1 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz Predominio de bacterias proteolíticas en un digestor de RSU a escala real mediante técnicas de secuenciación masiva Juliana Cardinali-Rezende, Patricia Rojas, José L. Sanz Dpto. de Biología Molecular, Universidad Autónoma de Madrid, España

2 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz Mala práctica: vertedero incontrolado Mala práctica: vertedero incontrolado Solución ideal: biodigestión fracción orgánica (biometanización) + compostaje Solución ideal: biodigestión fracción orgánica (biometanización) + compostaje Práctica aceptable: vertedero controlado (sanitary landfill) Práctica aceptable: vertedero controlado (sanitary landfill) Los Residuos sólidos urbanos (RSU) son un grave problema a escala mundial. Soluciones:

3 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz Planta de Biometanización Las Dehesas

4 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz 12 m de altura 35°C pH 7.0 30-40% sólidos TR = 100 dias CO = 50-100 ton/dia Muestras:. DMSW 1 - Mayo / 2009 (arrancado). DMSW 2 - Mayo / 2011 (estado estacionario)

5 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz

6 ANALISIS DE SECUENCIAS 16S rRNA Primers de fusión adaptador identificador múltiple primers específicos Adaptador B-27F Adaptador A-MID1-518R (MSW1) Adaptador A-MID2-518R (MSW2)

7 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz

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9 118.392 16S rDNA lecturas 118.392 16S rDNA lecturas 35.981(DMSW1) y 18,290 (DMSW4) 35.981(DMSW1) y 18,290 (DMSW4) longitud media: 490 pb longitud media: 490 pb DMSW1DMSW4 ReadsOTUsReadsOTUs Total359814118182903699 Clasificadas (identidad  80%) 335743292146722880 Singleton y doubletons3142262627232289 14,8% secuencias 62 % OTUs 8,7% secuencias 80% OTUs

10 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz MSW1 Bacteroidetes 53,5% Thermodesulfobacteria 0,1% Proteobacteria 1,2% Actinobacteria 3,5%

11 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz MSW2 Actinobacteria 2,3% Erysipelotrichales 3%

12 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz DMSW1DMSW4 OTUGeneroSeqs%GeneroSeqs % 1Proteiniphylum1736051.71Fastidiosipila264018.00 2Gallicola586717.47Proteiniphilium150110.23 3Actinomyces9142.72Gallicola9686.60 4Vagococcus6962.07Actinomyces2341.59 5Clostridium XI3330.99Anaerosphaera1991.36 6Lactobacillus2660.79Paludibacter1170.80 7Leuconostoc1690.50Streptococcus560.38 8Pseudomonas850.25Vagococcus470.32 9Turibacter650.19Lactobacillus430.29 10Weisella660.20Anaerobacter290.20 11Streptococcus610.18Globicatella290.20 12Clostridium XII510.15Sacharofermentans280.19 13Desulfobulbus450.13Anaerotruncus260.17 14Tissierella430.13Clostridium XII180.12 Total seq. 33574 2602177.5014672593540.43

13 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz DMSW1DMSW4 OTUGeneroSeqs%GeneroSeqs % 1Proteiniphylum1736051.71Fastidiosipila264018.00 2Gallicola586717.47Proteiniphilium150110.23 3Actinomyces9142.72Gallicola9686.60 4Vagococcus6962.07Actinomyces2341.59 5Clostridium XI3330.99Anaerosphaera1991.36 6Lactobacillus2660.79Paludibacter1170.80 7Leuconostoc1690.50Streptococcus560.38 8Pseudomonas850.25Vagococcus470.32 9Turibacter650.19Lactobacillus430.29 10Weisella660.20Anaerobacter290.20 11Streptococcus610.18Globicatella290.20 12Clostridium XII510.15Sacharofermentans280.19 13Desulfobulbus450.13Anaerotruncus260.17 14Tissierella430.13Clostridium XII180.12 Total seq. 33574 2602177.5014672593540.43

14 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz Anaerobios, metabolismo fermentativo. Amplio predominio, en términos de covertura, de bacterias proteolíticas. Sistema poco equitativo. Diversidad de bacterias degradadoras de carbohidratos, con baja covertura y predominio de bacterias del ácido láctico. Pocas sintrofobacterias.

15 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz Elevada concentración de NH 4 + 4.000 mg/L 7.000 mg/L Baja generación de metano Inhibición de la glucolisis Acumulación de carbohidratos sin degradar Inhibición sintrofobacterias Inhibición metanogénesis Acumulación de ácidos grasos

16 XI DAAL – La Habana 24-27/nov./2014 José L. Sanz Para mejorar la mineralización de la FO-RSU e incrementar los rendimientos de metano, debería incluirse en el proceso una etapa de nitrificación- desnitrificación para reducir el amonio. GRACIAS POR SU ATENCIÓN