1 Techniki mikroskopowe1) standardowa mikroskopia optyczna zdolność rozdzielcza – kryterium Abbego apertura numeryczna NA = n sin(α) n – współczynnik załamania ośrodka α – połowa wartości apertury kątowej obiektywu. rozdzielczość w powietrzu (n=1) NA < 1, ale w różnych cieczach NA może być > 1 (nwody=1,33, noleju=1,5) Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

2 Kwestia rozdzielczościkryterium Rayleigha Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

3 2) mikroskop fluorescencyjnyWojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

4 3) mikroskop konfokalnywiązka laserowa przysłona skaner wiązki obiektyw detektor - fotodioda Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

5 konfokalna rejestracja pojedynczych obiektówsprawdzanie czy emituje pojedyncze centrum – pomiar funkcji korelacji Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

6 Pokonanie ograniczenia dyfrakcyjnegonowe techniki mikroskopii optycznej transfer energii – FRET (Foerster Resonance Energy Transfer) zachodzi na b. małych dystansach między różnymi cząsteczkami  duża zdolność rozdzielcza (rzędu kilku – 10 nm) Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

7 STimulated Emission Depletion (STED)silne światło laserowe nasyca przejście i eliminuje emisję spont. (emission depletion) odpowiednio ukształtowana wiązka (z „dziurką”) nie nasyca centrum Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

8 Przykład subdiffraction resolution (S. Helm, Göttingen)Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5

9 Metody nieliniowe a) STED b) absorpcja wielofotonowa  mała absorpcjadługich fal (nierezonansowa) lepsza selektywność i rozróżnienie między falą wzbudzającą a emitowaną Wojciech Gawlik, Metody Optyczne w Medycynie 2010/11 - wykł. 5