1 SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES1065. Inmunología Aplicada Enseñanza Experimental SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES

2 SEPARACIÓN DE CÉLULAS MONONUCLEARES POR GRADIENTEEstratificar 5 mL sangre + 3 mL Ficoll-Hypaque Diluir 1:2 con BSS Toma de muestra 5 mL sangre con heparina Plasma Cél mononucleares Ficoll-Hypaque Paquete celular Centrifugar a 1500 rpm x 45 min

3 Conteo celular en cámara de Neubauer

4 ROSETAS E 40X Adicionar 3 mL de BSS a las células mononuclearesLavar a 1500 rpm x 10min X 3 veces Ajustar concentración a 4x106 cel/mL Resuspender en 0.5 mL de BSS Hacer dilución 190mL azul tripano + 10 mL susp,células GRC Realizar la lectura a 40X Mantener a 4°C durante 1 hora Centrifugar a 500 rpm x 3min Incubar a 37°C durante 15 minutos 0.25 mL de susp. 0.25 mL GRC 1%

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