1 Tincion Histologica “Kinesiologia”Professor: Verónica Pantoja . Lic. MSP. “Kinesiologia” Reconocer las principales funciones y características fisiológicas de la sangre y relación con el sistema inmune.. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

2 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Técnica Histológica Fijación Deshidratación Aclaramiento Inclusión Corte Tinción Montaje Seminario Anterior IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

3 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Colorantes ¿Por qué colorear una muestra? Los diversos elementos de los tejidos poseen prácticamente el mismo índice de refracción, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una tarea difícil. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

4 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Tipos de Colorantes Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula. Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

5 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Tipos de Coloraciones Directas: se producen por inmersión en el baño colorante. Indirectas: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

6 Fundamentos Químicos de la ColoraciónClasificación colorantes según afinidad: Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante activo es una base coloreada que se combina con los ácidos nucleicos. Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su componente activo es un ácido coloreado que se combina con el citoplasma. Colorantes neutros, tanto el ácido como la base son coloreadas. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

7 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Colorantes básicos ANILINA+ Cl- Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS CARBOXILO de las proteínas. La reacción de estos grupos varía según el pH. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

8 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Colorantes ácidos Na+ ANILINA- Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes texturales por medio de enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. Las anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los grupos amino ionizados de las proteínas. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

9 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Entonces: Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son basófilos: La Heterocromatina y los Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados. Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados. Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. Eosina) son acidófilos: La mayor parte del citoplasma no especializado. Filamentos Citoplasmáticos. Fibras extracelulares. Todos estos debidos a grupos Amino ionizados. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

10 Tinción (coloración) de cortesDiferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

11 Tinción (coloración) de cortesIPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

12 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Hematoxilina-Eosina Técnica de tinción más usada. Hematoxilina: Colorante natural. Propiedades similares a las anilinas básicas. Tiñe todas las estructuras celulares, pero principalmente el núcleo (Histonas). Eosina: Colorante ácido. Acción es la de una anilina ácida. Tiñe ppalmente citoplasma celular. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

13 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Cortes de piel Tinción Hematoxilina-Eosina IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

14 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Tinciones Especiales IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

15 Tinciones para AmiloideRojo Congo (cortes ±30 mm) H/E IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

16 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Tinciones para Amiloide Birrefringencia IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

17 Bacterias c c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas a d ba y b Gram positivos: tinción azul d FITE: bacilos ácido resistentes se tiñen rojo IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

18 Bacterias II Ambas placas con tinción Ziehl NeelsenBacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

19 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Calcio Von Kossa-Azul Toluidina Von Kossa: depósitos de calcio Se tiñen café oscuro-negro IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

20 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Colágeno I: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural b b e a a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo e Van Gieson: colágeno I rojo d c IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

21 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Colágeno III: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular Impregnación con Nitrato de Plata: fibras de reticulina se tiñen negras IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

22 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Eosinófilos Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

23 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Fibras elásticas HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa: fibras de coloración pardo oscura IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

24 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Fibrina ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claro También PAS IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

25 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Hongos b b b PAS para Criptococo (rojo) a a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea c Tinción de PAS evidenciando Blastomicosis c c IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

26 Lípidos sólo en tj fijado en formalina + cortes por congelaciónb b Sudan III: adipocitos rojos a a Sudan IV: adipocitos anaranjados c IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos

27 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Mastocitos ambas, Tinción con Azul de Toluidina: gránulos de Mastocitos azul-púrpura (metacromasia) IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

28 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Mastocitos ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de los Mastocitos son teñidos púrpura IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

29 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Melanina ambas, Tinción de Fontana Masson pigmento melánico se tiñe negro IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

30 Principales colorantesIPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

31 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Tricrómico de Masson Principal Uso: Colágeno. Tiñe: Colágeno Verde. Núcleo, músculo y nervios  Rojo oscuro. Citoplasma  amarillo IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

32 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Van Gieson Principal Uso: Tejido Fibroso Tiñe: Colágeno  rojo. Núcleo  azul negro Músculos, nervios  amarillos (+Verhoeff) fibras elásticas  negro IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

33 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014PAS Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal. Tiñe: Glucógeno  Diastasa lábil. MPS neutros y Paredes micóticas  Diastasa resistentes. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

34 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Reacción positiva para glucógeno y polisacáridos neutros. Reacción positiva sólo para polisacáridos neutros. + DIASTASA IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

35 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Azul de toluidina Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos Tiñe Mucopolisacáridos ácidos  Purpura metacrómico. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

36 IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014Giemsa Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, leishmanias, médula ósea Tiñe: Gránulos mastocitarios, Mucopolisacaridos ácidos  Púrpura. Eosinófilos, leishmanias  Rojo. Eosinófilos en mucosa gástrica IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

37 Orceína ácida de Pinkus/GiemsaPrincipal Uso: Fibras elásticas. Tiñe: Fibras elásticas  Pardo oscuro. IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

38 ¿PREGUNTAS, DUDAS, COMENTARIOS?IPCHILE - Kinesiologia DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014