1 Programa de Pós-Graduação em ZootecniaPARÂMETROS GENÉTICOS PARA PESO E COMPRIMENTO CORPORAL EM TAMBAQUI (Colossoma macropomum) Bom dia! Nome Orientador Projeto com os dados da Embrapa Pesca e Aquicultura (Coorientadora) Mestranda: Gisele Ferreira da Silva Orientador: Prof. Dr. Rodrigo de Almeida Teixeira Coorientadora: Dra. Luciana Shiotsuki

2 TEMAS ABORDADOS INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA OBJETIVO(S)MATERIAL E MÉTODOS CRONOGRAMA Ler os pontos!

3 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVAPISCICULTURA: PISCICULTURA = O Brasil apresenta o maior estoque de água doce do planeta, cerca de 8 mil km³, além do clima favorável para o cultivo de peixes. Isto explica os resultados das estatísticas realizadas nos anos de 2013 e 2014, pelo Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE), que apresentou a piscicultura, como o setor da aquicultura, que mais cresce. Com um crescimento anual médio de 8% entre os anos de 2004 a 2014. NORTE  t SUL  t CENTRO-OESTE  t NORDESTE  t SUDESTE  t BRASIL  t, produzidas em 2014 Norte t Sul t Centro-Oeste t Nordeste t Sudeste t BRASIL t IBGE, 2014.

4 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVAÉ a principal espécie nativa cultivada no país, especialmente na região Norte, sendo que sua produção chegou a cerca toneladas em 2014, correspondendo a aproximadamente 30% do total. Tilápia  sul PR Tambaqui  norte RO Tambacu e Tambatinga  centro oeste MT Carpa  sul RS Pintado, Cachara, Cachapira, Pintachara e Surubim  centro oeste MT Figura 1. Espécies de peixes produzidas no Brasil nos anos de 2013 e 2014, em toneladas. Fonte: Adaptado de IBGE (2013; 2014).

5 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVAMesmo o Brasil possuindo tanto crescimento e condições para se tornar um mercado potente na piscicultura, a utilização desses recursos para a produção se encontra inferior à sua capacidade. Demanda da população por alimentos nutritivos e de qualidade; Aumento populacional. Em contrapartida, há uma maior demanda da população por alimentos nutritivos e de qualidade e a população, considerada de classe média, está aumentando, o que deverá resultar em quase a duplicação da demanda por alimentos, é uma grande tarefa aumentar a produção de alimentos para atender a demanda futura. Melhoramento Genético na Piscicultura* DIOUF (2009); GJEDREM et al. (2012); SIDONIO et al. (2012); SEBRAE (2015).

6 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVAProgramas de Melhoramento Genético na Piscicultura para diferentes espécies de peixes e diversos países ... CRESCIMENTO Ganho de Peso; Medidas Corporais  PESO E COMPRIMENTO CORPORAL. OBJETIVO E CRITÉRIOS DE SELEÇÃO! Objetivo de Seleção (?) Critérios de Seleção (?) EKNATH et al., 1998; GUPTA & ACOSTA, 2004; BAKOS et al., 2006; THODESEN & GJEDREM, 2006; OLIVEIRA et al., 2010; RESENDE et al., 2010; GJEDREM, 2012; OLIVEIRA et al., 2012.

7 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVATambaqui (Colossoma macropomum) O C. macropomum é uma espécie nativa das bacias dos rios Amazonas e Orinoco, na Venezuela, sendo considerado o segundo maior peixe escamado do Brasil (após o pirarucu – Arapaima gigas). Podendo atingir 1 metro de comprimento e um total de 30 kg de peso corporal. O C. macropomum pertence à classe Osteichthyes, ordem Characiformes e família Serrasalmidae. Fonte: https://www.cpt.com.br/artigos/peixes-de-agua-doce-do-brasil-tambaqui-colossoma-macropomum Figura 2. Exemplar de tambaqui.

8 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA CARACTERÍSTICAS PRINCIPAISBom desenvolvimento zootécnico em atividade de cultivo Fácil reprodução em cativeiro Fácil adaptação às diferentes condições de cultivo Fácil aceitação de alimento artificial Rusticidade Alto nível de produtividade Boa conversão alimentar Rápido crescimento Elevado valor da carne Carne firme e saborosa A produção de peixes nativos vem se intensificando consideravelmente no cenário da piscicultura nacional, o C. macropomum faz parte deste crescimento produtivo por ser uma espécie (ler as características). GOULDING & CARVALHO, 1982; SILVA et al., 1986; CHAGAS & VAL, 2003; SANTOS et al., 2007; MENDONÇA et al., 2009; PAULA, 2009; DAIRIKI & SILVA, 2011.

9 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVAPorque não há, ainda, um programa de melhoramento genético do tambaqui no Brasil? Informações, registro ... ; Falta de avaliação genética em plantéis comerciais. Apesar desta intensificação na produção do C. macropomum no Brasil, a escassez de informações relacionadas a programas de registro e avaliação zootécnica em plantéis comerciais impede a elaboração e progresso de programas de melhoramento genético. Como resultado, não há um banco de informações que possibilite definir quais são as diferenças entre os distintos locais de cultivo, permitindo assim, a identificação do desempenho produtivo dos plantéis ou se existe diferenças significativas das características de interesse comercial. Banco de dados / informações RESENDE et al., 2010; VARELA et al., 2015.

10 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA HÍBRIDOS INTERESPECÍFICOSOBJETIVO  produzir progênies com desempenho médio superior à média dos pais, sendo que as respostas da hibridação são mais visíveis quanto mais distintos forem os grupos genéticos utilizados. O núcleo de seleção dos Tambaquis era composto inicialmente por 64 famílias de animais provenientes de quatro núcleos satélites (Mato Grosso, Rondônia, Tocantins e Amazonas). A estação reprodutiva de terminou com a organização de 45 famílias, sendo possível estimar os parâmetros genéticos de 198 animais (cerca de 10 famílias), para as características de interesse econômico. A seleção foi realizada dentro da família utilizando os animais de maiores valores genéticos. Na estação reprodutiva de foram realizados acasalamentos de animais selecionados a partir de seus valores genéticos aditivos para a característica ganho de peso diário, de maneira que já existiam alevinos de Tambaquis filhos de animais geneticamente avaliados e superiores para taxa de crescimento. MÉTODOS DE SELEÇÃO  Individual, Entre Famílias, Dentro de Família, Combinada, Pedigre, Progênie, Índice de Seleção. Década 1980 Centro de Pesquisa de Peixes Continentais (CEPTA) e no Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista (CAUNESP)  “Tambacu”. Departamento de Obras Contra a Seca  “Tambatinga”. LOPEZ-FANJUL & TOTO, 1990 apud RESENDE et al., 2010; HILSDORF et al

11 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA HÍBRIDOS INTERESPECÍFICOS“TAMBACU” X Tambaqui X Pacu Tambaqui O núcleo de seleção dos Tambaquis era composto inicialmente por 64 famílias de animais provenientes de quatro núcleos satélites (Mato Grosso, Rondônia, Tocantins e Amazonas). A estação reprodutiva de terminou com a organização de 45 famílias, sendo possível estimar os parâmetros genéticos de 198 animais (cerca de 10 famílias), para as características de interesse econômico. A seleção foi realizada dentro da família utilizando os animais de maiores valores genéticos. Na estação reprodutiva de foram realizados acasalamentos de animais selecionados a partir de seus valores genéticos aditivos para a característica ganho de peso diário, de maneira que já existiam alevinos de Tambaquis filhos de animais geneticamente avaliados e superiores para taxa de crescimento. MÉTODOS DE SELEÇÃO  Individual, Entre Famílias, Dentro de Família, Combinada, Pedigre, Progênie, Índice de Seleção. Pacu: Resistência a baixas temperaturas e rusticidade. Tambaqui: Maiores taxas de crescimento e sobrevivência. “Tambacu” Pacu Figura 3. Formação do híbrido “tambacu”. SENHORINI et al., 1988; MORO et al., 2013; ALVES et al., 2014.

12 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA HÍBRIDOS INTERESPECÍFICOS“TAMBATINGA” X Pirapitinga Tambaqui Tambaqui X O núcleo de seleção dos Tambaquis era composto inicialmente por 64 famílias de animais provenientes de quatro núcleos satélites (Mato Grosso, Rondônia, Tocantins e Amazonas). A estação reprodutiva de terminou com a organização de 45 famílias, sendo possível estimar os parâmetros genéticos de 198 animais (cerca de 10 famílias), para as características de interesse econômico. A seleção foi realizada dentro da família utilizando os animais de maiores valores genéticos. Na estação reprodutiva de foram realizados acasalamentos de animais selecionados a partir de seus valores genéticos aditivos para a característica ganho de peso diário, de maneira que já existiam alevinos de Tambaquis filhos de animais geneticamente avaliados e superiores para taxa de crescimento. MÉTODOS DE SELEÇÃO  Individual, Entre Famílias, Dentro de Família, Combinada, Pedigre, Progênie, Índice de Seleção. Pirapitinga: Maior deposição muscular no lombo, podendo apresentar dois ciclos produtivos ao ano, maior crescimento. Tambaqui: Rápido crescimento e maior eficiência na filtração de plâncton. “Tambatinga” Pirapitinga Figura 4. Formação do híbrido “tambatinga”. SILVA-ACUÑA & GUEVARA, 2002; MORO et al., 2013; ALVES et al., 2014.

13 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA HÍBRIDOS INTERESPECÍFICOSTabela 1. Híbridos interespecíficos produzidos no Brasil a partir de peixes autóctones de água doce HÍBRIDO¹ PARENTAL FÊMEA X PARENTAL MACHO Tambacu Tambaqui (Colossoma macropomum) Pacu (Piaractus mesopotamicus) Paqui Tambatinga Pirapitinga (Piaractus brachypomus) Patinga Pacu (Piaractus mesopotamicus) Pirapitinga (Piaractus brachypomus) Cachapinta ou Ponto e Vírgula Cachara (Pseudoplatystoma reticulatum) Pintado (Pseudoplatystoma corruscans) Pintachara ou Cachapira Pirarara (Phractocephalus hemiliopterus) Jundiara ou Pintado-da-Amazônia Cachara (Pseudoplatystoma punctiffer) Jundiá da Amazônia (Leiarius marmoratus) Pintadiá O núcleo de seleção dos Tambaquis era composto inicialmente por 64 famílias de animais provenientes de quatro núcleos satélites (Mato Grosso, Rondônia, Tocantins e Amazonas). A estação reprodutiva de terminou com a organização de 45 famílias, sendo possível estimar os parâmetros genéticos de 198 animais (cerca de 10 famílias), para as características de interesse econômico. A seleção foi realizada dentro da família utilizando os animais de maiores valores genéticos. Na estação reprodutiva de foram realizados acasalamentos de animais selecionados a partir de seus valores genéticos aditivos para a característica ganho de peso diário, de maneira que já existiam alevinos de Tambaquis filhos de animais geneticamente avaliados e superiores para taxa de crescimento. MÉTODOS DE SELEÇÃO  Individual, Entre Famílias, Dentro de Família, Combinada, Pedigre, Progênie, Índice de Seleção. ¹A nomenclatura do híbrido é a junção do nome popular das duas espécies parentais, sendo mais comum apresentar a fêmea antes do macho.

14 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA PROGRAMAS DE MELHORAMENTO DE PEIXES NATIVOSAquabrasil – Bases Tecnológicas para o Desenvolvimento Sustentável da Aquicultura no Brasil; Criado em 2008; Objetivo geral  Promover um salto tecnológico na aquicultura brasileira que seja capaz de diminuir a deficiência da produção atual e dentro de um aspecto de cadeia produtiva que abranja do produtor ao consumidor. O projeto “Bases tecnológicas para o desenvolvimento sustentável da aquicultura no Brasil – Aquabrasil”, criado em 2008, com o intuito de promover um salto tecnológico da aquicultura brasileira que seja capaz de diminuir a deficiência de produção atual e dentro de um aspecto de cadeia produtiva que abranja do produtor ao consumidor. O projeto organizou dois programas de melhoramento genético de espécies nativas: um para o Tambaqui (Colossoma macropomum) e outro para o cachara (Pseudoplatystoma reticulatum), nas regiões Norte e Centro-Oeste do país. Entre os objetivos destes programas, destaca-se a construção e fortalecimento de um programa nacional de melhoramento genético de espécies aquáticas e o planejamento de procedimentos de disseminação e uso de material genético superior, em condições de cultivo, submetidas às boas práticas de manejo, considerando a nutrição, sanidade, biossegurança, preservação ambiental e desenvolvimento de produtos de alto valor agregado. A seleção dos animais ocorreu em função dos valores genéticos aditivos para a taxa de crescimento, medida a partir do ganho médio diário e peso à despesca. Dois programas de MG  Tambaqui e Cachara (Pseudoplatystoma reticulatum); Objetivo específico  Construção e fortalecimento de um programa nacional de MG de espécies aquáticas e o planejamento de procedimentos de disseminação e uso de material genético superior; Objetivos de seleção  taxa de crescimento e peso à despesca. RESENDE (2009); RESENDE et al. (2010); OLIVEIRA et al. (2010); OLIVEIRA et al. (2012); ROCHA et al. (2013).

15 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA PROGRAMAS DE MELHORAMENTO DE PEIXES NATIVOSNúcleo de seleção dos Tambaquis  64 famílias (MT, RO, TO e AM); Estação reprodutiva: terminou com 45 famílias (10 famílias com estimação de parâmetros genéticos de 198 animais); foram realizados acasalamentos de animais selecionados a partir de seus valores genéticos aditivos para característica ganho de peso diário. Seleção dentro da família (?). O núcleo de seleção dos Tambaquis era composto inicialmente por 64 famílias de animais provenientes de quatro núcleos satélites (Mato Grosso, Rondônia, Tocantins e Amazonas). A estação reprodutiva de terminou com a organização de 45 famílias, sendo possível estimar os parâmetros genéticos de 198 animais (cerca de 10 famílias), para as características de interesse econômico. A seleção foi realizada dentro da família utilizando os animais de maiores valores genéticos. Na estação reprodutiva de foram realizados acasalamentos de animais selecionados a partir de seus valores genéticos aditivos para a característica ganho de peso diário, de maneira que já existiam alevinos de Tambaquis filhos de animais geneticamente avaliados e superiores para taxa de crescimento. MÉTODOS DE SELEÇÃO  Individual, Entre Famílias, Dentro de Família, Combinada, Pedigre, Progênie, Índice de Seleção. RESENDE et al. (2010); OLIVEIRA et al. (2012); ALBUQUERQUE (2014).

16 ESTUDOS COM DIFERENTES ESPÉCIESFigura 5. Truta Arco-Íris (Oncorhynchus mykiss) Figura 6. Salmão do Atlântico (Salmo salar) Figura 7. Carpa Comum (Cyprinus carpio) N = 220 animais Idade = 18 meses h² (PC) = 0,17 h² (CC) = 0,23 rg = 0,98 Autores: Gunnes et al., 1981 Valores de herdabilidade para peso corporal e comprimento corporal, bem como suas correlações genéticas, conforme a espécie, idade, número de animais utilizados e autores são apresentados na Tabela 1. As espécies exóticas, como truta arco-íris, salmão e carpa possuem mais estudos abordando os seus parâmetros genéticos no mundo, sendo que as herdabilidades (h²) para peso corporal (PC) e comprimento corporal (CC) variam de baixas a moderadas magnitudes, e as correlações genéticas entre essas características são altas, positivas e favoráveis. No Brasil, os estudos sobre parâmetros genéticos são realizados com a tilápia do Nilo, uma espécie exótica, mas de ampla produção e importância econômica (Figura 1). Na Tabela 1 é possível observar que as h² para PC e CC possuem uma grande variação (baixa a alta magnitude). Observa-se que, até o momento, um único estudo foi encontrado na literatura com 198 animais meio-irmãos maternos da espécie tambaqui (C. macropomum), onde foram coletados dados biométricos de PC e CC aos 12 e 24 meses de idade para estimação de suas herdabilidades. As herdabilidades estimadas para PC foram de 0,44 e 0,42 aos 12 e 24 meses, respectivamente e para CC foram de 0,31 aos 12 meses e de 0,46 aos 24 meses de idade, consideras de alta magnitude, com exceção do CC aos 12 meses (média magnitude), sendo passíveis à seleção. N = 30 M e 90 F Idade = Despesca h² (PC) = 0,34 h² (CC) = - rg = Autores: Rye & Gjerde, 1996 N = animais Idade = 24 meses h² (PC) = 0,17 h² (CC) = - rg = Autores: Dong et al., 2015 h² e rg (?)

17 ESTUDOS COM DIFERENTES ESPÉCIESFigura 8. Tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) Figura 9. Tambaqui (Colossoma macropomum) Valores de herdabilidade para peso corporal e comprimento corporal, bem como suas correlações genéticas, conforme a espécie, idade, número de animais utilizados e autores são apresentados na Tabela 1. As espécies exóticas, como truta arco-íris, salmão e carpa possuem mais estudos abordando os seus parâmetros genéticos no mundo, sendo que as herdabilidades (h²) para peso corporal (PC) e comprimento corporal (CC) variam de baixas a moderadas magnitudes, e as correlações genéticas entre essas características são altas, positivas e favoráveis. No Brasil, os estudos sobre parâmetros genéticos são realizados com a tilápia do Nilo, uma espécie exótica, mas de ampla produção e importância econômica (Figura 1). Na Tabela 1 é possível observar que as h² para PC e CC possuem uma grande variação (baixa a alta magnitude). Observa-se que, até o momento, um único estudo foi encontrado na literatura com 198 animais meio-irmãos maternos da espécie tambaqui (C. macropomum), onde foram coletados dados biométricos de PC e CC aos 12 e 24 meses de idade para estimação de suas herdabilidades. As herdabilidades estimadas para PC foram de 0,44 e 0,42 aos 12 e 24 meses, respectivamente e para CC foram de 0,31 aos 12 meses e de 0,46 aos 24 meses de idade, consideras de alta magnitude, com exceção do CC aos 12 meses (média magnitude), sendo passíveis à seleção. N = 3.918 animais Idade = - h² (PC) = 0,15 h² (CC) = 0,26 rg = 0,91 Autores: Oliveira et al., 2014 N = 198 animais Idade = 12 e 24 meses h² (PC) = 0,44 e 0,42 h² (CC) = 0,31 e 0,46 rg = - Autores: Mello et al., 2016

18 OBJETIVO(S) OBJETIVO GERAL:Estimar os parâmetros genéticos das características de crescimento em peixes da espécie tambaqui (Colossoma macropomum). OBJETIVOS ESPECÍFICOS: Estimar os valores de herdabilidade das características peso e comprimento corporal em tambaqui (Colossoma macropomum), entre 4 e 12 meses de idade. Estimar os valores de correlação genética entre as características peso e comprimento corporal em tambaqui (Colossoma macropomum), entre 4 e 12 meses de idade. LER!

19 MATERIAL E MÉTODOS DADOSEmbrapa Pesca e Aquicultura  Aquicultura Fazenda São Paulo (Brejinho de Nazaré – TO): Identificados com chip aos 4 meses de idade; Viveiros escavados: Com sistemas de abastecimento e drenagem de água. Biometrias realizadas a cada 3 meses  PESO E COMPRIMENTO CORPORAL. ~ 400 peixes

20 ANÁLISES ESTATÍSTICASMATERIAL E MÉTODOS ANÁLISES ESTATÍSTICAS Análises de consistência e edição preliminares do banco de dados: Programa estatístico SAS/STAT 9.4 (SAS Institute, 2013). Parâmetros genéticos: Software MTDFREML (BOLDMAN et al., 1995).

21 ANÁLISES ESTATÍSTICASMATERIAL E MÉTODOS ANÁLISES ESTATÍSTICAS 𝛾=𝑋β+𝑍𝑎+𝑒 Onde*: 𝛾=𝑣𝑒𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑎 𝑣𝑎𝑟𝑖á𝑣𝑒𝑖𝑠 𝑑𝑒𝑝𝑒𝑛𝑑𝑒𝑛𝑡𝑒𝑠; 𝛽=𝑣𝑒𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑓𝑒𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑓𝑖𝑥𝑜𝑠; 𝛼=𝑣𝑒𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑓𝑒𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑔𝑒𝑛é𝑡𝑖𝑐𝑜𝑠 𝑎𝑑𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠 𝑑𝑖𝑟𝑒𝑡𝑜𝑠; 𝑒=𝑣𝑒𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑟𝑟𝑜𝑠 𝑎𝑙𝑒𝑎𝑡ó𝑟𝑖𝑜𝑠 𝑟𝑒𝑠𝑖𝑑𝑢𝑎𝑖𝑠; 𝑋 𝑒 𝑍=𝑚𝑎𝑡𝑟𝑖𝑧𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑖𝑛𝑐𝑖𝑑ê𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑜𝑠 𝑒𝑓𝑒𝑖𝑡𝑜𝑠 𝑓𝑖𝑥𝑜𝑠 𝑒 𝑎𝑙𝑒𝑎𝑡ó𝑟𝑖𝑜𝑠, 𝑟𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑡𝑖𝑣𝑎𝑚𝑒𝑛𝑡𝑒. O modelo completo pode ser representado em notação matricial ...

22 Biometria dos tambaquis (Colossoma macropomum)ETAPAS: Figura 10. Representação do comprimento total em Tambaqui. Fonte: Adaptado de .

23 Fonte: Arquivo pessoal.Figura 11. Captura dos peixes com rede de arrasto para realização da biometria. Fonte: Arquivo pessoal.

24 Figura 12. Seringa e chip de implantação.Fonte: Chips medem pouco mais de um centímetro e possuem um código de barras único Fonte: Arquivo pessoal. Fonte: Arquivo pessoal. Figura 12. Seringa e chip de implantação.

25 Figura 13. Implantação e leitor de chip.Chips medem pouco mais de um centímetro e possuem um código de barras único Figura 13. Implantação e leitor de chip. Fonte: Arquivo pessoal.

26 Fonte: Arquivo pessoal.Figura 14. (A) Tripé com a balança de pesagem; (B) Tambaqui sendo pesado, com o auxílio de um saco plástico. Fonte: Arquivo pessoal.

27 Fonte: Arquivo pessoal.Figura 15. (A) Fita métrica para medir o comprimento total; (B) Aferição do comprimento corporal. Fonte: Arquivo pessoal.

28 Figura 16. Planilha de coleta de dados da biometria.Fonte: Arquivo pessoal.

29 Reprodução dos tambaquis (Colossoma macropomum)ETAPAS: Técnica de hipofisação  extrato bruto de hipófise de carpa; Seleção dos reprodutores e matrizes  sucesso no processo de indução, na maturação final e desova; Machos  observar através de uma leve pressão abdominal se haverá espermiação; Fêmeas  observar o abdômen dilatado e macio e a papila genital intumescida e avermelhada. LIMA et al. (2013b).

30 Fonte: Arquivo pessoal.O processo de preparação do extrato de hipófise foi semelhante para as duas espécies em questão, a Matrinxã e o Tambaqui, sendo necessária à maceração completa da hipófise em um gral de porcelana, chamado popularmente de cadinho, com o auxílio de um pistilo (haste de ponta arredondada). Para facilitar o processo, foi adicionado três gotas de glicerina (Figura 15). Após a hipófise estar macerada, a mesma foi diluída em solução fisiológica 0,65% NaCl (cerca de 0,5 mL de soro para cada kg de peixe) (Figura 16). Figura 17. Extrato de hipófise utilizado na indução hormonal de peixes. Fonte: Arquivo pessoal.

31 O processo de preparação do extrato de hipófise foi semelhante para as duas espécies em questão, a Matrinxã e o Tambaqui, sendo necessária à maceração completa da hipófise em um gral de porcelana, chamado popularmente de cadinho, com o auxílio de um pistilo (haste de ponta arredondada). Para facilitar o processo, foi adicionado três gotas de glicerina (Figura 15). Após a hipófise estar macerada, a mesma foi diluída em solução fisiológica 0,65% NaCl (cerca de 0,5 mL de soro para cada kg de peixe) (Figura 16). Figura 18. (A) Kit para o processo de preparo do extrato de hipófise para a indução hormonal; (B) Glicerina utilizada no processo de maceração da hipófise. Fonte: Arquivo pessoal.

32 Cálculo da dose hormonal a ser aplicada é baseado no peso do peixe; Fêmeas  2 doses: 1ª dose: 0,5 mg/kg 2ª dose: 5,0 mg/kg Machos  depende do quão apto o animal se encontra: 2ª dose: 2,5 mg/kg ou Dose única: 2,5 mg/kg OBS: Antes da aplicação das doses e da extrusão de fêmeas e machos, os animais eram anestesiados com óleo de cravo para evitar o estresse

33 Fonte: Arquivo pessoal.O processo de preparação do extrato de hipófise foi semelhante para as duas espécies em questão, a Matrinxã e o Tambaqui, sendo necessária à maceração completa da hipófise em um gral de porcelana, chamado popularmente de cadinho, com o auxílio de um pistilo (haste de ponta arredondada). Para facilitar o processo, foi adicionado três gotas de glicerina (Figura 15). Após a hipófise estar macerada, a mesma foi diluída em solução fisiológica 0,65% NaCl (cerca de 0,5 mL de soro para cada kg de peixe) (Figura 16). Figura 19. (A) Processo de preparação e maceração da hipófise; (B) Diluição da hipófise em solução fisiológica 0,65% NaCl. Fonte: Arquivo pessoal.

34 Figura 20. Aplicação do hormônio. Fonte: Arquivo pessoal.

35 Após a 2ª dose  contagem “hora-grau”; 1ª dose  estimular os receptores hormonais e aumentar a ação da 2ª dose; Após a 2ª dose  contagem “hora-grau”; HORA-GRAU  é possível conhecer em quanto tempo, após a aplicação do hormônio, as fêmeas estarão preparadas para desovar; Fêmeas quando próximas a “hora-grau” são avaliadas quanto à qualidade de seus ovócitos. A administração da primeira dose é necessária para estimular os receptores hormonais e aumentar a ação da segunda dose, sendo que após a última dose, inicia-se a contagem de uma medida chamada “hora-grau”, que consiste na somatória da temperatura da água em que os reprodutores estão a cada hora que passa (LIMA et al., 2013b). Essa medida é importante, pois é possível conhecer aproximadamente em quanto tempo, após a aplicação do hormônio, as fêmeas estarão preparadas para desovar. Cada espécie de peixe possui um valor diferente (Tabela 2), quando o valor estiver próximo ao de referência para a espécie (Matrinxã ou Tambaqui), as fêmeas foram avaliadas quanto à qualidade de seus ovócitos, através de uma leve pressão no abdômen verificando a sua liberação. Tabela 2. Valor de referência de hora-grau das espécies que foram realizadas a reprodução Espécie Temperatura da água (°C) Hora-grau Tambaqui (Colossoma macropomum) 27 290 Fonte: Adaptado de LIMA et al. (2013b).

36 Fonte: Arquivo pessoal.A coleta dos ovócitos e do esperma foi realizada em um recipiente seco (bacia), evitando-se o contato com a água, pois os ovócitos quando hidratados, fecham o orifício por onde o espermatozoide fecunda o óvulo, chamado de micrópila, e também, ocorrerá à inatividade dos espermatozoides em virtude da elevada concentração de potássio no sêmen, ou seja, a hidratação ativa o esperma e sua motilidade diminui com o tempo e a capacidade de fecundação reduz, consequentemente, a região genital dos animais devem estar seca. A extrusão da fêmea foi realizada primeiro, através de pressão do ventre na direção ântero-posterior, até a visível remoção da máxima quantidade possível de ovócitos (Figura 18A e 18C). Posteriormente, realizou-se a extrusão do macho, através da compressão em mesma direção da fêmea, até a liberação do sêmen em cima dos ovócitos, que foram misturados suavemente com o auxílio de uma espátula (Figura 18B e 8D). Figura 21. Extrusão de uma fêmea e extrusão de um macho de tambaqui sobre os ovócitos da fêmea. Fonte: Arquivo pessoal.

37 Fonte: Arquivo pessoal.Após a mistura dos gametas coletados foi lentamente adicionado água, para que ocorre-se a ativação dos espermatozoides, possibilitando a fecundação dos óvulos antes dos fechamento da micrópila (Figura 19A e 19B). Os ovos formados foram levados para as incubadoras em formato cilíndrico-cônicas com fluxo de água contínuo, onde permaneceram em suspensão durante o período inicial da larvicultura (Figura 19C). Figura 22. Hidratação e incubadora em formato cilíndrico-cônica com fluxo de água contínuo. Fonte: Arquivo pessoal.

38 Fonte: Arquivo pessoal.Após 24 horas, as larvas foram transferidas das incubadoras para uma caixa de 2000L, com o auxílio de baldes de aclimatação (contendo “redes” de proteção para evitar a saída das larvas), pois a água das caixas estavam com temperatura inferior à água das incubadoras (Figura 20A, 20B e 20C). Ocorreria a observação das larvas no microscópio, para analisar a sua formação e decidir o melhor momento para que as mesmas fossem transferidas para o tanque escavado. Após um período de aproximadamente 30 horas em que as larvas estavam nas caixas, observou-se que estava ocorrendo “canibalismo” entre as mesmas, portanto, a transferência deveria acontecer. O período indicado para isso é à noite, onde a temperatura está mais amena, a água do tanque escavado passa por processo de avaliação quanto ao seu pH, dureza, alcalinidade e temperatura. O transporte das larvas ocorreu através de sacos plásticos com oxigênio (Figura 20D). Figura 23. “Caixas” para onde as larvas são transferidas após saírem das incubadoras. Fonte: Arquivo pessoal.

39 Figura 24. Balde de transferência e aclimatação das larvas.Após 24 horas, as larvas foram transferidas das incubadoras para uma caixa de 2000L, com o auxílio de baldes de aclimatação (contendo “redes” de proteção para evitar a saída das larvas), pois a água das caixas estavam com temperatura inferior à água das incubadoras (Figura 20A, 20B e 20C). Ocorreria a observação das larvas no microscópio, para analisar a sua formação e decidir o melhor momento para que as mesmas fossem transferidas para o tanque escavado. Após um período de aproximadamente 30 horas em que as larvas estavam nas caixas, observou-se que estava ocorrendo “canibalismo” entre as mesmas, portanto, a transferência deveria acontecer. O período indicado para isso é à noite, onde a temperatura está mais amena, a água do tanque escavado passa por processo de avaliação quanto ao seu pH, dureza, alcalinidade e temperatura. O transporte das larvas ocorreu através de sacos plásticos com oxigênio (Figura 20D). Figura 24. Balde de transferência e aclimatação das larvas. Fonte: Arquivo pessoal.

40 Programa de Pós-Graduação em Zootecnia

41 ATIVIDADE Grupos de até 4 pessoas;Material de apoio  “Delineamento de programas de melhoramento genético de espécies aquícolas no Brasil / Ricardo Pereira Ribeiro e Ângela Puchnick Legat - Teresina:Embrapa Meio-Norte, 2008. Elaborar um Programa de Melhoramento Genético em Peixes.