fold-changes obtained for three independent experiments comparing the chloroquine-treated expression levels to the untreated expression levels.

41 Resumen La data demuestra que la cloroquina impacta significativamente la abundancia de transcriptos de genes del mosquito implicados en la defensa en contra del parásito y baja la expresión de genes involucrados en: Inmunidad - Apoptosis - Estrés oxidativo Citoesqueleto - Adhesión Esto puede contribuir a la supresión del sistema de defensa del Anopheles y por ende llevar a un aumento de la infectividad del parásito, aunque todavía no se conoce bien el mecanismo mediante el cual esto ocurre.

42 Resumen Los investigadores proponen que la cloroquina actúa modulando la respuesta inmune y reduciendo la apoptosis y por lo tanto permitiendo una invasión más efectiva por parte del parásito y consecuentemente mayor infectividad. Estos efectos son evidentes en el modelo murino, sin embargo, es incierto si los resultados puedes ser extrapolados a la malaria humana.

43 Resumen Es posible que el efecto de la cloroquina en la respuesta inmune del mosquito haya contribuido a la dispersión rápida de la resistencia observada en los pasados 40 años. Dado que la cloroquina todavía se una para tratar infecciones con P. vivax, P. malariae, P. ovale y P. knowlesi y que se ha propuesto reintroducir la cloroquina en una terapia combinada para tratar P. falciparum, es esencial entender mejor el impacto de los antimalariales en el vector.

44 Agradecimiento Gracias por su atención.

45 Preguntas