1 Uniwersytet WarszawskiGenetyka ogólna wykład dla studentów II roku biotechnologii Andrzej Wierzbicki Uniwersytet Warszawski Wydział Biologii

2 Ewolucja Historię życia kształtuje proces ewolucji. Ewolucja to losowa zmienność i ukierunkowana selekcja. Ewolucja to zmiana częstości alleli i powstawanie nowych genów.

3 Specjacja Mechanizmy izolacji gatunków behawioralna przestrzennaczasowa mechaniczna gametyczna nieżywotność mieszańców sterylność mieszańców zięby Darwina

4 Jak powstało życie? Problem pierwszego organizmusymulacja warunków z przed 4 miliardów lat odgadywanie jego cech na podstawie cech dzisiejszych organizmów teoria świata RNA

5 Podsumowanie Gatunki powstają dzięki izolacji. Istnieją ciekawe teorie na temat powstania życia.

6 Metody genetyki molekularnejWykład 11 Metody genetyki molekularnej Jak ciąć i łączyć cząsteczki DNA? Co to jest PCR? Co to jest hybrydyzacja? Do czego służy immunodetekcja?

7 Elektroforeza DNA Elektroforeza DNA umożliwia rozdział cząsteczek ze względu na wielkość pole elektryczne - DNA się porusza żel stawia opór proporcjonalny do wielkości cząsteczki małe cząsteczki DNA wędrują szybko, duże wolno prążki - grupy cząsteczek o identycznej długości

8 Elektroforeza DNA 1 2 3

9 Plazmidy Plazmidy - najczęściej stosowane wektory, umożliwiają namnażanie cząsteczek DNA koliste zdolne do autonomicznej replikacji mają marker oporności mają różne sekwencje pomocnicze Izolacja plazmidowego DNA wykorzystanie zjawiska szybkiej renaturacji superhelikalnych cząsteczek DNA

10 Trawienie restrykcyjneEnzymy restrykcyjne enzymy rozpoznające motyw sekwencyjny i przecinające DNA 5’-GAATTC-3’ 3’-CTTAAG-5’ 5’-G 3’-CTTAA AATTC-3’ G-5’ EcoRI 5’-AAGCTT-3’ 3’-TTCGAA-5’ 5’-A 3’-TTCGA AGCTT-3’ A-5’ HindIII 5’-GGTACC-3’ 3’-CCATGG-5’ 5’-GGTAC 3’-C C-3’ CATGG-5’ KpnI

11 Trawienie restrykcyjneEnzymy restrykcyjne

12 Trawienie restrykcyjneMapy restrykcyjne EcoRI HindIII 0,5kb 1kb EcoRI + HindIII nie trawione HindIII EcoRI EcoRI 1,5kb 1kb 4kb 2kb EcoRI 1,5kb 1kb 0,5kb

13 Łączenie cząsteczek DNAUmiejętność cięcia i łączenia umożliwia prawie dowolne manipulacje z DNA ligacja ligacja

14 Łączenie cząsteczek DNAZapobieganie ligacji plazmidu bez wstawki dwa różne lepkie końce selekcja na białe i niebieskie AATTC...GGTAC G...C ...G ...CTTAA C... CATGG...

15 Łączenie cząsteczek DNA

16 PCR Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)polimeraza DNA zaczyna syntezę od startera dwa startery + polimeraza - podwojenie DNA flankowanego przez startery powtarzanie przez denaturację i renaturację - uzyskanie DNA w dużej ilości polimeraza termostabilna Taq

17 PCR PCR w praktyce wybór starterów (temperatura denaturacji i komplementarność) matryca (DNA, który będzie amplifikowany) nastawienie reakcji prowadzenie reakcji rozdział w żelu matryca startery dNTP bufor Taq 94º - denaturacja 55º-70º - przyłączanie starterów 72º - wydłużanie