1 SINDROMES CON HEMOGLOBINA SServicio de Hematología- Oncología Hospital de Pediatría “Prof. Dr. J. P. Garrahan” Buenos Aires, Argentina.

2 HEMOGLOBINA NORMAL Cromosoma 11-Familia de genes de b-globinagG gA  b  b 5’ 3’ Cromosoma 16-Familia de genes de a-globina 2 1  2  1 2 1 1 5’ 3’

3 DESARROLLO EMBRIONARIOEmbrión Hb Gower 1:22 Hb Gower 2:22 Hb Portland: 22 Feto: Hb F: 2G2 Hb F: 2A2 Vida extrauterina Hb A: 2β2 Hb A2: 22

4 HEMOGLOBINA NORMAL 2-3DPG . a1b1 a2b1

5 HEMOGLOBINOPATÍAS Clasificación Variantes estructurales:Hemoglobinas con solubilidad alterada Hemoglobinas inestables Hemoglobinas con afinidad alterada por el O2 Metahemoglobinas Sindromes talasémicos:  talasemia  talasemia db talasemia y Persistencia hereditaria de hemoglobina fetal Hemoglobinopatías talasémicas

6 MUTACIÓN b GLOBINA Codón 6 GAG (glutámico)  GTG (valina)HEMOGLOBINA S MUTACIÓN b GLOBINA Codón 6 GAG (glutámico)  GTG (valina)

7 SÍNDROMES CON Hb S

8 SÍNDROMES CON Hb S Desórdenes con Hb S asintomáticos:Portador de Hb S (βA/ βS) Doble heterocigota Hb S y PHHF (βS/ βPHHF) Desórdenes con Hb S sintomáticos: Doble heterocigota Hb S y HB C (βS/ βC) Doble heterocigota Hb S y β talasemia (βS/ ββ) Doble heterocigota Hb S y β+ talasemia (βS/ β+) Homocigota Hb S (βS/ βS) Doble heterocigota Hb S y β0talasemia (βS/ β0) Doble heterocigota Hb S y Hb D PUNJAB (βS/ βD) Doble heterocigota Hb S y Hb O ARAB (βS/ βO)

9 SÍNDROMES CON Hb S Criterios básicos para iniciar screeningNoción de la frecuencia de las diferentes patologías para la población en estudio Procedencia geográfica del paciente y sus ancestros Evitar estudiar a pacientes transfundidos Estudiar simultáneamente: Paciente Su familia Un control normal

10 SÍNDROMES CON Hb S Pruebas de laboratorio:Hemograma completo con recuento de reticulocitos Marcadores de hemólisis (LDH, Haptoglobina, Bt/Bd) Electroforesis de Hemoglobinas a pH alcalino Test de falciformación Test de isopropanol Cuantificación de hemoglobinas Metabolismo del hierro Estudio familiar Estudios adicionales: Electroforesis a pH ácido

11 Electroforesis de hemoglobina en acetato de celulosa, pH alcalinoSÍNDROMES CON Hb S Electroforesis de hemoglobina en acetato de celulosa, pH alcalino

12 Electroforesis de hemoglobina en gel de agar, pH alcalinoSÍNDROMES CON Hb S Electroforesis de hemoglobina en gel de agar, pH alcalino Hb A Hb F Hb S/D/G

13 TEST DE FALCIFORMACIÓNPaciente

14 Electroforesis de hemoglobina en gel de agar, pH ácidoLABORATORIO Electroforesis de hemoglobina en gel de agar, pH ácido F A S C A2 D G Lepore

15 SÍNDROMES CON Hb S Cuantificación de Hemoglobinas:Cuantificación de Hb A2: % Cuantificación de Hb F: <1% Cuantificación de Hb S: %

16 SÍNDROMES CON Hb S Homocigota S/S Anemia normo o macrocítica:Hb: 7-8g/dl VCM: 85-95fl CHCM: normal o aumentado Anisopoiquilocitosis, hipocromía Drepanocitos Policromatofilia Cuerpos de Howell-Jolly Eritroblastos circulantes

17 SÍNDROMES CON Hb S Laboratorio general:Reticulocitos aumentados: 8-10% LDH aumentada Haptoglobina: disminuída Bilirrubina total aumentada a expensas de indirecta Ferritina: normal o aumentada

18 Electroforesis de hemoglobina en acetato de celulosa, pH alcalinoLABORATORIO Electroforesis de hemoglobina en acetato de celulosa, pH alcalino

19 Test de falciformaciónSÍNDROMES CON Hb S Test de falciformación

20 SÍNDROMES CON Hb S Cuantificación de Hemoglobinas:Cuantificación de Hb A2: normal Cuantificación de Hb F: aumentada en forma variable Cuantificación de Hb S: mayor al 80%

21 SÍNDROMES CON Hb S Estudio familiar Hb A/S Hb A/S Hb S/S

22 Doble heterocigota S/bSÍNDROMES CON Hb S Doble heterocigota S/b Anemia microcítica hipocrómica: Hb: 8 -10g/dl VCM: fl HCM: disminuído Anisopoiquilocitosis Drepanocitos Policromatofilia Dianocitos Cuerpos de Howell-Jolly Eritroblastos circulantes

23 SÍNDROMES CON Hb S Laboratorio general: Reticulocitos aumentados: 4-8%LDH: aumentada Haptoglobina: disminuída Bilirrubina total: aumentada a expensas de indirecta Ferritina: normal o aumentada

24 Electroforesis de hemoglobina en gel de agar, pH alcalinoLABORATORIO Electroforesis de hemoglobina en gel de agar, pH alcalino

25 TEST DE FALCIFORMACIÓNPaciente

26 SÍNDROMES CON Hb S Cuantificación de Hemoglobinas:Cuantificación de Hb A2: 4-6% Cuantificación de Hb F: aumentada en forma variable Cuantificación de Hb S: variable (>50%) Si la mutación es b+ existirá Hb A del 5-45%

27 SÍNDROMES CON Hb S Estudio familiar Anemia microcítica hipocrómica:Alto recuento de eritrocitos VCM disminuído(<78 fl) HCM disminuído(<27pg) ADE normal Dianocitos y punteado basófilo Ẽ a pH alcalino: Bandas: A/A2 Hb A2: >3.5% Metabolismo del hierro normal

28 SÍNDROMES CON Hb S b talasemia Hb S Hb S/ b talasemia

29 Doble heterocigota S / C (Hb C  6glu  lys )SÍNDROMES CON Hb S Doble heterocigota S / C (Hb C  6glu  lys ) Anemia microcítica: VCM disminuído CHCM aumentada Dianocitos Células densas Drepanocitos Policromatofilia

30 SÍNDROMES CON Hb S Laboratorio general: anemia hemolítica menor que en S/S Reticulocitos aumentados LDH aumentada Haptoglobina disminuída Bilirrubina total aumentada a expensas de indirecta Ferritina: normal o aumentada

31 LABORATORIO Electroforesis de Hb en acetato de celulosa a pH 8,4:

32 SÍNDROMES CON Hb S Cuantificación de Hemoglobinas:Cuantificación de Hb A2 + HbC: 40-50% Cuantificación de Hb F: aumentada en forma variable Cuantificación de Hb S: 40-50%

33 Electroforesis de Hb en acetato de celulosa a pH 8,4:LABORATORIO ESTUDIO FAMILIAR Electroforesis de Hb en acetato de celulosa a pH 8,4:

34 SÍNDROMES CON Hb S ESTUDIO FAMILIAR HbC Hb S Hb S/C

35 LABORATORIO Electroforesis de Hb en acetato de celulosa a pH 8,4:

36 HEMOGLOBINA LEPORE Alto recuento de eritrocitos VCM disminuídoHCM disminuído ADE normal Dianocitos Bandas: A/X/A2 Hb A2: normal o disminuída Banda X: hasta 15% Test de falciformación: Neg Metabolismo del hierro normal

37 SÍNDROMES CON Hb S BIOLOGÍA MOLECULAR

38 Variantes de Hbs con movilidad electroforética  HbSElectroforesis a pH alcalino pH ácido Sickling/ Isopropanol Hb D–Los Angeles  121 glu  gln S A Neg/ Neg Hb G-Philadelphia  68 asn  lys Hb Hasharon a 47 asp  lys Neg/ Pos Hb Lepore db fusión Ligeramente anódica a S