1 TP N° 4-5 COLORACIONES I y II ANAEROBIOSIS RECUENTO Microbiología Tecnicatura Universitaria en Esterilización 2016

2 Formas de las bacterias

3 Diferentes agrupaciones de cocos estreptococos sarcinas estafilococos diplococos

4 Diferentes morfologías en bacilos

5 Espirilo Espiroqueta

6 OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS Examen en fresco (vivos sin teñir) Técnicas de coloración

7 COLORANTES -Son compuestos orgánicos y cada tipo de colorante suele tener afinidad por determinadas estructuras celulares. -Colorantes catiónicos: - Son sales que en medio acuoso: Cl AM ---  Cl - + AM + (azul de metileno) se combinan con compuestos celulares con carga negativa, ej.: ácidos nucleicos y polisacáridos ácidos.

8 COLORACIÓN VITAL o PREPARADO EN FRESCO Permite visualizar si los microorganismos son: -móviles -inmóviles En qué consiste?

9 TÉCNICAS DE COLORACIÓN Cultivos bacterianos: 18 - 24 h Preparación del frotis 1.Secado 2.Fijación -Métodos físicos: calor -Métodos químicos 3. Enfriado 4.Coloración (simple o compuesta) 5. Lavado 6.Secado 7.Observar en microscopio 100x con aceite de inmersión Fijación: preserva las estructuras y las hace más visibles

10 COLORACIÓN de GRAM Divide a las bacterias en 2 grandes grupos: -Gram positivas (violeta) -Gram negativas (rojizas)

11 Coloración de Gram

12 Bacterias y esporas según la coloración de Gram

13 TINCION DE ZIEHL NEELSEN Para bacterias ácido alcohol resistentes (BAAR) Ej.: Mycobacterium tuberculosis Estructura de la pared

14 COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN (para BAAR) Frotis. Fucsina Ziehl concentrada, (calentar con hisopo encendido hasta emisión de vapores durante 10 min) Alcohol-ácido Lavar Azul de metileno Lavar-Secar Observar 100x

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16 ANAEROBIOSIS 1.Qué es? 2. Sistemas de incubación para anaerobios 3.Métodos para generar anaerobiosis (leer por Guía de TP)

17 RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES 1°. Diluir la muestra 2°. Sembrar

18 -Por extensión en superficie: 1°) la muestra 2°) el medio de cultivo - Por placa vertida: 1°) la muestra 2°) el medio de cultivo

19 Cálculo: (elegir la dilución donde hay 30-300 colonias) 10 -1 : 800 / 600 10 -2 : 70 / 90  10 -3 : 6 / 4 Promedio: 80 col (A) A x inv. del volumen sembrado x inv. de la dilución = B ufc/ml Recuento de microorganismos viables